AbstractUricase is an important med

Abstract
Uricase is an important medical enzyme which can be used to determine urate in clinical analysis, to therapy gout, hyperuricemia, and tumor lysis syndrome. Uricase of Candida utilis was successfully expressed in Hansenula polymorpha under the control of methanol oxidase promoter using Saccharomyces cerevisiae alpha-factor signal peptide as the secretory sequence. Recombinant H. polymorpha MU200 with the highest extracellular uricase production was characterized with three copies of expression cassette and selected for process optimization for the production of recombinant enzyme. Among the parameters investigated in shaking flask cultures, the pH value of medium and inoculum size had great influence on the recombinant uricase production. The maximum extracellular uricase yield of 2.6 U/ml was obtained in shaking flask culture. The yield of recombinant uricase was significantly improved by the combined use of a high cell-density cultivation technique and a pH control strategy of switching culture pH from 5.5 to 6.5 in the induction phase. After induction for 58 h, the production of recombinant uricase reached 52.3 U/ml (about 2.1 g/l of protein) extracellularly and 60.3 U/ml (about 2.4 g/l) intracellularly in fed-batch fermentation, which are much higher than those expressed in other expression systems. To our knowledge, this is the first report about the heterologous expression of uricase in H. polymorpha.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นามธรรม
Uricase เป็นเอนไซม์ทางการแพทย์สำคัญที่สามารถใช้เพื่อกำหนด urate ในการวิเคราะห์ทางคลินิก การบำบัดเก็าท hyperuricemia และเนื้องอก lysis อาการ Uricase Candida utilis ได้สำเร็จแสดงใน Hansenula polymorpha ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ oxidase เมทานอลโดยใช้ Saccharomyces cerevisiae อัลฟาคูณสัญญาณเพปไทด์เป็นลำดับ secretory Recombinant H. polymorpha MU200 ผลิต extracellular uricase สูงลักษณะกับสำเนาเทปนิพจน์ และสำหรับเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการผลิตของเอนไซม์ recombinant ในพารามิเตอร์การตรวจสอบในวัฒนธรรมหนาวสั่น ค่า pH ขนาด inoculum และสื่อมีอิทธิพลมากในการผลิต recombinant uricase ผลตอบแทนสูงสุด extracellular uricase ของ 2.6 U/ml ถูกรับในวัฒนธรรมหนาวสั่น ผลตอบแทนของ recombinant uricase ถูกปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญ โดยใช้เทคนิคการปลูกเซลล์ความหนาแน่นสูงรวมและกลยุทธ์การควบคุมค่า pH ของการเปลี่ยนวัฒนธรรม pH ตั้งแต่ 5.5 – 6.5 ในระยะเหนี่ยวนำ หลังจากเหนี่ยวนำสำหรับ 58 h การผลิต recombinant uricase ถึง 52.3 U/ml (ประมาณ 21 g/l ของโปรตีน) extracellularly และ 60.3 U/ml (เกี่ยวกับ 2.4 g/l) ในชุดอาหารหมัก intracellularly ซึ่งสูงกว่าที่แสดงในระบบอื่น ๆ ของนิพจน์ ความรู้ของเรา นี้เป็นรายงานแรกเกี่ยวกับนิพจน์ heterologous ของ uricase ใน H. polymorpha.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อ
Uricase เป็นเอนไซม์ทางการแพทย์ที่สำคัญที่สามารถนำมาใช้ในการกำหนดเกลือยูเรตในการวิเคราะห์ทางคลินิกเพื่อการบำบัดโรคเกาต์, hyperuricemia และซินโดรมสลายเนื้องอก Uricase ของ Candida utilis ถูกแสดงที่ประสบความสำเร็จใน Hansenula polymorpha ภายใต้การควบคุมของเมทานอลออกซิเดสผู้ก่อการใช้ Saccharomyces cerevisiae อัลฟาปัจจัยเปปไทด์สัญญาณเป็นลำดับหลั่ง recombinant MU200 H. polymorpha กับการผลิต uricase สูงสุด extracellular ก็มีลักษณะสามสำเนาเทปการแสดงออกและการเลือกสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการในการผลิตเอนไซม์ recombinant ท่ามกลางพารามิเตอร์ที่ตรวจสอบในขวดเขย่าวัฒนธรรม, ค่าพีเอชที่มีขนาดกลางและเชื้อมีอิทธิพลอย่างมากต่อการผลิต uricase recombinant ผลผลิต uricase สูงสุด extracellular 2.6 U / ml ที่ได้รับในขวดเขย่าขวด ผลผลิตของ uricase recombinant ได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญโดยรวมของการใช้งานสูงเซลล์ความหนาแน่นเทคนิคการเพาะปลูกและกลยุทธ์การควบคุมค่าความเป็นกรดด่างของการเปลี่ยนวัฒนธรรม 5.5-6.5 ในขั้นตอนการเหนี่ยวนำ หลังจากที่เหนี่ยวนำสำหรับ 58 ชั่วโมง, การผลิตของ uricase recombinant ถึง 52.3 U / ml (ประมาณ 2.1 กรัม / ลิตรของโปรตีน) extracellularly และ 60.3 U / ml (ประมาณ 2.4 กรัม / ลิตร) ภายในเซลล์ในการหมักอาหารแบทช์ซึ่งจะสูงกว่า สิ่งที่ได้แสดงในระบบการแสดงออกอื่น ๆ เพื่อความรู้ของเรานี้เป็นรายงานครั้งแรกเกี่ยวกับการแสดงออกของ heterologous uricase ใน H. polymorpha

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยูริกเคสนามธรรม
มีความสำคัญทางการแพทย์เอนไซม์ที่สามารถใช้เพื่อตรวจสอบเกลือยูเรตในการวิเคราะห์ทางคลินิก , การรักษาโรคเกาต์ hyperuricemia และเนื้องอกการสลายซินโดรม ยูริกเคสของ Candida utilis ได้แสดงออกในแฮนเซนูลาโดยภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ของเมทานอลโดยใช้ Saccharomyces cerevisiae อัลฟาปัจจัยสัญญาณเปปไทด์เป็นลำดับ secretory . รีคอมบิแนนท์ hโดย mu200 กับการผลิตยูริกเคสภายนอกสูงสุดคือลักษณะที่มีสามชุดของการแสดงออกของเทปและเลือกกระบวนการเพิ่มประสิทธิภาพในการผลิตรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ ของพารามิเตอร์ที่ศึกษาในขวดเขย่าวัฒนธรรม ค่า pH ของขนาดกลางและขนาดโดยมีอิทธิพลอย่างมากต่อการผลิตรีคอมบิแนนท์ยูริกเคส .สูงสุดและยูริกเคสผลผลิต 2.6 U / ml ในขวดเขย่าวัฒนธรรม . ผลผลิตของยีนยูริกเคสอย่างมีนัยสำคัญปรับปรุงโดยรวมของการใช้สูงความหนาแน่นของการเพาะปลูกเทคนิคและกลยุทธ์การควบคุม pH เปลี่ยนวัฒนธรรมจาก pH 5.5 ถึง 6.5 ในการเหนี่ยวนำเฟส หลังการ 58 H , การผลิตรีคอมบิแนนท์ยูริกเคสถึง 6 U / ml ( ประมาณ 21 กรัม / ลิตร ) และโปรตีน extracellularly 60.3 U / ml ( ประมาณ 2.4 กรัม / ลิตร ) ในการหมักแบบอาหาร intracellularly ซึ่งจะสูงกว่าผู้ที่แสดงในระบบการแสดงออกอื่น ๆ เพื่อความรู้ของเรา นี่คือรายงานแรกเกี่ยวกับการแสดงออกชนิดของยูริกเคสใน H .
โดย .