2. Materials and methods2.1. Koji p

2. Materials and methods
2.1. Koji preparation
Sixty percent of soybean was soaked in water for 6-8 h then autoclaved at 121°C for 40 min. Forty percent
of wheat bran was roasted to dark brown and broken. The 32% of total wheat bran was ground to powder and
mixed with culture before spreading to raw material to ensure mixing through of raw material. Spores of A.
oryzae S. NPUST-FS-206-A1 (0.1%) were inoculated into raw material and incubated at 30°C for 72h.
2.2. Enzyme extraction
The fermented matter was mixed with 0.1 M phosphate buffer (pH 6.9) (1:2 w/v) using a shaking incubator
(150 rpm, 30°C, 30 min). The supernatant was collected as crude enzyme extract by centrifugation at 10,000
xg, 4°C for 15 min.
2.3. Analytical methods
The moisture content of a fermented sample was determined by infrared moisture determination balance
(FD-720, Kett Electric Laboratory, Tokyo, Japan). The fermented matter was mixed with deionized water (1:2
w/v) by blender and the pH value was measured by pH meter (DKK-TOA, HM-25G, Japan).
Casein solution (0.65%) in 0.05 M phosphate buffer (pH 6.9) and 0.05 M carbonate buffer (pH 10) were
used as a substrate to analyze neutral and alkaline protease activity, respectively. One mL of crude enzyme Chuenjit Chancharoonpong et al. / APCBEE Procedia 2 ( 2012 ) 57 – 61 59
extract and 5 mL of casein were mixed and incubated at 30°C for 10 min. The reaction was arrested by adding
5 mL of trichloroacetic acid (TCA) and incubated for 30 min. After centrifugation at 10,000 xg for 10 min at
4°C, the supernatant was collected. The supernatant (2 mL) was reacted with 5 mL of 500 mM Na2CO3 and 1
mL of five-fold diluted Folin-Ciocalteau reagent for 10 min. Absorbance was read against a blank at 660 nm.
One unit of enzyme activity was defined as the amount of enzyme that liberated 1μg of tyrosine per minute
under assay conditions [10].
Amylase activity was measured with 1.0% soluble starch in 0.1 M sodium acetate buffer (pH 5.0) as a
substrate. One mL of crude enzyme extract and 1 mL of soluble starch were mixed and incubated at 30°C for
10 min. After incubation, one mL of 3, 5-dinitrosalicylic acid was added, reacted in a boiling water bath for
15 min, cooled to room temperature and added with 9 mL of deionized water. The amylase activity was
analyzed spectrophotometrically at 540 nm. One unit of enzyme activity was defined as the amount of
enzyme that released 1 mM of reducing sugar as maltose per minute under the assay condition [11]. The
enzyme activity was reported per gram of dry koji used in the initial extraction. All the samples were analyzed
in triplicate.
2.4. Scanning electron microscope
Samples were fixed by 3% glutaraldehyde in 0.1 M phosphate buffer (pH 7.0), dried by a critical point
dryer (HCP-2, Hitachi, Japan) and mounted on stub holders. The samples were then coated with gold in a
coater (E-1010, Hitachi, Japan) and investigated on a scanning electron microscope (Model S-3000N, Hitachi,
Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. จิเตรียมหกเปอร์เซ็นต์ของถั่วเหลืองนำไปแช่ในน้ำ 6-8 h แล้ว autoclaved ที่ 121° C สำหรับ 40 นาทีสี่สิบเปอร์เซ็นต์ข้าวสาลี รำคั่วให้สีน้ำตาลเข้ม และเสีย 32% ของรำข้าวสาลีรวมถูกพื้นดินผง และผสมกับวัฒนธรรมก่อนที่จะแพร่กระจายไปให้ผสมวัตถุดิบโดยใช้วัตถุดิบ เพาะเฟิร์นของอ.แห้งระดับต่าง ๆ S. NPUST-FS-206-A1 (0.1%) มี inoculated เป็นวัตถุดิบ และ incubated ที่ 30° C สำหรับ 72h2.2. เอนไซม์สกัดเรื่องร้าถูกผสมกับ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) (1:2 w/v) ใช้บ่มเพาะวิสาหกิจงก ๆ(150 รอบต่อนาที,-30° C, 30 นาที) Supernatant ถูกรวบรวมเป็นสารสกัดเอนไซม์ดิบ โดย centrifugation ที่ 10000xg, 4° C สำหรับ 15 นาที2.3 การวิเคราะห์วิธีชื้นของตัวอย่างร้าถูกกำหนด โดยความชื้นอินฟราเรดกำหนดดุล(FD-720 ห้องปฏิบัติการไฟฟ้า Kett โตเกียว ญี่ปุ่น) เรื่องหมักที่ผสม ด้วยน้ำ deionized (1:2w/v) โดยเบลนเดอร์และ pH ค่าที่วัด โดยเครื่องวัดค่า pH (DKK-โตอะ HM - 25 G ญี่ปุ่น)เคซีนโซลูชัน (0.65%) ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) และ 0.05 M คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ (pH 10)ใช้เป็นพื้นผิวการวิเคราะห์กิจกรรมรติเอสเป็นกลาง และด่าง ตามลำดับ ML หนึ่งของเอนไซม์ดิบ Chuenjit Chancharoonpong et al. / APCBEE Procedia 2 (2012) 59 57 – 61สารสกัดและ 5 mL ของเคซีนถูกผสม และ incubated ที่ 30° C สำหรับ 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกจับกุม โดยการเพิ่ม5 mL ของกรด trichloroacetic (TCA) และ incubated สำหรับ 30 นาที หลังจาก centrifugation ที่ xg 10000 ใน 10 นาทีที่4° C, supernatant ถูกรวบรวม Supernatant (2 mL) เป็นปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับ 5 mL 500 มม. Na2CO3 และ 1mL five-fold รีเอเจนต์ Folin-Ciocalteau แตกออกสำหรับ 10 นาที Absorbance ที่อ่านกับช่องว่างที่ 660 nmหน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ liberated 1μg ของ tyrosine ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขทดสอบ [10]กิจกรรม amylase ถูกวัด ด้วยแป้งละลาย 1.0% ในบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม 0.1 M (pH 5.0) เป็นการพื้นผิว ML หนึ่งของเอนไซม์ดิบแยก และ 1 mL ของแป้งที่ละลายน้ำได้ผสม และ incubated ที่ 30° C สำหรับ10 นาที หลังจากบ่ม mL หนึ่งของ 3, 5-dinitrosalicylic กรดเพิ่ม ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในน้ำน้ำเดือดสำหรับ15 นาที ระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิห้อง และเพิ่ม มี 9 mL น้ำ deionized กิจกรรม amylase ได้spectrophotometrically วิเคราะห์ที่ 540 nm หน่วยหนึ่งของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มม.ลดน้ำตาลเป็น maltose ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [11] ที่รายงานกิจกรรมของเอนไซม์ต่อกรัมของจิแห้งที่ใช้ในการสกัดครั้งแรก มีวิเคราะห์ตัวอย่างทั้งหมดใน triplicate2.4 การการสแกนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนตัวอย่างที่กำหนด โดยการ glutaraldehyde 3% ใน 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0), ที่แห้งตามจุดสำคัญเครื่องเป่า (HCP 2 ฮิตาชิ ญี่ปุ่น) และติดตั้งบนขั้วใส่ ตัวอย่างถูกเคลือบ ด้วยทองแล้วยังcoater (E-1010, Hitachi, Japan) and investigated on a scanning electron microscope (Model S-3000N, Hitachi,Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 โคจิเตรียม
หกสิบเปอร์เซ็นต์ของถั่วเหลืองแช่ในน้ำ 6-8 ชั่วโมงแล้วนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาที สี่สิบเปอร์เซ็นต์
ของรำข้าวสาลีได้รับการคั่วน้ำตาลเข้มและหัก 32% ของรำข้าวสาลีทั้งหมดถูกบดเป็นผงและ
ผสมกับวัฒนธรรมก่อนที่จะกระจายไปยังวัตถุดิบเพื่อให้แน่ใจว่าการผสมผ่านของวัตถุดิบ สปอร์ของ A.
oryzae S. NPUST-FS-206-A1 (0.1%) ถูกเชื้อเป็นวัตถุดิบและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72h.
2.2 เอนไซม์สกัด
เรื่องหมักผสมกับ 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) (1: 2 w / v) โดยใช้ศูนย์บ่มเพาะสั่น
(150 รอบต่อนาที, 30 ° C 30 นาที) ใสถูกเก็บเป็นสารสกัดจากเอนไซม์โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000
XG 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที.
2.3 วิธีการวิเคราะห์
ปริมาณความชื้นของตัวอย่างหมักถูกกำหนดโดยความมุ่งมั่นอินฟราเรดสมดุลความชื้น
(FD-720, Kett ไฟฟ้าห้องปฏิบัติการ, โตเกียว, ญี่ปุ่น) เรื่องหมักผสมกับน้ำกลั่นปราศจากไอออน (1: 2
w / v) โดยเครื่องปั่นและค่า pH โดยวัดจากค่า pH เมตร (DKK-TOA, HM-25G, ญี่ปุ่น).
การแก้ปัญหาเคซีน (0.65%) ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.9) และ 0.05 M บัฟเฟอร์คาร์บอเนต (pH 10) ถูก
นำมาใช้เป็นสารตั้งต้นในการวิเคราะห์กิจกรรมโปรติเอสที่เป็นกลางและด่างตามลำดับ หนึ่งมิลลิลิตรของเอนไซม์ชื่นจิตร Chancharoonpong และคณะ / APCBEE Procedia 2 (2012) 57-61 59
และสารสกัดจาก 5 มิลลิลิตรเคซีนถูกผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ปฏิกิริยาถูกจับกุมโดยการเพิ่ม
5 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโร (TCA) และบ่มเป็นเวลา 30 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 xg เป็นเวลา 10 นาทีที่
4 องศาเซลเซียสใสถูกเก็บรวบรวม ใส (2 มิลลิลิตร) ได้รับการตอบสนองด้วย 5 มิลลิลิตร 500 มิลลิ Na2CO3 และ 1
มิลลิลิตรห้าเท่าเจือจางน้ำยา Folin-Ciocalteau เป็นเวลา 10 นาที ดูดซับได้อ่านกับว่างเปล่าที่ 660 นาโนเมตร.
หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่มีอิสรเสรี1μgของซายน์ต่อนาที
ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [10].
กิจกรรมอะไมเลสได้รับการวัดที่มี 1.0% แป้งละลายใน 0.1 M โซเดียมอะซิเตท บัฟเฟอร์ (pH 5.0) เป็น
สารตั้งต้น หนึ่งมิลลิลิตรของสารสกัดจากเอนไซม์และ 1 มิลลิลิตรของแป้งที่ละลายน้ำได้ถูกผสมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
10 นาที หลังจากการบ่มหนึ่งมิลลิลิตร 3 กรด 5- dinitrosalicylic ถูกเพิ่มปฏิกิริยาในอ่างน้ำเดือด
15 นาทีเย็นที่อุณหภูมิห้องและเพิ่มกับ 9 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นปราศจากไอออน กิจกรรมอะไมเลสที่ได้รับการ
วิเคราะห์ spectrophotometrically ที่ 540 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของ
เอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มิลลิของการลดน้ำตาลมอลโตสต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ [11]
กิจกรรมของเอนไซม์ที่มีการรายงานต่อกรัมของโคจิแห้งที่ใช้ในการสกัดการเริ่มต้น ตัวอย่างทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์
ในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.4 กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน
ตัวอย่างได้รับการแก้ไขโดย glutaraldehyde 3% 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) แห้งโดยจุดสำคัญ
เครื่องเป่า (HCP-2, ฮิตาชิ, ประเทศญี่ปุ่น) และติดตั้งอยู่บนถือต้นขั้ว ตัวอย่างถูกแล้วเคลือบด้วยทองใน
Coater (E-1010, ฮิตาชิ, ประเทศญี่ปุ่น) และการตรวจสอบในกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด (รุ่น S-3000N, Hitachi,
ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . โคจิ การเตรียม
ร้อยละหกสิบของถั่วเหลืองแช่น้ำ 6-8 H แล้วสังเคราะห์ที่ 121 ° C เป็นเวลา 40 นาที สี่สิบเปอร์เซ็นต์
รําข้าวสาลีคือคั่วกับน้ำตาลเข้ม และแตก 32 % ของรำข้าวสาลี รวมกับผงและดินผสมกับวัฒนธรรม
ก่อนที่จะแพร่กระจายไปยังวัตถุดิบ เพื่อให้ผ่านการผสมของวัตถุดิบ สปอร์
oryzae . npust-fs-206-a1 ( 01 ) ปลูกเชื้อในวัตถุดิบและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C 72h .
2.2 . การสกัดเอนไซม์
เรื่องหมักผสมกับ 0.1 M phosphate buffer pH 6.9 ) ( 1 : 2 W / V ) ใช้เขย่าตู้
( 150 รอบต่อนาที , 30 องศา C 30 นาที ) และน่านถูกรวบรวมเป็นเอนไซม์ที่สกัดโดยการเหวี่ยงแยกที่ 10
XG 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที
2.3 วิธีการวิเคราะห์
ความชื้นของตัวอย่างที่ถูกกำหนดโดยอินฟราเรดหมักความชื้นการหาสมดุล
( fd-720 เขตไฟฟ้า , ห้องปฏิบัติการ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) เรื่องหมักผสมกับน้ำ ( คล้ายเนื้อเยื่อประสาน 1 : 2
w / v ) โดยเครื่องปั่นและค่า pH วัดโดยเครื่องวัด ( dkk-toa hm-25g , ญี่ปุ่น )
, โซลูชั่น ( 0.65 % ) ใน 0.05 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.9 ) และ 0.05 M คาร์บอเนตบัฟเฟอร์ pH 10 )
ใช้เป็นสารตั้งต้นเพื่อวิเคราะห์เป็นกลางและเอนไซม์อัลคาไลน์โปรติเอส ตามลำดับ หนึ่งมิลลิลิตรเอนไซม์ชื่นใจ ศรีพงษ์พันธุ์กุล และคณะ / apcbee procedia 2 ( 2012 ) 57 และ 59 และ 61
5 มิลลิลิตร สารสกัดโปรตีนผสมบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C นาน 10 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกจับโดยการเพิ่ม
5 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) และบ่มเป็นเวลา 30 นาที หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10000 XG 10 นาที
4 ° C , นำมันเก็บ และน่าน ( 2 มล. ) คือปฏิกิริยากับ 5 ml ของ Na2CO3 500 มม. และ 1
4 ห้าพับ folin ciocalteau เจือจางสารเคมีเป็นเวลา 10 นาทีก็อ่านต่อค่าว่างที่ 660 nm .
หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์อิสระ 1 μกรัมต่อนาที
ภายใต้เงื่อนไขแต่อย่างใด [ 10 ] ( . . .
กิจกรรมเอนไซม์อะไมเลสวัดด้วย 10 % ละลายแป้งใน 0.1 โมลาร์โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) เป็น
พื้นผิว หนึ่งมิลลิลิตร สารสกัดเอนไซม์ 1 มิลลิลิตร และปริมาณแป้งผสมบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
10 นาทีหลังจากระยะเวลาหนึ่งประมาณ 3 , 5-dinitrosalicylic เติมกรดทำปฏิกิริยาในน้ำอาบ
15 นาที เย็นที่อุณหภูมิห้องและเพิ่ม 9 มิลลิลิตร คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ ส่วนกิจกรรม
เลสวิเคราะห์นี้ 540 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1
มม. ลดน้ำตาลมอลโตสต่อนาทีภายใต้การทดสอบเงื่อนไข [ 11 ]
กิจกรรมเอนไซม์รายงานแห้ง 1 กรัม โคจิที่ใช้ในการสกัดสารตั้งต้น กลุ่มตัวอย่างทั้งหมด วิเคราะห์
ทั้งสามใบ
2.4 . กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน
จำนวนคงที่ 3 % glutaraldehyde ใน 0.1M phosphate buffer pH 7.0 ) , อบแห้งด้วยเครื่องอบแห้งแบบจุดวิกฤต (
hcp-2 , ฮิตาชิ , ญี่ปุ่น ) และติดตั้งบนถือต้นขั้ว จำนวน แล้วเคลือบด้วยทองใน
เครื่องเคลือบ ( e-1010 , ฮิตาชิ , ญี่ปุ่น ) และศึกษาบนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( แบบ s-3000n , ฮิตาชิ ,
ญี่ปุ่น )