The RT-PCR method can be used not o

The RT-PCR method can be used not only to detect specific mRNAs but also to semi-quantitate their levels. Thus, one can compare levels of transcripts in different samples. This can be done in two different ways. One is to quantitate against levels of transcripts from a control, house-keeping gene (such as actin and GAPDH). (Transcription of house-keeping genes is believed to be unaffected by almost all experimental conditions.) The second method is to add an exogenous, primer-specific PCR template during PCR.
Semi-quantitation using exogenous standards

One can have exogenous standards (either RNA or DNA) that can be amplified using the same primers that amplify the transcript of interest. The standards are designed to have the same sequence as that of the transcript of interest except that they are 40-50 nucleotides shorter or longer. Different amounts of the standard is used in different PCR reactions (if the standard is an RNA, it is added prior to the RT step) and amplified for same number of cycles. The exogenous standard competes with the endogenous template, thus this strategy is also refered to as competitive RTPCR.

Products are electophoresed and quantitated by software and an 'amount of standard' vs 'band intensity' plot is drawn.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สามารถใช้วิธี RT-PCR จะตรวจระดับของ mRNAs เฉพาะแต่ยังรวมถึงกึ่ง quantitate ดังนั้น หนึ่งสามารถเปรียบเทียบระดับของใบแสดงผลในตัวอย่างที่แตกต่างกัน นี้สามารถทำได้สองวิธี หนึ่งจะ quantitate กับระดับของใบแสดงผลจากการควบคุม ยีนทำความสะอาด (เช่นแอกตินและ GAPDH) (Transcription ของยีนเก็บบ้านเชื่อว่าเป็นผลกระทบ โดยเงื่อนไขการทดลองเกือบทั้งหมด) วิธีสองคือการ เพิ่มแม่แบบ PCR บ่อย รองพื้นเฉพาะระหว่าง PCRวิเคราะห์หาปริมาณกึ่งใช้มาตรฐานบ่อยหนึ่งได้บ่อยมาตรฐาน (อาร์เอ็นเอหรือดีเอ็นเอ) ที่สามารถขยายได้โดยใช้ไพรเมอร์เหมือนที่ขยายเสียงบรรยายน่าสนใจ มาตรฐานออกแบบมาได้ตามลำดับเป็นที่รายงานผลการศึกษาน่าสนใจยกเว้นว่าจะ 40-50 นิวคลีโอไทด์สั้น หรือยาว จำนวนมาตรฐานที่แตกต่างกันจะใช้ในปฏิกิริยา PCR ต่าง ๆ (ถ้า เป็นอาร์เอ็นเอมาตรฐาน มันเพิ่มก่อนขั้นตอนการ RT) และเอาต์สำหรับจำนวนรอบเท่ากัน มาตรฐานบ่อยแข่งขันกับแบบ endogenous ดังนั้น กลยุทธ์นี้ยังเป็นโรงแรมเป็น RTPCR แข่งขันผลิตภัณฑ์เป็น electophoresed และ quantitated โดยซอฟต์แวร์ และวาดแผนการ 'จำนวนมาตรฐาน' vs 'วงความเข้ม'

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธี RT-PCR สามารถนำมาใช้ไม่เพียง แต่จะตรวจสอบเฉพาะ mRNAs แต่ยังกึ่ง quantitate ระดับของพวกเขา ดังนั้นหนึ่งสามารถเปรียบเทียบระดับของยีนที่แตกต่างกันในตัวอย่าง ซึ่งสามารถทำได้ในสองวิธีที่แตกต่างกัน หนึ่งคือการ quantitate กับระดับของยีนที่ควบคุมจากยีนบ้านรักษา (เช่นโปรตีนและ GAPDH) (ถอดความของยีนที่บ้านรักษาเชื่อว่าจะได้รับผลกระทบจากสภาพการทดลองเกือบทั้งหมด.) วิธีที่สองคือการเพิ่มภายนอกไพรเมอร์โดยเฉพาะแม่แบบ PCR ในช่วง PCR.
กึ่งปริมาณการใช้มาตรฐานภายนอกหนึ่งสามารถมีมาตรฐานภายนอก (ทั้งอาร์เอ็นเอ หรือดีเอ็นเอ) ที่สามารถขยายการใช้ไพรเมอร์เดียวกันกับที่ขยายหลักฐานที่น่าสนใจ มาตรฐานถูกออกแบบให้มีลำดับเดียวกับที่ของหลักฐานที่น่าสนใจยกเว้นว่าพวกเขาเป็น 40-50 นิวคลีโอสั้นหรือยาว จำนวนเงินที่แตกต่างกันของมาตรฐานที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR ที่แตกต่างกัน (ถ้ามาตรฐานคืออาร์เอ็นเอก็จะถูกเพิ่มก่อนที่จะมีขั้นตอน RT) และขยายจำนวนเดียวกันของรอบ มาตรฐานภายนอกแข่งขันกับแม่แบบภายนอกดังนั้นกลยุทธ์นี้นอกจากนี้ยังอ้างการแข่งขัน RTPCR. ผลิตภัณฑ์ที่มีการ electophoresed และวัดปริมาณโดยซอฟต์แวร์และ 'ปริมาณของมาตรฐานเทียบกับพล็อต' วงเข้ม 'จะถูกดึงมา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธี RT-PCR สามารถใช้ไม่เพียง แต่จะตรวจสอบเฉพาะรหัส แต่ยังกึ่ง กับระดับของพวกเขา ดังนั้นหนึ่งสามารถเปรียบเทียบระดับของใบในตัวอย่างที่แตกต่างกัน นี้สามารถทำได้ใน 2 วิธีที่แตกต่างกัน หนึ่งคือ เพื่อ กับกับระดับของ transcripts จากการควบคุมบ้านรักษายีน ( เช่น actin และ gapdh )( ถอดความของบ้านการรักษายีนที่เชื่อว่าจะได้รับผลกระทบจากสภาวะ การทดลองเกือบทั้งหมด ) วิธีที่สองคือการเพิ่มภายนอกเมอร์เฉพาะแม่แบบระหว่าง PCR PCR ใช้


ครึ่งเซลล์มาตรฐาน ประหนึ่งสามารถมีมาตรฐานจากภายนอก ( RNA หรือ DNA ) ที่สามารถขยายการใช้ไพรเมอร์ที่ขยายเดียวกัน บันทึกที่น่าสนใจมาตรฐานที่ถูกออกแบบให้มีลำดับเดิมของสำเนาที่น่าสนใจยกเว้นว่าพวกเขามี 40-50 ขนาดสั้นหรือยาว แตกต่างของปริมาณมาตรฐานที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR ที่แตกต่างกัน ( ถ้ามาตรฐานเป็นอาร์เอ็นเอ มันเพิ่มก่อน RT ขั้นตอน ) และขยายสำหรับจำนวนเดียวกันของรอบ มาตรฐานภายนอก ประชันกับ แม่แบบภายนอกดังนั้น กลยุทธ์นี้จะเรียกว่า rtpcr แข่งขัน

electophoresed ผ่านผลิตภัณฑ์และซอฟต์แวร์และเป็น ' มาตรฐาน ' VS ' วงเงินเข้ม ' แปลง
วาด