Five hundred ml of a 120-h culture

Five hundred ml of a 120-h culture of S. koyangensis strainTN650 were centrifuged for 30 min at 10,000 × g to remove micro-bial cells. The supernatant containing extracellular protease wasused as the crude enzyme preparation and submitted to the fol-lowing purification steps. It was initially saturated up to 40%with solid (NH4)2SO4and then centrifuged at 10,000 × g for20 min. The obtained supernatant was saturated up to 60% withsolid (NH4)2SO4, re-centrifuged, resuspended in a minimal vol-ume of buffer A containing 10 mM NaCl (Buffer B), and dialyzedovernight against repeated changes of the same buffer. The sam-ple thus obtained was deposited on a Mono S Sepharose column(2.6 × 20 cm) previously equilibrated with 50 mM HEPES buffersupplemented with 3 mM CaCl2at pH 6. The proteins were elutedwith the same buffer containing an increasing concentration ofNaCl of 0–500 mM at a rate of 30 ml/h. Fractions of each peakwere collected manually and analyzed by measuring absorbanceat 280 nm and the proteolytic activity on casein. Pooled frac-tions containing protease activity were concentrated in centrifugalmicro-concentrators (Amicon Inc., Beverly, MA, USA) with 10-kDacut-off membranes and stored at −20◦C for further analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ห้าร้อย ml ของวัฒนธรรม 120-h ของ S. koyangensis strainTN650 ถูกเหวี่ยง 30 นาทีที่ 10,000 × g การเอาเซลล์ไมโคร bial ประกอบด้วย wasused รติเอสสารเป็นการเตรียมเอนไซม์ดิบ supernatant และส่งไป fol-ควายเหล็กขั้นตอนฟอก ก็เริ่มอิ่มตัวถึง 40% ด้วยไม้ (NH4) 2SO4and แล้วเหวี่ยงที่ 10,000 × g for20 นาที Supernatant ได้รับถูกอิ่มตัวขึ้นถึง 60% withsolid (NH4) 2SO4 การเหวี่ยง resuspended ในฉบับออฟฟิศน้อยที่สุดของบัฟเฟอร์ 10 มม.ที่มี NaCl (บัฟเฟอร์ B), และ dialyzedovernight กับทำซ้ำการเปลี่ยนแปลงของบัฟเฟอร์เดียวกัน สาม-ple จึง ได้ถูกฝากคอลัมน์ Sepharose S โมโน (2.6 × 20 ซม.) ก่อนหน้านี้ equilibrated กับ buffersupplemented HEPES 50 มม.กับ 3 มม. CaCl2at ค่า pH 6 Elutedwith บัฟเฟอร์เดียวกันที่ประกอบด้วยการ ofNaCl ความเข้มข้นเพิ่มขึ้น 0-500 มม.ในอัตรา 30 มิลลิลิตร/h. เศษ peakwere ละรวบรวมด้วยตนเอง และวิเคราะห์ โดยวัด absorbanceat 280 nm และกิจกรรมได้บนเคซีนโปรตีนได้ Pooled frac-ทุกระดับกิจกรรมรติเอสที่มีได้ใน centrifugalmicro-เครื่องบีบอัด (Amicon Inc. เบเวอร์ลี่ MA สหรัฐอเมริกา) กับ 10-kDacut ปิดเยื่อหุ้ม และเก็บไว้ที่ −20◦C สำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ห้าร้อยมล. ของวัฒนธรรม 120-H เอส koyangensis strainTN650 ถูกปั่นเป็นเวลา 30 นาทีที่ 10,000 × g เพื่อขจัดเซลล์ไมโคร Bial สารละลายที่มีน้ำย่อย extracellular wasused เป็นการเตรียมเอนไซม์และส่งไปยังขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ Fol-ควายเหล็ก มันก็อิ่มตัวแรกถึง 40% ที่มีความแข็ง (NH4) 2SO4and แล้วหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัม for20 นาที ใสรับได้อิ่มตัวถึง 60 withsolid% (NH4) 2SO4 อีกครั้งหมุนเหวี่ยง, resuspended ในน้อยที่สุดฉบับ-Ume ของบัฟเฟอร์ที่มีขนาด 10 MM โซเดียมคลอไรด์ (บัฟเฟอร์ B) และ dialyzedovernight กับการเปลี่ยนแปลงซ้ำของบัฟเฟอร์เดียวกัน แซม-PLE จึงได้ถูกเก็บไว้ในคอลัมน์โมโน S Sepharose (2.6 × 20 ​​ซม.) equilibrated ก่อนหน้านี้มีขนาด 50 มม HEPES buffersupplemented กับ 3 mm CaCl2at ค่า pH 6. โปรตีนเป็น elutedwith บัฟเฟอร์เดียวกันที่มีความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ ofNaCl 0-500 มิลลิในอัตรา 30 มล. / h เศษส่วนของแต่ละ peakwere เก็บรวบรวมและวิเคราะห์ด้วยตนเองโดยการวัด absorbanceat 280 นาโนเมตรและกิจกรรมโปรตีนเคซีนบน Pooled frac-tions มีกิจกรรมโปรติเอสมีความเข้มข้นใน centrifugalmicro-concentrators (Amicon อิงค์ Beverly, MA, USA) กับเยื่อ 10 kDacut ออกและเก็บไว้ที่-20◦Cสำหรับการวิเคราะห์ต่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

500 มิลลิลิตรของวัฒนธรรม 120-h S . koyangensis straintn650 อยู่ระดับ 30 นาทีที่ 10 × G เอาไมโคร bial เซลล์ ที่สามารถนำใช้เป็นโปรที่มีเอนไซม์และเตรียมส่งไปยัง fol lowing ขั้นตอนที่บริสุทธิ์ มันก็เริ่มอิ่มตัว ถึง 40% ของแข็ง ( NH4 ) 2so4and แล้วระดับที่ 10 ×กรัม for20 นาทีได้มีไขมันอิ่มตัวสูงถึง 60% withsolid ( NH4 ) 2so4 อีกครั้งที่ระดับ resuspended ใน Ume , Vol น้อยที่สุดของบัฟเฟอร์ประกอบด้วย 10 mM NaCl ( buffer b ) , และ dialyzedovernight กับการเปลี่ยนแปลงของซ้ำ บัฟเฟอร์เดียวกัน แซมเปิ้ลจึงได้รับฝากไว้บน Mono S เกี่ยวข้องคอลัมน์ ( 2.6 × 20 ซม. ) ก่อนหน้านี้ equilibrated กับ 50 มม. 3 มม. cacl2at ฮีเปส buffersupplemented pH 6 โปรตีนเป็น elutedwith บัฟเฟอร์เดียวกันที่มีการเพิ่มความเข้มข้นของ ofnacl 0 – 500 มิลลิเมตร อัตรา 30 มิลลิลิตร / ชั่วโมงเศษส่วนของแต่ละ peakwere รวบรวมด้วยตนเองและวิเคราะห์โดยการวัด absorbanceat 280 nm และกิจกรรมของโปรตีนในเซลล์ . รวม frac tions ที่มีกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอสมีความเข้มข้นใน centrifugalmicro concentrators ( amicon อิงค์ , เบเวอร์ลี , MA , USA ) กับ 10 kdacut ปิดเยื่อที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 C −◦สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป