2.7. Purification and identification

2.7. Purification and identification of the antioxidant peptide
The FMS sample at 24 weeks (1 ml) was applied to a Sephadex G-10 column (4.0 cm i.d. 17.0 cm). The eluent was ultrapure water at a flow rate of 3 ml/min, and 1.5 ml of each fraction was collected andmonitored for absorbance at 215 nm. The eluted frac-tion demonstrating high absorbance at 215 nm was mixed with Wakosil 40C18 resin (Wako Tokyo, Japan) and then filtered. The freeze-dried filtrate was the non-adsorbed fraction. Two kinds of solutions eluted by 50% methanol and 100% methanol from Wakosil 40C18 resin were evaporated and dried using a rotatory evaporator, and each dried fraction was the 50% methanol fraction and the 100% methanol fraction, respectively. These three fractions were assayed for antioxidant activity against the OH-radical. The fraction with the highest antioxidant activity against the OH-radical in the three fractions obtained were then separated by HPLC (Prominence LC-20AT, Shimadzu; equipped with a Capcell pack MGII; 4.6 mm i.d. 150 mm, Shiseido) at a flow rate of 1.0 ml/min with a linear gradient of solvent A (0.05% formic acid in ultrapure water) and solvent B (acetonitrile with 0.05% formic acid) as follows: 0–32 min, 0–20% B; 32–40 min, 20–50% B; 40–44 min, 50–100% B; 44–52 min, 100–100% B; 52–60 min 100–0% B. Fractions were collected and assayed for antioxidant activity against the OH-radical. The active fraction was purified by HPLC analysis, which was repeated 3 times (1st-3rd-HPLC). LC–MS analysis (LC/MS-QP8000a, Shimadzu; equipped with an Atlantis dc column, 4.6 mmi.d. 150 mm,Waters) at a flow rate of 1.0 ml/min was used to determine the molecular mass of the purified fraction. The amino acid sequences of the detected peaks were analyzed using a protein sequencer (PPSQ-31A, Shimadzu).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 Puri ไอออนประจุบวก fi
และสายระบุของเปปไทด์สารต้านอนุมูลอิสระกลุ่มตัวอย่างFMS ที่ 24 สัปดาห์ที่ผ่านมา (1 มล.) ถูกนำไปใช้กับ Sephadex G-10 คอลัมน์ (4.0 ซม. รหัส 17.0 เซนติเมตร) ชะเป็นน้ำบริสุทธิ์ในอัตราโอ๊ยชั้น 3 มล. / นาทีและ 1.5 มิลลิลิตรส่วนแต่ละคนถูกเก็บ andmonitored สำหรับการดูดกลืนแสงที่ 215 นาโนเมตร ชะ frac-การแสดงให้เห็นถึงการดูดกลืนแสงในระดับสูงที่ 215 นาโนเมตรได้รับการผสมกับเรซิน Wakosil 40C18 (Wako กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) และจากนั้นไฟ ltered ltrate สายแห้งเป็นส่วนที่ไม่ดูดซับ สองชนิดของการแก้ปัญหาโดยการชะเมทานอล 50% และเมทานอล 100% จาก Wakosil 40C18 เรซินถูกระเหยและแห้งโดยใช้เครื่องระเหยสับเปลี่ยนและแต่ละส่วนแห้งเป็นส่วนเมทานอล 50% และส่วนเมทานอล 100% ตามลำดับ ทั้งสามเศษส่วนถูก assayed สำหรับสารต้านอนุมูลอิสระกับ OH รุนแรง ส่วนที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่สูงที่สุดเมื่อเทียบกับ OH-รุนแรงในสามเศษส่วนได้ถูกแยกออกแล้วโดย HPLC (รุ่งเรือง LC-20AT, Shimadzu; พร้อมกับ Capcell แพ็ค MGII; 4.6 มมรหัส 150 มิลลิเมตร, ชิเซโด้) ในอัตราโอ๊ยชั้นของ 1.0 มล. / นาทีด้วยการไล่ระดับสีเชิงเส้นของตัวทำละลาย A (0.05% กรดในน้ำบริสุทธิ์) และตัวทำละลาย B (acetonitrile กับ 0.05% กรด) ดังต่อไปนี้: 0-32 นาที, 0-20% B; 32-40 นาที, 20-50% B; 40-44 นาที, 50-100% B; 44-52 นาที, 100-100% B; 52-60 นาที 100-0% บีเศษส่วนถูกเก็บรวบรวมและ assayed สำหรับสารต้านอนุมูลอิสระกับ OH รุนแรง ส่วนการใช้งานที่ถูกไฟ Puri ed โดยการวิเคราะห์ HPLC ซึ่งถูกทำซ้ำ 3 ครั้ง (1-3-HPLC) การวิเคราะห์ LC-MS (LC / MS-QP8000a, Shimadzu; พร้อมกับคอลัมน์แอตแลนติ dc 4.6 mmi.d. 150 มิลลิเมตรน้ำ) ในอัตราโอ๊ยชั้น 1.0 มล. / นาทีถูกใช้ในการตรวจสอบมวลโมเลกุลของ Puri ส่วนเอ็ดสาย . ลำดับกรดอะมิโนของยอดเขาที่ตรวจพบถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้ซีเควนโปรตีน (PPSQ-31A, Shimadzu)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . การถ่ายทอดและแลกเปลี่ยน identi ภูริถ่ายทอดของสารต้านอนุมูลอิสระเปปไทด์
FMS ตัวอย่างที่ 24 สัปดาห์ ( 1 มล. ) คือใช้กับคอลัมน์ Sephadex g-10 ( 4.0 ซม. ประชาชน 17.0 ซม. ) ส่วนนี้คือน้ำที่บริสุทธิ์มากflโอ๊ยอัตรา 3 มล. / นาทีและ 1.5 ml ของแต่ละส่วนเพื่อ andmonitored สำหรับการดูดกลืนแสงที่ 215 นาโนเมตรมีตัวอย่าง frac tion แสดงการดูดกลืนแสงสูง 215 นาโนเมตร ผสมกับ wakosil 40c18 เรซิน ( ญี่ปุ่น Wako โตเกียว ) จากนั้นจึง ltered . แห้งแช่แข็งจึง ltrate คือไม่ดูดซับเศษส่วน สองชนิดของโซลูชั่นตัวอย่างด้วยเมทานอล 50% และเมทานอล 100% จาก wakosil 40c18 เรซินถูกระเหยและแห้งโดยใช้เครื่องระเหยซึ่งทำให้หมุนรอบ ,และแต่ละส่วนแห้งเป็น 50% เมทานอล 100% เศษส่วนเศษส่วนและเมทานอล ตามลำดับ ทั้งสามส่วนเป็นซีรั่มสำหรับฤทธิ์ต้านกับโอ้ หัวรุนแรง ส่วนที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูงสุด กับโอใน 3 ส่วนที่ได้แยกออกจากกันแล้วโดยวิธี HPLC ( โดด lc-20at Shimadzu , ; พร้อมกับ capcell แพ็ค mgii ; 4.6 mm ID150 มม. , Shiseido ที่flโอ๊ยอัตรา 1.0 มล. / นาที มีความลาดชันเชิงเส้นของตัวทำละลาย ( 0.05 % กรดในน้ำบริสุทธิ์มาก ) และตัวทำละลาย B ( ไน ) % กรด ) ดังนี้ 0 – 0 – 32 นาที 20 % B ; 32 – 40 นาทีที่ 20 – 50 % B ; 40 - 44 นาที 50 – 100 % B ; 44 – 52 นาที , 100 – 100 % B ; 52 – 60 นาที 100 – 0 % B . เศษส่วน คือข้อมูล สำหรับฤทธิ์ต้านเอนไซม์กับโอ้ หัวรุนแรง