Cell Culture The mouse Neuro2a cel

Cell Culture
The mouse Neuro2a cells were purchased from American Type Culture Collection. These cells were cultured in Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM; HyClone) supplemented with 4 mM L-glutamine, 4.5 g/L glucose, 1.5 g/L sodium bicarbonate, 1 mM sodium pyruvate, 1% penicillin/streptomycin (GIBCO) and 10% fetal bovine serum (FBS; Gibco) Isolation and expansion of mouse mesenchymal stem cells (mouse MSCs)
Mouse MSCs were isolated from the bone marrow of BALB/cA (6-8 weeks), which were purchased from National Laboratory Animal Centre, Mahidol University. Under sterile conditions, both ends of the long bones from femurs and tibias were cut with scissors, so the bone marrow cells were flushed out with DMEM using a syringe with a 21-to 25-gauge needle, followed by several times gentle pipetting. The aspirate is fractioned on a density gradient solution often Percoll or Ficoll (see appendix A) to eliminate some unwanted cell types and debris. The cells in the upper low-density fraction were then plated and enriched using standard cell culture techniques.
After cell seeding for 7-10 days mouse MSCs were selected by plastic adhesion, required the elimination of non-adherent haematopoietic cells by replacing the medium, DMEM/high glucose (Hyclone) supplemented with 20% FBS (HyClone), 2 mM L-glutamine (GIBCO), 1% penicillin/streptomycin (GIBCO) and 103 unit of mouse leukemia inhibition factor (LIF; R&D)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์วัฒนธรรม
เซลล์เมาส์ Neuro2a ที่ซื้อมาจากชาวอเมริกันประเภทวัฒนธรรมเก็บ เซลล์เหล่านี้ถูกนำมาเลี้ยงใน Dulbecco ของการปรับเปลี่ยนขนาดกลางของนกอินทรี (DMEM; HyClone) เสริมด้วย 4 มม L-glutamine 4.5 g / กลูโคส L 1.5 กรัม / ลิตรโซเดียมไบคาร์บอเนตไพรูโซเดียม 1 มิลลิ penicillin% 1 / streptomycin (Gibco) และ 10 ซีรั่มวัว% ของทารกในครรภ์ (FBS; Gibco) การแยกและการขยายตัวของเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal เมาส์ (เมาส์ MSCs)
เมาส์ MSCs ที่แยกได้จากไขกระดูกของ BALB / cA (6-8 สัปดาห์) ซึ่งซื้อมาจากสัตว์ทดลองแห่งชาติมหิดล มหาวิทยาลัย ภายใต้เงื่อนไขหมันปลายทั้งสองของกระดูกยาวจาก femurs และ tibias ถูกตัดด้วยกรรไกรเพื่อให้เซลล์ไขกระดูกถูกล้างออกด้วยการใช้เข็มฉีดยา DMEM ที่มี 21 ถึง 25 เข็มวัดตามด้วยหลายครั้งอ่อนโยนปิเปต สูดลมหายใจเป็น fractioned ในการแก้ปัญหาความหนาแน่นของการไล่ระดับสีมักจะ Percoll หรือ Ficoll (ดูภาคผนวก) เพื่อขจัดเซลล์บางชนิดที่ไม่พึงประสงค์และเศษซาก เซลล์ในส่วนความหนาแน่นต่ำบนถูกชุบแล้วและอุดมการใช้เทคนิคการเพาะเลี้ยงเซลล์มาตรฐาน.
หลังจากการเพาะเซลล์สำหรับ 7-10 วัน MSCs เมาส์ได้รับการคัดเลือกโดยการยึดเกาะพลาสติกที่จำเป็นในการกำจัดของเซลล์เม็ดเลือดที่ไม่ใช่พรรคพวกโดยการเปลี่ยนกลาง DMEM / น้ำตาลสูง (Hyclone) เสริมด้วย 20% FBS (HyClone), 2 มิลลิ L-glutamine (Gibco), ยาปฏิชีวนะ% 1 / streptomycin (Gibco) และ 103 หน่วยของปัจจัยการยับยั้งโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวเมาส์ (LIF; R & D)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเพาะเลี้ยงเซลล์
เมาส์ neuro2a เซลล์ ซื้อมาจากประเภทคอลเลกชันอเมริกันวัฒนธรรม เซลล์เพาะเลี้ยงในดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem ; hyclone ) เสริม Glutamine 4 มม. 4.5 กรัมต่อลิตรและกลูโคส 1.5 กรัม / ลิตร โซเดียมไบคาร์บอเนต โซเดียมไพรูเวท 1 มิลลิเมตร 1 % เพนนิซิลลิน / สเตรปโตมัยซิน ( gibco ) และ 10% fetal bovine serum ( FBS ;gibco ) การแยกและการขยายตัวของเมาส์มีเซนไคมอลสเต็มเซลล์ ( MSCS เมาส์ )
งานเมาส์ที่แยกได้จากไขกระดูกของ balb / CA ( 6-8 สัปดาห์ ) ซึ่งซื้อมาจากศูนย์สัตว์ทดลองแห่งชาติ มหาวิทยาลัยมหิดล ภายใต้สภาพปลอดเชื้อ ทั้งสองปลายของกระดูกจากกระดูกโคนขา tibias ยาวและถูกตัดด้วยกรรไกรดังนั้น เซลล์ไขกระดูกถูกขับออกมากับ dmem โดยใช้เข็มฉีดยากับ 21 ถึง 25 เข็มวัด ตามด้วย หลายครั้งที่อ่อนโยน pipetting . ที่สูบเป็นแฟรกชันในความหนาแน่นความลาดชันโซลูชั่นมักจะ percoll หรือ ficoll ( ดูภาคผนวก ) เพื่อกำจัดเซลล์ที่ไม่พึงประสงค์บางประเภท และเศษซากเซลล์ในส่วนความหนาแน่นระดับบนแล้ว และชุบด้วยการใช้เทคนิคการเพาะเลี้ยงเซลล์มาตรฐาน
หลังจากเซลล์เพาะ 7-10 วันเมาส์ MSCS จำนวนยึดพลาสติก ต้องการที่แท้จริงไม่ติดเซลล์แทนกลาง dmem / กลูโคสสูง ( hyclone ) เสริมด้วย FBS 20% ( hyclone ) , 2 มม. แอล กลูตามีน ( gibco )1% เพนนิซิลลิน / สเตรปโตมัยซิน ( gibco ) และ 103 หน่วยของเมาส์เป็นปัจจัยยับยั้ง ลิฟ& D ; R )