Inhibition was measured according t

Inhibition was measured according to Alencar et al. (2003) and
Bezerra et al. (2005). Enzyme extracts were incubated during
30 min with different specific protease inhibitors (4 mM): PMSF
(phenyl-methyl-sulphonyl-fluoride), TPCK (tosyl-L-phenylalanylchloromethyl
ketone), TLCK (tosyl-L-lysine chloromethyl ketone)
and Benzamidine. After incubation time, 4 mM trypsin and chymotrypsin
specific substrates were added: BApNA (benzoyl arginine
p-nitroanilide) and Suc-Phe-p-Nan (succinyl phenylalanine
p-nitroanilide), respectively. The release of p-nitroaniline was followed
by an increase in absorbance at 405 nm. The enzyme and substrate blanks were similarly assayed without enzyme and substrate
solution, respectively. The 100% values of activities were
established without inhibitors.
2.7. Effect of pH
Protease activity was measured at different pH values under
standard assay conditions, with azocasein as a substrate. The enzymatic
activity was assayed at pH 6.5–12.5 with 0.1 M phosphate
buffer (pH 6.5–7.5), 0.1 M Tris–HCl buffer (pH 7.2–9.0) and 0.1 M
NaOH/glycine buffer (pH 8.6–12.5). The effect of pH on the stability
of the enzyme preparation was studied by incubating the enzyme
at 25 C for 30 min with the above buffers and the enzymatic activities
were measured as described above, at 25 C, using the
0.1 M NaOH/glycine buffer (pH 11.0).
2.8. Effect of temperature
The protease activity was assayed at various temperatures (25–
80 C) to determine the optimum temperature, at pH 11.0. In order
to establish the thermal stability, prior to enzymatic activity, the
enzyme preparation was incubated for 30 min at temperatures
ranging from 25 C to 80C. The incubated temperature of the
preparation was lowered to 25 C and its proteolytic activity
assayed.
2.9. Effect of oxidizing agent and surfactants
The hydrogen peroxide stability of the proteases from tambaqui
was investigated by incubating samples (600 lL) with H2O2
(600 lL) at concentrations of 5%, 10% and 15% at 40 C. Samples
(150 lL) were withdrawn at 15, 30 and 75 min intervals to establish
their activities (duplicates) on azocasein, and to compare them
to the non-treated sample. Stability with regard to ionic (saponin
and sodium choleate) and non-ionic surfactants (SDS, Tween 20
and Tween 80) was investigated by incubation in 1% solution concentrations
of surfactant (w/v) for 30 and 60 min at 40 C, after
which enzyme activity was assayed (Moreira, Albuquerque, Teixeira,
Porto, & Lima Filho, 2002).
2.10. Compatibility with commercial detergents
The protease at a concentration of 0.20 mg mL1 was incubated
at 40 C with commercially available detergents: Ala (Protec &
Gamble); Bem-te-vi (Alimonda); Omo Multi-Ação (UniLever)
and Surf (UniLever) to a final concentration of 7 mg of detergent
mL1. Samples (150 lL) were removed at 10 min intervals (total
period of 60 min). The residual proteolytic activity in each
sample was determined at 25 C, assayed and compared with the
control sample incubated at 40 C without detergent pH 11.0
(Moreira et al., 2002).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยับยั้งถูกวัดตาม Alencar et al. (2003) และBezerra et al. (2005) ได้รับการกกสารสกัดจากเอนไซม์ในระหว่างการ30 นาทีกับรตีเอสเฉพาะที่แตกต่างกัน (4 มม.): PMSF(ฟีนิลเมธิล-sulphonyl-ฟลูออไรด์), TPCK (tosyl-L-phenylalanylchloromethylคีโตน), TLCK (chloromethyl tosyl-L-ไลซีนคีโตน)และ Benzamidine หลังจากบ่มเวลา ทริปซิน 4 มม. และ chymotrypsinเพิ่มพื้นผิวเฉพาะ: BApNA (อาร์จินีน benzoylp-nitroanilide) และ Suc-เพ-p-น่าน (succinyl phenylalaninep-nitroanilide), ตามลำดับ รุ่น p nitroaniline ตามมาใน absorbance ที่ 405 nm เอนไซม์และพื้นผิวช่องว่างถูก assayed ในทำนองเดียวกัน โดยไม่มีเอนไซม์และพื้นผิวแก้ปัญหา ตามลำดับ ค่า 100% กิจกรรมได้ก่อตั้งขึ้น โดยสารยับยั้ง2.7. ผลของการวัดค่า pHกิจกรรมรติเอสที่มีวัดที่ค่า pH ต่างกันภายใต้เงื่อนไขทดสอบมาตรฐาน กับ azocasein เป็นพื้นผิว ที่เอนไซม์ในระบบกิจกรรมถูก assayed ที่ค่า pH 6.5 – 12.5 ฟอสเฟต 0.1 Mบัฟเฟอร์ (pH 6.5 – 7.5), 0.1 M ทริ – HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.2 – 9.0) และ 0.1 MNaOH/glycine บัฟเฟอร์ (pH 8.6 – 12.5) ผลของค่า pH เสถียรของเอนไซม์ เตรียมศึกษา โดยเอนไซม์ incubating25 c เป็นเวลา 30 นาทีกับบัฟเฟอร์ดังกล่าวข้างต้นและกิจกรรมเอนไซม์ถูกวัดตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ที่ 25 C ใช้การ0.1 M NaOH/glycine บัฟเฟอร์ (pH 11.0)2.8. ผลของอุณหภูมิกิจกรรมรติเอสถูก assayed ที่อุณหภูมิต่าง ๆ (25 –80 C) การตรวจสอบอุณหภูมิที่เหมาะสม ที่ pH 11.0 ในใบสั่งการสร้างความมั่นคงความร้อน เอนไซม์ ก่อนการเตรียมเอนไซม์ได้รับการกก 30 นาทีที่อุณหภูมิตั้งแต่ 25 C ถึง 80 c อุณหภูมิ incubated ของการเตรียมถูกลดลง 25 C และกิจกรรมของได้assayed2.9. ผลของสารแทนและ surfactantsไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เสถียร proteases จาก tambaquiมีการตรวจสอบ โดย incubating ตัวอย่าง (600 lL) กับ H2O2(600 lL) ที่ความเข้มข้น 5%, 10% และ 15% ตัวอย่าง 40 c(150 จะ) ถูกถอนที่ 15, 30 และ 75 นาทีช่วงเพื่อสร้างกิจกรรมของพวกเขา (ซ้ำ) azocasein และ การเปรียบเทียบตัวอย่างรักษาไม่ ความมั่นคงเกี่ยวกับไอออน (ซาโปนิและโซเดียม choleate) และไม่ใช่ไอออน surfactants (SDS แต่ 20และ 80 แต่) เป็นการตรวจสอบ โดยกกไข่ในความเข้มข้นในการแก้ไขปัญหา 1%ของแรงตึงผิว (w/v) สำหรับ 30 และ 60 นาทีที่ 40 C หลังจากเอนไซม์ที่ถูก assayed (Moreira ฉลอง Teixeiraปอร์โต และลิมา Filho, 2002)2.10. เข้ากันได้กับโฆษณาผงซักฟอกได้รับการกกรติเอสที่ความเข้มข้นของ 0.20 mg มล. 1ที่ 40 C มีจำหน่ายผงซักฟอก: Ala (โพรเทคและเล่นพนัน); Bem-te-vi (Alimonda); โอโมหลาย-Ação (ยูนิลีเวอร์)และ (ยูนิลีเวอร์) กับความเข้มข้นสุดท้ายของ 7 มิลลิกรัมของผงซักฟอกมล. 1 ตัวอย่าง (150 จะ) ถูกเอาออกในช่วงเวลา 10 นาที (รวมเวลา 60 นาที) กิจกรรมได้ที่เหลือในแต่ละตัวอย่างกำหนดที่ 25 C, assayed และเปรียบเทียบกับการอย่างควบคุมได้รับการกกที่ 40 C ไม่มีผงซักฟอกค่า pH 11.0(Moreira et al. 2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยับยั้งการวัดตามโลคอน et al, (2003) และ
Bezerra et al, (2005) สารสกัดจากเอนไซม์ที่ถูกบ่มในช่วง
30 นาทีกับการที่แตกต่างกันน้ำย่อยโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง (4 mm): PMSF
(phenyl-methyl-sulphonyl ฟลูออไร) TPCK (tosyl-L-phenylalanylchloromethyl
คีโตน) TLCK (tosyl-L-ไลซีน chloromethyl คีโตน)
และ Benzamidine . หลังจากที่เวลาบ่ม 4 มิ trypsin และ chymotrypsin
พื้นผิวที่เฉพาะเจาะจงที่ถูกเพิ่ม: BApNA (benzoyl arginine
P-nitroanilide) และเพ Suc-P-น่าน (phenylalanine เป็น Succinyl
P-nitroanilide) ตามลำดับ การเปิดตัวของ P-nitroaniline ตามมา
จากการเพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตร เอนไซม์และสารตั้งต้นช่องว่างและนำไปวิเคราะห์ในทำนองเดียวกันโดยไม่ต้องเอนไซม์และสารตั้งต้น
การแก้ปัญหาตามลำดับ ค่า 100% ของกิจกรรมที่ได้รับการ
จัดตั้งขึ้นโดยไม่ต้องยับยั้ง.
2.7 ผลกระทบของค่า pH
กิจกรรมโปรติเอสที่ได้รับการวัดค่าพีเอชที่แตกต่างกันภายใต้
เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐานกับ azocasein เป็นสารตั้งต้น เอนไซม์
กิจกรรมได้รับการวิเคราะห์ที่ pH 6.5-12.5 0.1 M ฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 6.5-7.5) 0.1 M Tris-HCl บัฟเฟอร์ (pH 7.2-9.0) และ 0.1 M
NaOH / บัฟเฟอร์ glycine (pH 8.6-12.5) ผลกระทบของค่า pH ในความมั่นคง
ของการเตรียมเอนไซม์ได้รับการศึกษาโดยการบ่มเอนไซม์
ที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีกับบัฟเฟอร์ข้างต้นและกิจกรรมของเอนไซม์
วัดดังกล่าวข้างต้นอยู่ที่ 25 องศาเซลเซียสโดยใช้
0.1 M NaOH / glycine บัฟเฟอร์ (pH 11.0).
2.8 ผลของอุณหภูมิ
กิจกรรมโปรติเอสได้รับการวิเคราะห์ที่อุณหภูมิต่างๆ (25-
80 องศาเซลเซียส) เพื่อตรวจสอบอุณหภูมิที่เหมาะสม, ที่ pH 11.0 เพื่อที่
จะสร้างเสถียรภาพทางความร้อนก่อนที่จะมีเอนไซม์ที่
เตรียมเอนไซม์ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ
ตั้งแต่ 25 องศาเซลเซียสถึง 80 องศาเซลเซียส อุณหภูมิบ่มของ
การเตรียมความพร้อมรับการลดลงถึง 25 องศาเซลเซียสและกิจกรรมการย่อยโปรตีนของ
assayed.
2.9 ผลของการออกซิไดซ์และลดแรงตึงผิว
ความมั่นคงของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์โปรตีเอสจากปลาคู้ดำ
ได้รับการตรวจสอบโดยการบ่มตัวอย่าง (600 LL) ด้วย H2O2
(600 LL) ที่ความเข้มข้น 5%, 10% และ 15% ที่ 40 องศาเซลเซียส ตัวอย่าง
(150 LL) ถูกถอนออกที่ 15, 30 และ 75 นาทีช่วงเวลาที่จะสร้าง
กิจกรรมของพวกเขา (ที่ซ้ำกัน) บน azocasein และเพื่อเปรียบเทียบ
กับตัวอย่างที่ไม่ได้รับการรักษา ความมั่นคงเกี่ยวกับการไอออนิก (ซาโปนินที่มี
และโซเดียม choleate) และไม่ใช่ไอออนิกลดแรงตึงผิว (SDS, Tween 20
กับ Tween 80) ได้รับการตรวจสอบโดยการบ่มในระดับความเข้มข้นทางออกที่ 1%
ลดแรงตึงผิว (w / v) เป็นเวลา 30 และ 60 นาทีที่ 40 องศาเซลเซียส หลังจาก
ที่กิจกรรมของเอนไซม์ได้รับการวิเคราะห์ (Moreira, Albuquerque, Teixeira,
ปอร์โตและลิมา Filho, 2002).
2.10 เข้ากันได้กับผงซักฟอกในเชิงพาณิชย์
หรือไม่น้ำย่อยที่ความเข้มข้น 0.20 มิลลิกรัมมล 1 ถูกบ่ม
ที่ 40 C ที่มีผงซักฟอกใช้ได้ในเชิงพาณิชย์: Ala? (Protec &
Gamble); Bem-TE-VI? (Alimonda); โอโม Multi-Ação? (ยูนิลีเวอร์)
และเซิร์ฟ? (ยูนิลีเวอร์) เพื่อความเข้มข้นสุดท้ายของ 7 มิลลิกรัมของผงซักฟอก
มล 1 ตัวอย่าง (150 LL) ถูกถอดออกในช่วงเวลา 10 นาที (รวม
ระยะเวลา 60 นาที) กิจกรรมโปรตีนตกค้างในแต่ละ
ตัวอย่างถูกกำหนดอยู่ที่ 25 องศาเซลเซียส, assayed และเมื่อเทียบกับ
การควบคุมตัวอย่างบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสโดยไม่ต้องผงซักฟอกค่า pH 11.0
(อิ et al., 2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยับยั้งได้ตาม alencar et al . ( 2003 ) และbezerra et al . ( 2005 ) สารสกัดถูกบ่มในเอนไซม์30 นาทีกับตัวยับยั้งโปรติเอสที่เฉพาะเจาะจงที่แตกต่างกัน ( 4 มม. ) : PMSF( ฟีนิลเมทิลฟลูออไรด์ ( tosyl-l-phenylalanylchloromethyl tpck sulphonyl )คีโตน ) tlck ( tosyl-l-lysine คลอโรเมทธิลคีโตน )และ benzamidine . หลังจากเวลาในการบ่มเอนไซม์ไคโมทริปซิน , 4 มม. และเฉพาะสารอาหารถูกเพิ่ม : bapna ( เบนโซอาร์จินีนp-nitroanilide ) และ suc-phe-p-nan ( ซัคซินิลเฟนิล ลานีนp-nitroanilide ) ตามลำดับ ปล่อย p-nitroaniline ถูกตามโดยการเพิ่มขึ้นของค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 nm . เอนไซม์พื้นผิวและช่องว่างเป็นเดียวกัน assayed โดยเอนไซม์และสารอาหารโซลูชั่นตามลำดับ 100 % ค่าของกิจกรรมคือก่อตั้งขึ้นโดยตัวยับยั้ง2.7 . ผลของพีเอชกิจกรรมสร้างวัดที่ค่า pH ที่แตกต่างกันภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน กับ azocasein เป็นสับสเตรท เอนไซม์กิจกรรมซีรั่มที่ pH 6.5 ( 12.5 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.5 - 7.5 ) , 0.1 M HCl บัฟเฟอร์ pH 7.2 บริษัท–– 9.0 ) และ 0.1 โมลาร์โซเดียมไฮดรอกไซด์ / ที่มีบัฟเฟอร์ pH 8.6 ( 0 ) ผลของ pH ที่มีเสถียรภาพของการเตรียมเอนไซม์ศึกษาโดยการแช่เอนไซม์ที่ 25 C เป็นเวลา 30 นาที บัฟเฟอร์ ข้างต้นและกิจกรรมเอนไซม์วัดที่อธิบายข้างต้นที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส โดยใช้0.1 M NaOH / ที่มีบัฟเฟอร์ pH 11.0 )2.8 . ผลของอุณหภูมิการสร้างกิจกรรมซีรั่มที่อุณหภูมิต่างๆ ( 25 )80 องศาเซลเซียส ) เพื่อหาอุณหภูมิสูงสุดที่ pH 11.0 . เพื่อเพื่อสร้างเสถียรภาพทางความร้อน ก่อนที่จะมีเอนไซม์ที่การเตรียมเอนไซม์เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิบ่มตั้งแต่ 25 C 80c . บ่มที่อุณหภูมิของการเตรียมการลดลงถึง 25 องศาเซลเซียส และกิจกรรมของโปรตีนซีรั่ม .2.9 . ผลของสารลดแรงตึงผิวและสารออกซิไดซ์ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ เสถียรภาพของ proteases จากสาโทถูกสอบสวนโดยการแช่ตัวอย่าง ( 600 จะสลาย )( 600 จะ ) ที่ความเข้มข้น 5% , 10% และ 15% ที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส ตัวอย่าง( 150 จะ ) ถูกถอนออกที่ 15 , 30 และ 75 นาที ช่วงเวลา ที่จะสร้างกิจกรรมของพวกเขา ( ซ้ํา ) ใน azocasein และเปรียบเทียบพวกเขาที่จะไม่ปฏิบัติ ตัวอย่าง เสถียรภาพด้านอิออน ( อังกฤษและโซเดียม choleate ) และสารลดแรงตึงผิว ( Tween 20 ระดับ SDS ,ทวีน 80 ) ได้ถูกสืบสวนโดยบ่มใน 1% ความเข้มข้นสารละลายสารลดแรงตึงผิว ( w / v ) เป็นเวลา 30 และ 60 นาทีที่ 40 องศาเซลเซียส หลังจากซึ่งกิจกรรมเอนไซม์เอนไซม์อัลโมไรร่า TEIXEIRA ( , , ,ปอร์โต้ และ ลิม่า ลูกคิดว่า , 2002 )2.10 . ความเข้ากันได้กับผงซักฟอก เชิงพาณิชย์ส่วนโปรติเอสความเข้มข้น 0.20 ml1 มก. ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส อาดผงซักฟอก : เอ๋ ( & ,การพนัน ) ; ดีที 6 ( alimonda ) ; โอ้ multi-a çã O ( Unilever )และท่อง ( Unilever ) ความเข้มข้นสุดท้าย 7 มิลลิกรัมของผงซักฟอกml1 . ตัวอย่าง ( 150 จะถูกลบออกในช่วงเวลา 10 นาที ( รวมระยะเวลา 60 นาที ) โปรตีนที่ตกค้างในแต่ละกิจกรรมตัวอย่าง พิจารณาที่ 25 องศาเซลเซียส เมื่อเทียบกับปริมาณ และตัวอย่างควบคุมอุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสโดยไม่ต้องผงซักฟอก pH 11.0( โมเรรา et al . , 2002 )