Peripheral blood mononuclear cells

Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from
the peripheral blood of three healthy donors as previously
described (Foligne et al., 2007). Briefly, after Ficoll gradient
centrifugation (Pharmacia, Uppsala, Sweden), the mononuclear
cells were collected, washed in RPMI 1640 medium (Live Technol-
ogies, Paisley, Scotland) and adjusted to 2 Â 106 cells/mL in RPMI
1640 supplemented with gentamicin (150 mg/mL), L-glutamine
(2 mM), and 10% Foetal Calf Serum (Gibco-BRL). PBMC (2 Â 106
cells/mL) were seeded in 24-well tissue culture plates (Corning, N.Y.
USA). Ten microlitres of thawed bacterial suspensions of the micro-
organisms to be tested and the reference strains were then added.
The latter were prepared as follows: stationary-phase grown mi-
crobes were washed twice in PBS, resuspended in PBS containing
20% glycerol using a portable photometer (Densimat, bioMerieux,
Craponne, France) to adjust cell density to McFarland 3 (Araujo
et al., 2004) and then stored ate80 C until further use. For bac-
teria grown in milk, pellets were previously washed extensively
with citrate buffer (20 g LÀ1) in order to retrieve the accompanying
casein precipitates. These bacterial preparations, standardised in
terms of equivalent/equal cell biomass, corresponded to approxi-
mately 2 Â 108 CFU/mL, for E. coli. This resulted in a bacteria-to-
immune cell ratio of approximately 10:1. PBS containing 20%

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เลือดต่อพ่วง mononuclear เซลล์ (PBMC) ถูกแยกต่างหากจากเลือดของผู้บริจาคเพื่อสุขภาพสามก่อนหน้านี้เป็นอุปกรณ์ต่อพ่วง อธิบาย (Foligne et al., 2007) Briefly หลังจาก Ficoll ไล่ระดับสีcentrifugation (Pharmacia, Uppsala สวีเดน), แบบ mononuclearเซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวม ล้างใน RPMI 1640 (สด Technol-ogies, Paisley สกอตแลนด์) และปรับปรุง 2 Â 106 เซลล์/มล.ใน RPMIเสริมกับ gentamicin (150 mg/mL), L glutamine 1640(มม. 2), และ 10% Foetal Calf Serum (Gibco BRL) PBMC (2 Â 106เซลล์/มล.) ถูก seeded ในดี 24 เยื่อแผ่น (คอร์นทำ N.Y.สหรัฐอเมริกา) Microlitres สิบของฟโร thawed แบคทีเรียไมโคร-สิ่งมีชีวิตที่จะทดสอบและสายพันธุ์อ้างอิงถูกเพิ่มด้วยหลังถูกเตรียมไว้เป็นดังนี้: เครื่องเขียนระยะปลูก mi -crobes ถูกล้างใน PBS, resuspended ใน PBS ประกอบด้วยสอง ใช้แบบพกพาเครื่องวัดความสว่าง (Densimat, bioMerieux กลีเซอร 20%Craponne ฝรั่งเศส) เพื่อปรับความหนาแน่นของเซลล์เป็น 3 McFarland (Araujoร้อยเอ็ด al., 2004) แล้ว เก็บไว้ ate80 C จนกระทั่งใช้ต่อไป สำหรับบัคเติบโตในนม teria ขี้ถูกก่อนหน้านี้ล้างอย่างกว้างขวางด้วยซิเตรตบัฟเฟอร์ (20 g LÀ1) เพื่อดึงข้อมูลพร้อมเคซีน precipitates แบบนี้เตรียมแบคทีเรีย ในเงื่อนไขของเซลล์เทียบเท่ากับ/เท่ากับชีวมวล corresponded กับ approxi-mately 2 Â 108 CFU/mL สำหรับ E. coli ส่งผลให้แบคทีเรียมี-ไป-อัตราส่วนของเซลล์ภูมิคุ้มกันประมาณ 10:1 PBS ประกอบด้วย 20%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์โลหิตโมโนนิวเคลียร์ (PBMC)
ที่แยกได้จากเลือดของผู้บริจาคที่มีสุขภาพดีทั้งสามไว้ก่อนหน้านี้ที่อธิบาย
(Foligne et al., 2007) Brie ชั้นปีหลังจาก Ficoll
ลาดหมุนเหวี่ยง(Pharmacia อัปซาลา, สวีเดน)
ที่โมโนนิวเคลียร์เซลล์ถูกเก็บล้างในRPMI 1640 กลาง (สดเทคโนโลยี
ogies ผ้าสกอตแลนด์) และปรับ 2 ย 106 เซลล์ / มิลลิลิตรใน RPMI
1640 เสริมด้วย gentamicin (150 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร), L-glutamine
(2 มิลลิเมตร) และ 10% ของทารกในครรภ์ลูกวัวเซรั่ม (Gibco-BRL) PBMC (2 ย 106
เซลล์ / มิลลิลิตร) เมล็ดในจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 24 หลุม (Corning,
นิวยอร์กสหรัฐอเมริกา) สิบ microlitres
ของสารแขวนลอยแบคทีเรียละลายของไมโครสิ่งมีชีวิตที่จะได้รับการทดสอบและสายพันธุ์อ้างอิงถูกเพิ่มแล้ว.
หลังได้จัดทำดังนี้นิ่งเฟสเติบโต mi-
crobes ถูกล้างครั้งที่สองในพีบีเอส resuspended
ในพีบีเอสที่มีกลีเซอรอล20% โดยใช้ มาตรวัดแบบพกพา (Densimat, bioMerieux,
Craponne, ฝรั่งเศส) เพื่อปรับความหนาแน่นของเซลล์ McFarland 3 (Araujo
et al., 2004) และเก็บไว้แล้ว ate80 C จนกว่าจะใช้งานต่อไป สำหรับ bac-
เทอเรียที่ปลูกในนมเม็ดถูกล้างก่อนหน้านี้อย่างกว้างขวางกับบัฟเฟอร์ซิเตรต (20 กรัม LA1) เพื่อที่จะดึงมาพร้อมกับตกตะกอนเคซีน เหล่านี้เตรียมแบคทีเรียมาตรฐานในแง่ของเทียบเท่า / ชีวมวลมือถือเท่ากันโดยประมาณตรงกับ mately 2 108 โคโลนี / มิลลิลิตรสำหรับเชื้อ E. coli นี้ส่งผลให้แบคทีเรีย-to-อัตราส่วนเซลล์ภูมิคุ้มกันประมาณ 10: 1 พีบีเอสที่มี 20%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์เม็ดเลือดขาวปกติ ( 2 ) ที่แยกได้จากเลือดของอุปกรณ์ต่อพ่วง 3

สุขภาพผู้บริจาคเป็นก่อนหน้านี้อธิบาย ( foligne et al . , 2007 ) บรี fl Y หลังจาก ficoll ลาด
3 ( มุ่งมั่น อุปซอลา , สวีเดน ) , เซลล์ปกติ
รวบรวม RPMI 1640 ล้างกลาง ( สด -
ogies Paisley , เทคโนโลยี , สกอตแลนด์ ) และปรับ 2 Â 106 เซลล์ / มิลลิลิตรใน RPMI
1640 เสริมด้วยยาเจนตาไมซิน ( 150 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) Glutamine
( 2 มม. ) และ 10% เซรั่ม foetal น่อง ( gibco BRL ) 2 ( 2 Â 106
เซลล์ / มิลลิลิตร ) มีเมล็ดด้วยการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อใน 24 แผ่น ( Corning , NY
สหรัฐอเมริกา ) 10 microlitres ของแบคทีเรียละลายแขวนลอยของไมโคร -
สิ่งมีชีวิตที่จะถูกทดสอบและสายพันธุ์อ้างอิง แล้วเพิ่ม .
หลังเตรียมดังนี้ เครื่องเขียนเฟสโต -
มิcrobes ถูกล้างสองครั้งในพีบีเอส resuspended ใน PBS ที่มี
20% รอลโดยใช้เครื่องมือแบบพกพา ( densimat biomerieux
, , craponne , ฝรั่งเศส ) การปรับความหนาแน่นเซลล์ แมคฟาร์แลนด์ ( Araujo
et al . , 2004 ) แล้วเก็บไว้ ate80 C จนกว่าจะใช้ต่อไป สำหรับบัค -
เทเรียโต นม เม็ด เคยล้างอย่างกว้างขวาง
กับซิเตรตบัฟเฟอร์ ( 20 กรัมต่อลิตรÀ 1 ) เพื่อที่จะดึงมา
เคซีนตะกอน . การเตรียมเชื้อเหล่านี้ มาตรฐานในแง่ของเทียบเท่า /
ชีวมวลเซลล์เท่ากัน สอดคล้องกับ approxi -
mately 2 Â 108 CFU / ml ใน E . coli นี้ส่งผลให้แบคทีเรีย -
ของเซลล์ภูมิคุ้มกันในอัตราส่วนประมาณ 10 : 1 . พีบีเอสความเข้มข้น 20%