. The membrane filtration (50,000 c

. The membrane filtration (50,000 cut-off) step was carried out due to the expected molecular size (about 70 kDa) of recombinant SIase and the removal of ammonium sulfate from the enzyme solution. The protein solution was applied onto a Ni–NTA affinity column (Qiagen, Hilden, Germany). Before eluting recombinant SIase, Ni–NTA affinity column was washed with washing buffer (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, and 20 mM imidazole, pH 8.0), and the recombinant SIase was eluted with elution buffer (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, and 250 mM imidazole,
pH 8.0). The eluant’s purity was checked by sodium dodecyl
sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

. ขั้นเยื่อกรอง (50,000 ตัด) ได้ดำเนินการเนื่องจากขนาดโมเลกุลที่คาดไว้ (ประมาณ 70 kDa) ของ recombinant SIase และการกำจัดแอมโมเนียซัลเฟตจากโซลูชันเอนไซม์ โซลูชันโปรตีนถูกนำไปใช้ลงในคอลัมน์ความสัมพันธ์ Ni – NTA (Qiagen, Hilden เยอรมนี) ก่อน eluting recombinant SIase คอลัมน์ความสัมพันธ์ Ni – NTA ล้างพร้อมล้างบัฟเฟอร์ (50 มม. NaH2PO4, 300 มม. NaCl และอิมิดา โซล 20 มม. pH 8.0), และ recombinant SIase คือ eluted กับบัฟเฟอร์ชะ (NaH2PO4 50 มม. 300 มม. NaCl และอิมิดา โซล 250 mMpH 8.0) ตรวจสอบความบริสุทธิ์ของ eluant โดย dodecyl โซเดียมอิเจซัลเฟต – การตรวจสอบวิเคราะห์ (SDS – หน้า)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. กรองเมมเบรน (50,000 ตัด) ขั้นตอนที่ได้ดำเนินการเนื่องจากขนาดที่คาดว่าโมเลกุล (ประมาณ 70 กิโลดาลตัน) ของ recombinant SIase และการกำจัดของแอมโมเนียมซัลเฟตจากสารละลายเอนไซม์ วิธีการแก้ปัญหาโปรตีนถูกนำมาใช้บนคอลัมน์ความสัมพันธ์ Ni-NTA (Qiagen, ฮิลเดน, เยอรมนี) ก่อน eluting recombinant SIase คอลัมน์ความสัมพันธ์ Ni-NTA ถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์ซักผ้า (50 มิลลิ NaH2PO4, 300 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์และ 20 มิลลิเมตร imidazole ค่า pH 8.0) และ recombinant SIase ถูกชะด้วยบัฟเฟอร์ชะ (ขนาด 50 มม NaH2PO4, 300 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์ และ 250 มิลลิ imidazole,
ค่า pH 8.0) ความบริสุทธิ์ eluant ถูกตรวจสอบโดยโซเดียมโดเดซิล
ซัลเฟต polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

. เมมเบรนกรอง ( 50 , 000 ตัด ) ขั้นดำเนินการ เนื่องจากมีขนาดโมเลกุล ( คาดว่าประมาณ 70 กิโลดาลตัน ) ของยีน siase และการกำจัดแอมโมเนียม ซัลเฟตจากสารละลายเอนไซม์ . โปรตีนในสารละลายที่ใช้ลงบนผมและ NTA affinity คอลัมน์ ( QIAGEN Hilden , เยอรมนี ) ก่อนใช้ hexane siase , Ni และ NTA affinity คอลัมน์ล้างกับล้างบัฟเฟอร์ ( 50 มม. nah2po4 300 mM NaCl และอิมิดาโซล 20 มม. pH 8.0 ) และ siase รีคอมบิแนนท์ ( ตัวอย่างกับบัฟเฟอร์ ( 50 มม. nah2po4 300 mM NaCl และอิมิดาโซล 250 มิลลิเมตรpH 8.0 ) ของ eluant ความบริสุทธิ์ถูกตรวจสอบโดยโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS - polyacrylamide gel electrophoresis ( หน้า )