One-step quantitative SYBR Green I

One-step quantitative SYBR Green I RT-PCR was developed by amplifying cDNA template from viral RNA and using in vitro transcribed BVDV RNA to establish a standard curve. The assay had a detection limit as low as 100 copies/ml of BVDV RNA, a reaction efficiency of 103.2%, a correlation coefficient (R2) of 0.995, and a maximum intra-assay CV of 2.63%. It was 10-fold more sensitive than conventional RT-PCR and can quantitatively detect BVDV RNA levels from 10-fold serial dilutions of titrated viruses containing a titer from 10-1 to 10-5 TCID50, without non-specific amplification. Melting curve analysis showed no primer-dimers and non-specific products.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เป็นพัฒนาเชิงปริมาณ SYBR Green I RT-PCR โดยมือแม่ cDNA จากอาร์เอ็นเอไวรัสและใช้ในขั้นตอนเดียวทับศัพท์ BVDV อาร์เอ็นเอสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน การวิเคราะห์ขีดจำกัดตรวจสอบสำเนา 100 ml ของอาร์เอ็นเอ BVDV ประสิทธิภาพปฏิกิริยา 103.2% สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2) ของ 0.995 และ CV วิเคราะห์อินทราสูง 2.63% ต่ำได้ มันมีความไวกว่าปกติ RT-PCR 10-fold มาก และ quantitatively สามารถตรวจพบระดับ BVDV อาร์เอ็นเอจาก dilutions 10-fold ประจำไวรัส titrated ประกอบด้วย titer จาก 10-1 กับ 10-5 TCID50 โดยไม่เจาะจงขยาย ละลายวิเคราะห์เส้นโค้งแสดงไม่รองพื้น dimers และผลิตภัณฑ์ที่เจาะจง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณขั้นตอนเดียวสีเขียว SYBR ฉัน RT-PCR ได้รับการพัฒนาโดยขยายแม่แบบ cDNA จากอาร์เอ็นเอไวรัสและการใช้ในหลอดทดลองคัดลอก BVDV RNA เพื่อสร้างกราฟมาตรฐาน การทดสอบมีการตรวจสอบวงเงินที่ต่ำเป็น 100 ชุด / ml BVDV RNA ประสิทธิภาพปฏิกิริยาของ 103.2%, ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2) ของ 0.995 และ CV ภายในการทดสอบสูงสุด 2.63% มันเป็น 10 เท่าที่มีความสำคัญมากขึ้นกว่าเดิม RT-PCR และเชิงปริมาณสามารถตรวจสอบระดับ BVDV RNA จากอนุกรมเจือจาง 10 เท่าของไวรัสปรับขนาดที่มี titer 10-1 ถึง 10-5 TCID50 โดยไม่ต้องใช้เครื่องขยายเสียงที่ไม่เฉพาะเจาะจง ละลายการวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่าไม่มีเส้นโค้ง dimers-รองพื้นและผลิตภัณฑ์ที่ไม่เฉพาะเจาะจง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หนึ่งขั้นตอนเชิงปริมาณ SYBR สีเขียวนี้ได้รับการพัฒนาโดยขยายยีนไวรัส RNA จากแม่แบบและใช้ในการถ่ายทอด bvdv RNA สร้างเส้นโค้งมาตรฐาน ( มีขีดจำกัดเป็นต่ำเป็น 100 แผ่น ต่อมิลลิลิตร bvdv RNA , ปฏิกิริยาประสิทธิภาพ 103.2 และสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ ( R ) ของ 0.995 และสูงสุดอัฟกานิสถาน CV ของ 2.63 %มันเป็น 10 เท่าได้ไวกว่าปกติ และสามารถใช้วิธีตรวจหาระดับอาร์เอ็นเอ bvdv จาก 10 เท่าวิธีการต่อเนื่องตลอดเวลาไวรัสที่มีระดับ จาก 1-10 ไป 10-5 tcid50 โดยเฉพาะการขยาย . จุดหลอมเหลวการวิเคราะห์ทางโค้ง พบว่าไพรเมอร์และสายผลิตภัณฑ์ที่ไม่เฉพาะเจาะจง .