and centrifuged at 12,000 g for 15 minutes. Fifty units
of Benzonase (250 units/mL; Sigma) was added to the
mixture and suitably stored at 80 C until use after
quantitation by the Bradford method. For 2-DE analysis,
pH 3e10 immobilized pH gradient (IPG) strips
(Amersham Biosciences, UK, Ltd) were rehydrated in
swelling buffer containing 7 M urea, 2 M thiourea, 0.4%
(w/v) Dithiothreitol, and 4% (w/v) CHAPS. The protein
lysates (500 mg) were cup-loaded into the rehydrated
IPG strips using a Multiphor II apparatus (Amersham
Biosciences, UK, Ltd) for a total of 57 kVh. The twodimensional
separation was performed on 8e16% (v/
v) linear gradient sodium dodecyl sulfate (SDS)-polyacrylamide
gels. Following fixation of the gels for 1
hour in a solution of 40% (v/v) methanol containing 5%
(v/v) phosphoric acid, the gels were stained with
Colloidal Coomassie Blue G-250 solution for 5 hours.
The gels were destained in 1% (v/v) acetic acid for 4
hours and then imaged using a GS-710 imaging calibrated
densitometer (Bio-Rad).
และหมุนเหวี่ยงที่ 12,000? กรัมเป็นเวลา 15 นาที ห้าสิบหน่วยของ Benzonase (250 หน่วย / มิลลิลิตร; ซิกม่า) ถูกเพิ่มลงในส่วนผสมที่เหมาะสมและเก็บไว้ที่80 องศาเซลเซียสจนการใช้งานหลังจาก? ปริมาณโดยวิธี Bradford สำหรับการวิเคราะห์ 2 DE, ค่า pH 3e10 ไล่ระดับค่า pH ตรึง (IPG) แถบ(Amersham ชีววิทยาศาสตร์, สหราชอาณาจักร, Ltd) ได้รับการคืนรูปในบวมบัฟเฟอร์ที่มี7 M ยูเรีย 2 M thiourea 0.4% (w / v) dithiothreitol และ 4% ( w / v) CHAPS โปรตีนlysates (500 มก.) เป็นถ้วยโหลดลงใน rehydrated แถบ IPG ใช้อุปกรณ์ Multiphor ii (Amersham ชีววิทยาศาสตร์, สหราชอาณาจักร, Ltd) สำหรับจำนวน 57 KVH twodimensional แยกกำลังดำเนินการ 8e16% (v / v) มีโซเดียมลาดเชิงเส้นโดเดซิลซัลเฟต (SDS) -polyacrylamide เจล ต่อไปนี้การตรึงของเจลเป็นเวลา 1 ชั่วโมงในการแก้ปัญหา 40% (v / v) เมทานอลที่มี 5% (v / v) กรดฟอสฟเจลที่ถูกย้อมด้วยสีColloidal Coomassie สีฟ้าแก้ปัญหา G-250 5 ชั่วโมง. เจลมี destained 1% (v / v) กรดอะซิติก 4 ชั่วโมงแล้วถ่ายภาพโดยใช้การถ่ายภาพ GS-710 การสอบเทียบdensitometer (Bio-Rad)
การแปล กรุณารอสักครู่..

ไฟฟ้าที่ 12000 กรัมเป็นเวลา 15 นาที
ของหน่วย benzonase ห้าสิบ ( 250 หน่วยต่อมิลลิลิตร ; Sigma ) ถูกเพิ่มลงในส่วนผสมที่พอเหมาะ
ไว้ที่ 80 C จนกระทั่งหลังจากใช้
เซลล์โดยวิธีแบรดฟอร์ด การวิเคราะห์แผ่นอ อ , 3e10
ตรึงลาด ( IPG ) แถบ
( ชาม ชีววิทยา อังกฤษ , Ltd ) ได้ทำการ รีไฮเดรทมในบัฟเฟอร์ที่มียูเรีย
บวม 7 เมตร , 2 เมตร Thiourea , 0.4 %
( w / v ) บัตรแข็ง ,และ 4 % ( w / v ) คนอื่น โปรตีน
lysates ( 500 มิลลิกรัม ) ถ้วยโหลดลงได้ทำการ รีไฮเดรทม
IPG แถบเครื่องมือ ( ใช้ multiphor 2 ชาม
ชีววิทยาศาสตร์ , UK Ltd ) รวมเป็น 57 kvh . การแยก twodimensional
มีการ 8e16 % ( v /
V ) เส้นไล่ระดับโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS - polyacrylamide
เจล ต่อไปนี้การตรึงของเจล 1
ชั่วโมงในสารละลาย 40 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ส่วนที่ 5 %
( v / v ) กรดฟอสฟอริค เจลใช้ย้อม
คอลลอยด์ g-250 เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า 5 ชม.
เจลเป็น destained 1% ( v / v ) กรด 4
ชั่วโมงแล้วอื่นๆใช้ ภาพ gs-710 สอบเทียบ
เครื่อง ( ไบโอ ราด )
การแปล กรุณารอสักครู่..
