The RIDASCREEN SET kit (R-Biopharm

The RIDASCREEN SET kit (R-Biopharm GmbH, Darmstadt, Germany), a commercial staphylococcal
enterotoxin (SE) visual immunoassay kit, was evaluated for its efficacy. The kit utilizes monovalent capture
antibodies against SE types A to E (SEA to SEE); therefore, it simultaneously detects and identifies the
enterotoxin types. The major advantages of the kit are (i) a high degree of specificity (except for naturally
occurring peroxidases, food compositions or ingredients and microbiological products due to growth of
nonstaphylococcal microorganisms did not cause false-positive results; additionally, no cross-reactions among
reagents of the kits were observed), (ii) excellent sensitivity (minimum detectable limits were 0.20 to 0.30 ng
of SEs per ml of extracts of ham, salami, and mushroom and 0.30 to 0.35 ng of SEs per ml of cheese extracts,
or 0.50 to 0.75 ng of SEs per g of foods such as noodles, ham, salami, cheese, and turkey), (iii) simplicity (the
kit enabled direct assay of SEs in food extracts without the need for lengthy extraction or concentration
procedures), (iv) rapidity (it took less than 3 h to complete the analysis of individual enterotoxin types SEA to
SEE), and (v) its semiquantitative results (optical density values could be read against a standard curve to
estimate the amount of SE in the extract). The RIDASCREEN kit is a convenient, rapid, and reliable tool for
the detection and identification of SEs in foods.
Ingestion of enterotoxins produced by certain strains of
Staphylococcus aureus is one of the leading causes of food
poisoning in North America. Growth of enterotoxigenic strains
of S. aureus to a population of 106 or more cells per g of food
is generally considered necessary for production of a sufficient
amount of enterotoxin to cause intoxication if the food is
consumed (19). As little as 100 to 200 ng of staphylococcal
enterotoxin (SE) can produce symptoms of intoxication (7). To
detect this low level of enterotoxin in 100 g of food (1 to 2 ng
of enterotoxin per g), several sensitive detection methods have
been employed: (i) a radioimmunoassay (RIA) (5, 6, 14); (ii)
an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or enzyme
immunoassay (EIA) (8, 9, 10, 12); and (iii) a reversed passive
latex agglutination assay (RPLA) (2, 24, 25). For these assay
techniques, several commercial kits are now available for
detection of SE types A to E (SEA to SEE). For example,
there are five ELISA kits, including an EIA kit called the
Brommeli kit or Swiss Ball kit which employs a monovalent
capture antibody system against SEA to SEE and is made in
Switzerland; a visual EIA kit (TECRA) made in Australia
which employs a polyvalent capture antibody against SEA to
SEE; an ELISA membrane kit and an ELISA tube kit, both
made in France and employing monovalent capture antibody
systems against SEA to SEE; and an EIA kit (RIDASCREEN)
made in Germany which employs a monovalent capture antibody
system against SEA to SEE, and one RPLA kit made in
Japan which employs a monovalent capture antibody system
against SEA to SED. Of these commercial kits, the RIDASCREEN
kit is the most recent; therefore, little information on
its efficacy is available.
* Corresponding author. Mailing address: Microbiology Research
Division, Banting Research Centre, Health Canada, Tunney's Pasture,
Ottawa, Canada KlA OL2. Phone: [phone] and [phone].
Fax: [phone].
The purpose of this study was to evaluate the specificity and
sensitivity of the RIDASCREEN EIA kit for the detection of
SEs in various foods.
MATERIALS AND METHODS
Sources of SE assay kits. RIDASCREEN EIA kits, which
utilize five monovalent capture antibodies against SEA to SEE,
are produced by R-Biopharm GmbH, Darmstadt, Germany,
and were obtained from Bioman Products Inc., Mississauga,
Ontario, Canada. TECRA ETA kits, produced by Bioenterprises
Pty. Ltd., Roseville, New South Wales, Australia, were
obtained from International BioProducts Inc., Redmond,
Wash.
Sources of standard enterotoxins. Purified standard SEA
and SEE were gifts from M. S. Bergdoll, Food Research
Institute, University of Wisconsin, Madison, Wis.; SEB was
purchased from Makor Chemical Co. Ltd., Jerusalem, Israel
(this SE is now commercially available from Sigma Chemical
Co., St. Louis, Mo.); and SEC and SED were purchased from
Toxin Technology, Inc., Sarasota, Fla.
Enumeration of plate counts of aerobic microorganisms and
S. aureus counts in foods. A 25-g food sample was placed in a
blender jar containing 225 ml of 0.1% peptone water and
blended for 1 to 2 min, after which serial decimal dilutions of
the food homogenate were made in peptone water. Total plate
counts of aerobic microorganisms were determined on tryptic
soy agar plates by the surface spread plate method. Viable S.
aureus counts were determined by plating a total of 1.0 ml of
decimal dilutions onto three plates of Baird-Parker agar,
followed by incubation at 35°C for 48 h (16). Presumptively
identified S. aureus strains were subsequently confirmed by
microscopic examination, production of both coagulase and
thermonuclease, and anaerobic utilization of glucose and
mannitol (15, 16). To estimate the presence of elevated levels
677
Vol. 60, No. 2
APPL. ENVIRON. MICROBIOL.
TABLE 1. Specificity of the RIDASCREEN kits for detection of
SEs in spiked buffer and food extracts'
Specific antibody SE detectedb
or control A B C D E
Anti-SEA + - - - -
Anti-SEB - +
Anti-SEC - - +
Anti-SED - - - +
Anti-SEE - - - - +
Positive control + + + + +
Negative control
a Results were consistent in triplicate tests with each of the SEs in phosphatebuffered
saline (0.05 M phosphate in 0.15 M NaCl containing 0.05% NaN3, pH
7.6) and in food extracts (ham, pasta, salami, and cheese).
b Each of the purified standard enterotoxins SEA to SEE was spiked into
buffer and extracts of SE-free foods at the final concentration of 1 to 2 ng/ml. +,
SE detected; -, SE not detected.
of nonviable S. aureus in foods, thermonuclease activity in each
food sample was determined by procedures previously described
(15). All bacteriological media used were products of
Difco Laboratories, Detroit, Mich., unless otherwise stated.
Extraction of SEs from foods. The SE extraction media used
were phosphate-buffered saline (0.05 M phosphate in 0.15 M
NaCl containing 0.05% NaN3, pH 7.6) for the RIDASCREEN
kit and 0.25 M Tris buffer (pH 8.0) for the TECRA kit. Single,
double, and triple volumes of SE extraction medium were
added to blender jars containing 100 g of high-, medium-, and
low-moisture food samples, respectively, and blended at high
speed for 2 to 3 min. The homogenates were centrifuged at
16,300 x g for 20 min, and the supernatants were sterilized by
filtration through a 0.45-,um-pore-size membrane filter.
SE analyses. Enterotoxin assays were performed by the
methods recommended by the manufacturers of the kits unless
otherwise stated. Colored extracts resulting from the enzymic
reactions of the RIDASCREEN and TECRA kits were mea-
TABLE 3. Minimum amounts of SEs in buffer and food extracts
detectable by the RIDASCREEN kits
Sample Minimum detectable amt (ng/ml)b of SE:
testeda A B C D E
Buffer 0.15 0.15 0.15 0.15 0.10
Ham 0.25 0.25 0.30 0.25 0.25
Salami 0.20 0.25 0.30 0.20 0.25
Cheese 0.35 0.35 0.40 0.35 0.35
Mushroom 0.20 0.25 0.30 0.20 0.20
a The buffer was phosphate-buffered saline (0.05 M phosphate in 0.15 M NaCl
containing 0.05% NaN3, pH 7.6). Food extracts were prepared with SE-free
samples by using the phosphate-buffered saline described above.
b The values are averages for duplicate assays.
sured by determining optical densities at 450 and 410 nm
(OD450 and OD410), respectively, with microtiter readers, the
Bio-Kinetic Reader model EL 312 (Bio-Tek Instruments Inc.,
Winoski, Vt.) for OD450 and the Minireader II (Dynatech
Laboratories Inc., Alexandria, Va.) for OD410.
Enterotoxin production in foods. Five strains of S. aureus,
designated 722, S-6, 361, 1151 M, and 326, that produce SEA,
SEB, SEC, SED, and SEE, respectively, were obtained from
M. S. Bergoll, Food Research Institute, University of Wisconsin,
Madison. One nontoxigenic control strain (S. aureus 205)
was from our culture collection. Individual strains were grown
in tryptic soy broth at 35°C for 48 h; cells were pooled by
centrifugation, washed twice with saline, resuspended in saline,
and adjusted to an OD600 of 0.05 (about 1 to 2 x 107 cells per
ml) by using a photometer (Bausch and Lomb, Inc., Rochester,
N.Y.). The cell suspension was further diluted 50 times with
saline, and then the diluted cell suspension (5 ml) was inoculated
into the foods (100 g) to make initial S. aureus populations
of 1 to 2 x 104 cells per g and incubated at 25°C for 72
h. Baird-Parker agar was used to determine S. aureus counts.
The food samples selected were free from SEs, and some of
them were autoclaved prior to inoculation of S. aureus strains.
TABLE 2. Comparison of specificities of the RIDASCREEN and TECRA kits for detection of SEs in foods experimentally contaminated
with S. marcescens and S. aureus and in fresh raw mussels
Result with RIDASCREEN kits for SEb: Result with
Food sample (origin) Contaminating organisma
A B C D E Without With
serum serum
Mushroom S. marcescens HPB-SM-MI - +
S. aureus 722 + - - - - + +
Noned
Ham S. marcescens HPB-SM-MI - - - - - +
S. aureus S-6 + + - - - + +
Noned -
Salami S. marcescens HPB-SM-MI - - - - - +
S. aureus 361 - - + - - + +
Noned - -
Raw musselse (New Zealand) - - - - - +
Raw musselse (Canada [Atlantic]) - - - - - +
a Samples of mushroom, ham, and salami were selected from enterotoxin-free samples and autoclaved before inoculation with the microorganisms (initial number,
1 to 2 x 104/g). For toxigenicity of the S. aureus strains, refer to the text.
b -, SE not detected; +, SE detected.
c Tests were done with and without addition of calf or rabbit normal serum (0.1 volume) to food extracts (1.0 volume) prior to enterotoxin analysis. +, positive result
(SE [nonspecific]) detected; -, neg

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตั้งค่า RIDASCREEN ชุด (R Biopharm GmbH ดาร์มส เยอรมนี), พาณิชย์เป็น staphylococcalชุดภาพ immunoassay enterotoxin (SE) ถูกประเมินประสิทธิภาพของ ชุดใช้จับ monovalentแอนตี้กับชนิด SE A กับ E (ทะเลดู); ดังนั้น มันพร้อมตรวจพบ และระบุการชนิด enterotoxin ข้อดีหลักของชุดจะ (i) สูงในระดับ specificity (ยกเว้นในธรรมชาติเกิด peroxidases องค์อาหาร หรือวัตถุดิบ และผลิตภัณฑ์ทางจุลชีววิทยาเนื่องจากเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ nonstaphylococcal ไม่ได้ทำให้เกิดผลบวกเท็จ นอกจากนี้ ไม่ cross-reactions นี่reagents ชุดที่สุภัค), (ii) ไวดี (วงเงินขั้นต่ำสามารถถูก 0.20-0.30 ngของ SEs ต่อ ml สารสกัดจากแฮม ไส้กรอก เห็ด และ 0.30-0.35 ng ของ SEs ต่อ ml สารสกัดจากชีสหรือ 0.50-0.75 ng ของ SEs ต่อกรัมของอาหารเช่นก๋วยเตี๋ยว แฮม ไส้กรอก ชีส และตุรกี), (iii) ความเรียบง่าย(ทดสอบชุดที่เปิดใช้งานโดยตรงของ SEs ในสารสกัดจากอาหารโดยไม่ต้องสกัดความยาวหรือความเข้มข้นขั้นตอน), rapidity (iv) (ใช้เวลาน้อยกว่า 3 h เพื่อทำการวิเคราะห์แต่ละ enterotoxin ชนิดทะเลดู), และ (v) ผลของ semiquantitative (ค่าความหนาแน่นออปติคอลสามารถอ่านได้กับเส้นโค้งมาตรฐานการประเมินจำนวน SE ในการดึงข้อมูล) ชุด RIDASCREEN เป็นเครื่องมือที่สะดวก รวดเร็ว และความน่าเชื่อถือสำหรับตรวจสอบและรหัสของ SEs ในอาหารกิน enterotoxins ผลิต โดยบางสายพันธุ์ของหมอเทศข้างลาย staphylococcus เป็นหนึ่งในสาเหตุของอาหารพิษในทวีปอเมริกาเหนือ เจริญเติบโตของสายพันธุ์ enterotoxigenicของหมอเทศข้างลาย S. กับประชากรอย่าง น้อย 106 เซลล์ต่อกรัมอาหารโดยทั่วไปถือว่าจำเป็นสำหรับการผลิตเพียงพอจำนวน enterotoxin ทำ intoxication ว่าอาหารการบริโภค (19) น้อยที่ 100 ถึง 200 ng ของ staphylococcalenterotoxin (SE) สามารถผลิตอาการ intoxication (7) ถึงตรวจหา enterotoxin นี้ระดับต่ำในอาหาร 100 กรัม (1-2 ngenterotoxin ต่อ g), วิธีการตรวจสอบที่สำคัญต่าง ๆ ได้รับจ้าง: (i) radioimmunoassay (เรีย) (5, 6, 14); (ii)การเชื่อมโยงเอนไซม์ immunosorbent assay (ELISA) หรือเอนไซม์immunoassay (EIA) (8, 9, 10, 12); และ (iii) การกลับรายการแฝงยาง agglutination ทดสอบ (RPLA) (2, 24, 25) การทดสอบเหล่านี้เทคนิค ชุดพาณิชย์หลายสุดตรวจสอบของ SE ชนิด A กับ E (ทะเลดู) ตัวอย่างมีชุด ELISA ห้า รวมชุดการ EIA ที่เรียกว่าการชุด Brommeli หรือชุดลูกสวิสซึ่งใช้แบบ monovalentจับระบบแอนติบอดีกับทะเลเพื่อดู และทำในประเทศสวิสเซอร์แลนด์ ภาพ EIA ชุด (TECRA) ในออสเตรเลียซึ่งมีแอนติบอดีจับ polyvalent กับทะเลเห็น ชุดเมมเบรนเป็น ELISA และชุดหลอดเป็น ELISA ทั้งสองในประเทศฝรั่งเศสและใช้แอนติบอดีจับ monovalentระบบกับทะเลดู และชุดการ EIA (RIDASCREEN)made in Germany which employs a monovalent capture antibodysystem against SEA to SEE, and one RPLA kit made inJapan which employs a monovalent capture antibody systemagainst SEA to SED. Of these commercial kits, the RIDASCREENkit is the most recent; therefore, little information onits efficacy is available.* Corresponding author. Mailing address: Microbiology ResearchDivision, Banting Research Centre, Health Canada, Tunney's Pasture,Ottawa, Canada KlA OL2. Phone: [phone] and [phone].Fax: [phone].The purpose of this study was to evaluate the specificity andsensitivity of the RIDASCREEN EIA kit for the detection ofSEs in various foods.MATERIALS AND METHODSSources of SE assay kits. RIDASCREEN EIA kits, whichutilize five monovalent capture antibodies against SEA to SEE,are produced by R-Biopharm GmbH, Darmstadt, Germany,and were obtained from Bioman Products Inc., Mississauga,Ontario, Canada. TECRA ETA kits, produced by BioenterprisesPty. Ltd., Roseville, New South Wales, Australia, wereobtained from International BioProducts Inc., Redmond,Wash.Sources of standard enterotoxins. Purified standard SEAand SEE were gifts from M. S. Bergdoll, Food ResearchInstitute, University of Wisconsin, Madison, Wis.; SEB waspurchased from Makor Chemical Co. Ltd., Jerusalem, Israel(this SE is now commercially available from Sigma ChemicalCo., St. Louis, Mo.); and SEC and SED were purchased fromToxin Technology, Inc., Sarasota, Fla.Enumeration of plate counts of aerobic microorganisms andS. aureus counts in foods. A 25-g food sample was placed in ablender jar containing 225 ml of 0.1% peptone water andblended for 1 to 2 min, after which serial decimal dilutions ofthe food homogenate were made in peptone water. Total platecounts of aerobic microorganisms were determined on trypticsoy agar plates by the surface spread plate method. Viable S.aureus counts were determined by plating a total of 1.0 ml ofdecimal dilutions onto three plates of Baird-Parker agar,followed by incubation at 35°C for 48 h (16). Presumptivelyidentified S. aureus strains were subsequently confirmed bymicroscopic examination, production of both coagulase andthermonuclease, and anaerobic utilization of glucose andmannitol (15, 16). To estimate the presence of elevated levels677Vol. 60, No. 2APPL. ENVIRON. MICROBIOL.TABLE 1. Specificity of the RIDASCREEN kits for detection ofSEs in spiked buffer and food extracts'Specific antibody SE detectedbor control A B C D EAnti-SEA + - - - -Anti-SEB - +Anti-SEC - - +Anti-SED - - - +Anti-SEE - - - - +Positive control + + + + +Negative controla Results were consistent in triplicate tests with each of the SEs in phosphatebufferedsaline (0.05 M phosphate in 0.15 M NaCl containing 0.05% NaN3, pH7.6) and in food extracts (ham, pasta, salami, and cheese).b Each of the purified standard enterotoxins SEA to SEE was spiked intoบัฟเฟอร์และสารสกัดของ SE ฟรีอาหารที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 1-2 ng/ml. +,พบ SE -, SE ที่ตรวจไม่พบหมอเทศข้างลาย S. nonviable ในอาหาร กิจกรรม thermonuclease ในแต่ละตัวอย่างอาหารถูกกำหนด โดยขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(15) . bacteriological สื่อทั้งหมดที่ใช้ได้ของห้องปฏิบัติการ Difco ดีทรอยต์ Mich. เว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่นสกัดของ SEs จากอาหาร สื่อสกัด SE ที่ใช้มี buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (ฟอสเฟต 0.05 M ใน 0.15 MNaCl ประกอบด้วย 0.05% NaN3, pH 7.6) สำหรับการ RIDASCREENชุดและ 0.25 M ตรีบัฟเฟอร์ (pH 8.0) สำหรับชุด TECRA เดียวคู่ และสามไดรฟ์ของ SE แยกกลางได้เพิ่มไห blender ประกอบด้วย 100 กรัมของสูง ปานกลาง- และความชื้นต่ำอาหารตัว อย่าง ตามลำดับ และการผสมผสานที่สูงความเร็วใน 2-3 นาที Homogenates ถูก centrifuged ที่16,300 x g สำหรับ 20 นาที และ supernatants มี sterilized ตามการกรองผ่านเป็น 0.45- กรองเมมเบรนอุ่มรูขุมขนขนาดวิเคราะห์ SE Enterotoxin assays โดยดำเนินการวิธีที่ขอแนะนำ โดยผู้ผลิตชุดการระบุไว้เป็นอย่างอื่น สารสกัดจากสีที่เกิดจากการ enzymicปฏิกิริยาของชุด RIDASCREEN และ TECRA มีสถาน-ตาราง 3 ยอดเงินต่ำสุดของ SEs ในบัฟเฟอร์และอาหารสารสกัดจากตรวจ โดยชุด RIDASCREENอย่างน้อยจำนวนอาสา (ng/ml) b ของ SE:testeda A B C D Eบัฟเฟอร์ 0.15 0.15 0.15 0.15 0.10ฮาม 0.25 0.25 0.30 0.25 0.25ไส้กรอก 0.20 0.25 0.30 0.20 0.25Cheese 0.35 0.35 0.40 0.35 0.35Mushroom 0.20 0.25 0.30 0.20 0.20a The buffer was phosphate-buffered saline (0.05 M phosphate in 0.15 M NaClcontaining 0.05% NaN3, pH 7.6). Food extracts were prepared with SE-freesamples by using the phosphate-buffered saline described above.b The values are averages for duplicate assays.sured by determining optical densities at 450 and 410 nm(OD450 and OD410), respectively, with microtiter readers, theBio-Kinetic Reader model EL 312 (Bio-Tek Instruments Inc.,Winoski, Vt.) for OD450 and the Minireader II (DynatechLaboratories Inc., Alexandria, Va.) for OD410.Enterotoxin production in foods. Five strains of S. aureus,designated 722, S-6, 361, 1151 M, and 326, that produce SEA,SEB, SEC, SED, and SEE, respectively, were obtained fromM. S. Bergoll, Food Research Institute, University of Wisconsin,Madison. One nontoxigenic control strain (S. aureus 205)was from our culture collection. Individual strains were grownin tryptic soy broth at 35°C for 48 h; cells were pooled bycentrifugation, washed twice with saline, resuspended in saline,and adjusted to an OD600 of 0.05 (about 1 to 2 x 107 cells perml) by using a photometer (Bausch and Lomb, Inc., Rochester,N.Y.). The cell suspension was further diluted 50 times withsaline, and then the diluted cell suspension (5 ml) was inoculatedinto the foods (100 g) to make initial S. aureus populationsof 1 to 2 x 104 cells per g and incubated at 25°C for 72h. Baird-Parker agar was used to determine S. aureus counts.The food samples selected were free from SEs, and some ofthem were autoclaved prior to inoculation of S. aureus strains.TABLE 2. Comparison of specificities of the RIDASCREEN and TECRA kits for detection of SEs in foods experimentally contaminatedwith S. marcescens and S. aureus and in fresh raw musselsResult with RIDASCREEN kits for SEb: Result withFood sample (origin) Contaminating organismaA B C D E Without Withserum serumMushroom S. marcescens HPB-SM-MI - +S. aureus 722 + - - - - + +NonedHam S. marcescens HPB-SM-MI - - - - - +S. aureus S-6 + + - - - + +Noned -Salami S. marcescens HPB-SM-MI - - - - - +S. aureus 361 - - + - - + +Noned - -Raw musselse (New Zealand) - - - - - +Raw musselse (Canada [Atlantic]) - - - - - +a Samples of mushroom, ham, and salami were selected from enterotoxin-free samples and autoclaved before inoculation with the microorganisms (initial number,1 to 2 x 104/g). For toxigenicity of the S. aureus strains, refer to the text.b -, SE not detected; +, SE detected.c Tests were done with and without addition of calf or rabbit normal serum (0.1 volume) to food extracts (1.0 volume) prior to enterotoxin analysis. +, positive result(SE [nonspecific]) detected; -, neg

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชุด SET RIDASCREEN (R-Biopharm GmbH, Darmstadt, Germany) เป็นเชิงพาณิชย์ staphylococcal
enterotoxin (SE) ชุด immunoassay ภาพได้รับการประเมินประสิทธิภาพ ใช้ชุดจับ monovalent
แอนติบอดีต่อ SE ชนิด A ถึง E (SEA เพื่อดู); จึงพร้อมกันตรวจสอบและระบุ
enterotoxin ประเภท ข้อได้เปรียบที่สำคัญของชุดที่มี (i) ระดับสูงของความจำเพาะ
(ยกเว้นตามธรรมชาติที่เกิดขึ้นperoxidases
องค์ประกอบอาหารหรือส่วนผสมและผลิตภัณฑ์จุลินทรีย์เนื่องจากการเจริญเติบโตของเชื้อจุลินทรีย์nonstaphylococcal ไม่ก่อให้เกิดผลบวกเท็จ; ยังไม่มีปฏิกิริยาข้ามหมู่
สารเคมีของชุดถูกตั้งข้อสังเกต), (ii) ความไวแสงที่ดีเยี่ยม (ข้อ จำกัด ที่ตรวจพบต่ำสุดอยู่ที่ 0.20-0.30
งะของSEs ต่อมิลลิลิตรของสารสกัดแฮมซาลามี่และเห็ดและ 0.30-0.35 งะของ SEs
ต่อมิลลิลิตรของสารสกัดจากชีสหรือ0.50 0.75 นาโนกรัมของ SEs ต่อกรัมของอาหารเช่นก๋วยเตี๋ยวแฮม, ไส้กรอกชีสและไก่งวง), (iii) ความเรียบง่าย
(คนชุดที่เปิดใช้งานการทดสอบโดยตรงของSEs ในสารสกัดจากอาหารโดยไม่จำเป็นต้องสกัดที่มีความยาวหรือความเข้มข้นขั้นตอน), ( iv) รวดเร็ว (มันใช้เวลาน้อยกว่า 3 ชั่วโมงที่จะเสร็จสิ้นการวิเคราะห์ของแต่ละ enterotoxin ชนิด SEA ไปดู) และ (v) มีผลเชิงกึ่งปริมาณของ (ค่าความหนาแน่นของแสงสามารถอ่านกับเส้นโค้งมาตรฐานในการประเมินปริมาณของSE ในสารสกัด ) ชุด RIDASCREEN คือสะดวกรวดเร็วและเครื่องมือที่เชื่อถือได้สำหรับการตรวจสอบและบัตรประจำตัวของSEs ในอาหาร. การกลืนกินของ Enterotoxins ผลิตโดยบางสายพันธุ์ของเชื้อStaphylococcus aureus เป็นหนึ่งในสาเหตุของอาหารเป็นพิษในทวีปอเมริกาเหนือ การเจริญเติบโตของสายพันธุ์ enterotoxigenic ของเชื้อ S. aureus ที่จะมีประชากร 106 เซลล์ต่อกรัมของอาหารโดยทั่วไปถือว่าจำเป็นสำหรับการผลิตที่เพียงพอของปริมาณของenterotoxin ที่จะทำให้เกิดความมึนเมาถ้าอาหารที่บริโภค(19) เป็นเพียง 100-200 นาโนกรัมของ staphylococcal enterotoxin (SE) สามารถผลิตอาการของมึนเมา (7) เพื่อตรวจสอบระดับต่ำของ enterotoxin ใน 100 กรัมของอาหาร (1-2 นาโนกรัมของenterotoxin ต่อกรัม) วิธีการตรวจสอบที่มีความสำคัญหลายคนได้รับการว่าจ้าง(i) ต่อ radioimmunoassay (RIA) (5, 6, 14); (ii) เป็นเอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน (ELISA) หรือเอนไซม์immunoassay (EIA) (8, 9, 10, 12); และ (iii) ตรงกันข้ามเรื่อย ๆน้ำยางทดสอบการเกาะติดกัน (RPLA) (2, 24, 25) สำหรับการทดสอบเหล่านี้เทคนิคในเชิงพาณิชย์ชุดหลายตอนนี้ใช้ได้สำหรับการตรวจสอบประเภทSE A ถึง E (SEA เพื่อดู) ตัวอย่างเช่นมีห้าชุด ELISA รวมทั้งการประเมินผลกระทบสิ่งแวดล้อมชุดที่เรียกว่าชุดBrommeli หรือชุดบอลสวิสซึ่งมีพนักงาน monovalent ระบบแอนติบอดีจับกับทะเลที่จะเห็นและทำในวิตเซอร์แลนด์; ชุดภาพประเมินผลกระทบสิ่งแวดล้อม (TECRA) ทำในประเทศออสเตรเลียซึ่งมีพนักงานแอนติบอดีจับpolyvalent กับ SEA เพื่อดู; ชุดเมมเบรนวิธี ELISA และชุดหลอด ELISA ทั้งที่เกิดขึ้นในฝรั่งเศสและการจ้างแอนติบอดีจับmonovalent ระบบกับ SEA เพื่อดู; และชุดประเมินผลกระทบสิ่งแวดล้อม (RIDASCREEN) ทำในประเทศเยอรมนีซึ่งมีพนักงานแอนติบอดีจับ monovalent ระบบกับทะเลที่จะดูและชุด RPLA หนึ่งที่เกิดขึ้นในประเทศญี่ปุ่นซึ่งมีพนักงานระบบแอนติบอดีจับmonovalent กับ SEA เพื่อ SED ชุดการค้าเหล่านี้ RIDASCREEN ชุดเป็นล่าสุด; ดังนั้นข้อมูลเล็ก ๆ น้อย ๆ ในการรับรู้ความสามารถของตนที่มีอยู่. * ผู้รับผิดชอบ ที่อยู่ทางไปรษณีย์: วิทยาวิจัยกองวัวศูนย์วิจัยสุขภาพแคนาดาทันนี่ของทุ่งหญ้าเลี้ยงสัตว์, ออตตาวาแคนาดากล้า OL2 โทรศัพท์: [phone] และ [phone]. โทรสาร. [phone] วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือการประเมินความจำเพาะและความไวของชุด RIDASCREEN ประเมินผลกระทบสิ่งแวดล้อมสำหรับการตรวจสอบของ SEs ในอาหารต่างๆ . วัสดุและวิธีการแหล่งที่มาของ SE ชุดทดสอบ RIDASCREEN EIA ชุดซึ่งใช้ห้าแอนติบอดีจับmonovalent กับทะเลจะเห็นมีการผลิตโดยR-Biopharm GmbH, ดาร์มสตัด, เยอรมนี, และได้รับจาก bioman ผลิตภัณฑ์อิงค์, Mississauga, Ontario, แคนาดา TECRA ชุดการทางพิเศษแห่งประเทศไทยที่ผลิตโดย Bioenterprises Pty จำกัด โรสวิลล์, นิวเซาธ์เวลส์ออสเตรเลียได้ที่ได้รับจากนานาชาติชีวภาพอิงค์เรดมอนด์, วอชิงตัน. แหล่งที่มาของ Enterotoxins มาตรฐาน SEA มาตรฐานบริสุทธิ์และดูเป็นของขวัญจากMS Bergdoll, อาหารวิจัยสถาบันมหาวิทยาลัยวิสคอนซินเมดิสันรัฐวิสคอนซิน.; SEB ถูกซื้อมาจากMakor เคมี จำกัด ประเทศอิสราเอล(SE นี้คือตอนนี้ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์จาก Sigma เคมีจำกัด เซนต์หลุยส์, Mo); และสำนักงานคณะกรรมการ ก.ล.ต. และ SED ที่ซื้อมาจากสารพิษTechnology, Inc, ซาราโซตา, ฟลอริด้า. แจงนับของการนับจานของจุลินทรีย์แอโรบิกและเอส นับ aureus ในอาหาร ตัวอย่างอาหาร 25 กรัมถูกวางไว้ในขวดเครื่องปั่นที่มี225 ml ของน้ำเปปโตน 0.1% และผสมสำหรับ1-2 นาทีหลังจากที่เจือจางทศนิยมอนุกรมของhomogenate อาหารที่ถูกสร้างขึ้นมาในน้ำเปปโตน แผ่นรวมนับจากจุลินทรีย์แอโรบิกได้รับการพิจารณาใน tryptic แผ่นวุ้นถั่วเหลืองโดยวิธีการแพร่กระจายพื้นผิวแผ่น ทำงานได้เอสนับเรียถูกกำหนดโดยการชุบรวม 1.0 มิลลิลิตรเจือจางทศนิยมสามบนแผ่นวุ้นBaird-ปาร์กเกอร์ตามมาด้วยการบ่มที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง (16) presumptively ระบุ S. aureus สายพันธุ์ที่ได้รับการยืนยันภายหลังจากการตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์การผลิตของทั้งสองcoagulase และthermonuclease, เพาะกายและการใช้ประโยชน์ของน้ำตาลกลูโคสและแมนนิทอล(15, 16) ในการประมาณการการปรากฏตัวของระดับยกระดับ677 ฉบับ 60, ฉบับที่ 2 APPL ENVIRON . Microbiol ตาราง 1. จำเพาะของชุด RIDASCREEN ในการตรวจหาSEs ในบัฟเฟอร์ถูกแทงและสารสกัดจากอาหาร 'เฉพาะแอนติบอดีSE detectedb หรือการควบคุม ABCDE ต่อต้าน SEA + - - - - ต่อต้าน SEB - + ป้องกัน ก.ล.ต. - - + ป้องกัน SED - - - + ต่อต้าน-SEE - - - - + ควบคุมบวก + + + + + ควบคุมเชิงลบผลมีความสอดคล้องในการทดสอบการเพิ่มขึ้นสามเท่ากับแต่ละ SEs ใน phosphatebuffered น้ำเกลือ (0.05 M ฟอสเฟตใน 0.15 M NaCl ที่มี 0.05% NaN3 ค่า pH 7.6) และสารสกัดจากอาหาร (แฮม, พาสต้า, ซาลามี่และชีส). b แต่ละมาตรฐานบริสุทธิ์เป็น Enterotoxin SEA ที่จะดูได้ถูกแทงเข้าบัฟเฟอร์และสารสกัดจากอาหารSE-ฟรีที่ความเข้มข้นสุดท้ายของ 1-2 ng / ml + SE ตรวจพบ -. SE ไม่พบการสูญสิ้นเชื้อS. aureus ในอาหารและการจัดกิจกรรมในแต่ละ thermonuclease ตัวอย่างอาหารที่ถูกกำหนดโดยวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้า(15) สื่อแบคทีเรียทั้งหมดที่ใช้เป็นผลิตภัณฑ์ของDifco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์, มิชิแกน. ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น. สกัด SEs จากอาหาร สื่อสกัด SE ใช้เป็นฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ(0.05 M ฟอสเฟตใน 0.15 M NaCl ที่มี 0.05% NaN3 ค่า pH 7.6) สำหรับ RIDASCREEN ชุดและ 0.25 M บัฟเฟอร์ Tris (pH 8.0) สำหรับชุด TECRA เดี่ยว, คู่และเล่มสามของ SE กลางสกัดถูกเพิ่มเข้าไปในขวดเครื่องปั่นที่มี100 กรัมของสูงกลางและต่ำความชื้นตัวอย่างอาหารตามลำดับและผสมที่สูงความเร็ว2-3 นาที homogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่16,300 XG 20 นาทีและ supernatants ถูกฆ่าเชื้อโดยการกรองผ่าน0.45- เอ่อรูขุมขนขนาดกรองเมมเบรน. SE วิเคราะห์ ตรวจ enterotoxin ได้ดำเนินการโดยวิธีการที่แนะนำโดยผู้ผลิตชุดเว้นแต่ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น สารสกัดจากสีที่เกิดจากทางเอนไซม์ปฏิกิริยาของชุด RIDASCREEN และ TECRA ถูกเด็ดขาดตาราง3. จำนวนเงินขั้นต่ำของ SEs ในบัฟเฟอร์และสารสกัดจากอาหารที่ตรวจพบโดยชุดRIDASCREEN ตัวอย่างขั้นต่ำที่ตรวจพบ amt (ng / ml) ของข SE: testeda ABCDE บัฟเฟอร์ 0.15 0.15 0.15 0.15 0.10 แฮม 0.25 0.25 0.30 0.25 0.25 ไส้กรอก 0.20 0.25 0.30 0.20 0.25 ชีส 0.35 0.35 0.40 0.35 0.35 เห็ด 0.20 0.25 0.30 0.20 0.20 บัฟเฟอร์เป็นฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (0.05 M ฟอสเฟตใน 0.15 M NaCl ที่มี 0.05% NaN3 ค่า pH 7.6) สารสกัดจากอาหารที่ถูกปรุงด้วย SE-ฟรีตัวอย่างโดยใช้น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่อธิบายข้างต้น. ขค่าที่เป็นค่าเฉลี่ยสำหรับการตรวจซ้ำ. sured โดยการกำหนดความหนาแน่นของแสงที่ 450 และ 410 นาโนเมตร(OD450 และ OD410) ตามลำดับกับผู้อ่านไมโคร, อ่านไบโอ Kinetic รุ่น EL 312 (Bio-Tek เครื่องมืออิงค์Winoski, เวอร์มอนต์.) สำหรับ OD450 และ Minireader ii (Dynatech Laboratories Inc. ซานเดรีย, เวอร์จิเนีย.) สำหรับ OD410. ผลิต Enterotoxin ในอาหาร ห้าสายพันธุ์ของเชื้อ S. aureus, กำหนด 722, S-6, 361, 1151 M และ 326 ที่ผลิตทะเลSEB กรรมการกำกับหลักทรัพย์และ SED และดูตามลำดับที่ได้รับจากเอ็ม เอส Bergoll, อาหารสถาบันวิจัยมหาวิทยาลัยวิสคอนซินเมดิสัน หนึ่งในสายพันธุ์ควบคุม nontoxigenic (เชื้อ S. aureus 205) เป็นคอลเลกชันจากวัฒนธรรมของเรา สายพันธุ์ส่วนบุคคลปลูกในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic ที่ 35 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง; เซลล์ถูกรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงล้างสองครั้งด้วยน้ำเกลือ, resuspended ในน้ำเกลือและปรับไปยังOD600 0.05 (ประมาณ 1 ถึง 2 x 107 เซลล์ต่อมล.) โดยใช้มาตรวัด (ที่ Bausch และ Lomb, Inc โรเชสเตอร์, นิวยอร์ก) เซลล์แขวนลอยที่ถูกปรับลดอีก 50 ครั้งด้วยน้ำเกลือแล้วเซลล์แขวนลอยเจือจาง(5 มล.) ได้รับเชื้อเข้าไปในอาหาร(100 กรัม) เพื่อให้เริ่มต้นประชากรเชื้อ S. aureus 1 ถึง 2 x 104 เซลล์ต่อกรัมและบ่มที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง วุ้น-แบร์ดปาร์กเกอร์ได้รับการใช้ในการกำหนดนับเชื้อ S. aureus. กลุ่มตัวอย่างที่เลือกอาหารที่มีอิสระจาก SEs และบางส่วนของพวกเขาถูกเบาก่อนที่จะมีการฉีดวัคซีนสายพันธุ์เชื้อS. aureus. ตารางที่ 2 การเปรียบเทียบความจำเพาะของชุด RIDASCREEN และ TECRA สำหรับ การตรวจสอบของ SEs ที่ปนเปื้อนในอาหารทดลองกับmarcescens เอสและเชื้อ S. aureus และหอยดิบสดผลกับชุดRIDASCREEN สำหรับ SEB: Result มีตัวอย่างอาหาร(แหล่งที่มา) ปนเปื้อน organisma BCDE โดยไม่ด้วยเซรั่มเซรั่มเห็ดเอสmarcescens HPB-SM- MI - + เอส เรีย + 722 - - - - + Noned แฮมเอส marcescens HPB-SM-MI - - - - - + เอส aureus S-6 + - - - + Noned - ซาลามี่เอส marcescens HPB-SM-MI - - - - - + เอส เรีย 361 - - + - - + Noned - - musselse ดิบ (นิวซีแลนด์) - - - - - + musselse ดิบ (แคนาดา [แอตแลนติก]) - - - - - + ตัวอย่างของเห็ดแฮมซาลามี่ได้รับเลือกจาก ตัวอย่าง enterotoxin ฟรีและเบาก่อนที่จะฉีดวัคซีนที่มีเชื้อจุลินทรีย์ (หมายเลขเริ่มต้นที่1 ถึง 2 x 104 / g) สำหรับ toxigenicity ของสายพันธุ์เชื้อ S. aureus, อ้างถึงข้อความ. ข - SE ไม่พบ; + SE ตรวจพบ. คทดสอบได้ทำที่มีและไม่มีการเพิ่มของลูกวัวหรือกระต่ายเซรั่มปกติ (0.1 ปริมาตร) สารสกัดอาหาร (1.0 ปริมาตร) ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ enterotoxin + ผลบวก(SE [เชิญชม]) ตรวจพบ - กัด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ridascreen ชุด ( r-biopharm GmbH , ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) , โฆษณา staphylococcal
ปน ( SE ) ที่มีภาพชุด , การประเมินประสิทธิภาพของมัน . ชุดใช้กัดจับ
แอนติบอดีต่อ se ชนิดอี ( ทะเลเห็น ) ; ดังนั้น จึงพร้อมกันตรวจจับและระบุชนิด
ปน .ข้อดีหลักของชุด ( ฉัน ) ระดับสูงของความจำเพาะ ( ยกเว้นธรรมชาติ
เกิดขึ้นเพอร์ กซิเดส องค์ประกอบอาหารหรือวัสดุและผลิตภัณฑ์จุลินทรีย์เนื่องจากการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์
nonstaphylococcal ไม่ก่อให้เกิดผลลัพธ์ false-positive นอกจากนี้ไม่ข้ามปฏิกิริยาระหว่างสารเคมีในชุดตรวจสอบ
)( 2 ) ความไวดี ( ขีดจำกัดต่ำสุดพบเป็น 0.20 0.30 กรัมต่อมิลลิลิตรของสารสกัด
ของ บริษัท แฮม ไส้กรอก และเห็ดและ 0.30 0.35 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตรของสารสกัดจาก บริษัท ชีส
หรือ 0.50 0.75 กรัมของ SES ต่อกรัมของอาหาร เช่น ก๋วยเตี๋ยว แฮม ไส้กรอก ชีส ตุรกี ) , ( iii ) (
ความเรียบง่ายชุดเปิดคัดเลือกโดยตรงของ SES ในอาหารสารสกัดโดยไม่ต้องสกัดยาวหรือความเข้มข้น
ขั้นตอน ) , ( 4 ) ความรวดเร็ว ( ใช้เวลาน้อยกว่า 3 ชั่วโมงให้เสร็จสมบูรณ์การวิเคราะห์แต่ละชนิดปนทะเล

เห็น ) และ ( 5 ) การบริโภคผล ( ค่าความหนาแน่นของแสง สามารถอ่านได้จากกราฟมาตรฐาน

ประมาณปริมาณของ SE ในการแยก )การ ridascreen Kit คือสะดวก รวดเร็ว และเชื่อถือได้สำหรับเครื่องมือตรวจจับและจำแนก

SES ในอาหาร รับประทานผลิตโดยการควบม้าสายพันธุ์หนึ่งของ
Staphylococcus aureus เป็นหนึ่งในสาเหตุของอาหารเป็นพิษ
ในทวีปอเมริกาเหนือ การเจริญเติบโตของเชื้อ S . aureus E
เพื่อประชากร 106 หรือมากกว่าเซลล์ / กรัมอาหาร
โดยทั่วไปถือว่าจำเป็นสำหรับการผลิตปริมาณที่เพียงพอของการทำให้มึนเมาปน

ถ้าเป็นอาหารที่บริโภค ( 19 ) เล็กน้อยเป็น 100 - 200 นาโน staphylococcal
ปน ( SE ) สามารถผลิตอาการมึนเมา ( 7 )

ตรวจสอบนี้ระดับต่ำปนใน 100 กรัมของอาหาร ( 1 ถึง 2 ของ
ของปน / กรัม ) หลายวิธีตรวจจับได้ไว
มาใช้ :( ผม ) radioimmunoassay ( RIA ) ( 5 , 6 , 14 ) ; ( 2 )
เป็น enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) หรือเอนไซม์
Immunoassay ( EIA ) ( 8 , 9 , 10 , 12 ) ; และ ( 3 ) กลับเรื่อยๆ
ยาง agglutination assay ( rpla ) ( 2 , 24 , 25 ) เทคนิคการทดสอบ
เหล่านี้ ชนิดติดตั้งอิสระทางการค้าหลายตอนนี้ใช้ได้สำหรับการตรวจหาชนิดของเซ
E ( ทะเลเพื่อดู ) ตัวอย่างเช่น
มีห้าวิธี ELISA ชนิดติดตั้งอิสระ