Our results from both in vitro and

Our results from both in vitro and in vivo experiments indicate
that the oxidatively modified extracellular mtDNA possesses a
greater potential to activate pDCs than native mtDNA. In line with
our observations, in a prior study, purified mtDNA and even an
ODN that lacked CpG motifs but contained a single 8-oxoG residue
induced arthritis when injected intraarticularly in mice [30].
In contrast, an ODN with exactly the same sequence, except that
it lacked the oxidized base, was totally inert in vivo [30]. In another
study, CpG ODN molecules, in which a guanine base was
substituted with 8-oxoG, induced a significantly higher amount
of TNF-α from RAW264.7 macrophage-like cells than control
unsubstituted ones [51]. The 8-oxoG-containing DNA-induced
increase in TNF-α production was also observed in primary
cultured macrophages isolated from wild-type mice, but not
observed in those from TLR9 knockout mice [51]. In addition,
subcutaneous injection of 8-oxoG-containing CpG ODN led to an
increase in footpad swelling compared to that of regular CpG ODN
[51].
In our in vivo experiments the phenotypic properties of murine
pDCs in peripheral blood were investigated by means of flow
cytometry, whereas cytokine and chemokine levels in the serum
samples were measured by ELISA. It is important to note that
while flow cytometric analysis provides unambiguous data about
the pDCs’ phenotypic changes, the detected cytokines and chemokine
could be released by diverse cell types responding to
mtDNA treatment. In humans, TLR9 expression in mononuclear
blood cells and lymphoid tissues is restricted to B cells and pDCs,
whereas in mice, TLR9 expression has also been demonstrated in
macrophages, myeloid DCs, and activated T cells in addition to
pDCs and B cells [52]. Despite this fact, the results of our in vivo
experiments correlate very well with those of cell culture assays.
Both in human pDC cultures and in mice, treatment with oxidized
mtDNA resulted in much higher production of all tested mediators,
except IFN-α, than stimulation with the native form. The native
form of mtDNA proved to be a better inductor of IFN-α release.
Based on these observations, it seems that effects of oxidized
mtDNA on TLR9-expressing cells are similar to those of type B CpG
ODNs. It has been previously shown that type B CpG ODNs
predominantly activate pDCs in a manner that results in phenotypic
changes and proinflammatory cytokine production, as well
as weak induction of type I IFN responses [53]. The functional
activity of type B CpG ODNs is attributed to their localization to
lysosome-associated membrane protein 1-positive endosomes,
while activation of TLR9 by type A CpG ODNs occurs in transferrin
receptor-positive endosomes [54]. Although prior X-ray crystal
and NMR structures had showed that DNA with 8-oxoG lesions
appears virtually identical to the corresponding unmodified
duplex, recent thermodynamic studies have indicated that
8-oxoG has a destabilizing influence [55]. The presence of
8-oxoG has a profound effect on the level and nature of DNA
hydration, indicating that the environment around an 8-oxoG:C is
fundamentally different than that found at G:C [55]. The instability
of the 8-oxoG modification is attributed to changes in the hydrophilicity
of the base and may influence the recognition of oxidized
mtDNA by TLR9.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระบุว่า ผลจากการทดลองทั้งในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลองของเราว่า mtDNA extracellular oxidatively แก้ไขครบถ้วนเป็นศักยภาพมากขึ้นเพื่อเรียกใช้ pDCs กว่า mtDNA ดั้งเดิม สอดคล้องกับข้อสังเกตุของเรา ในการศึกษาก่อนหน้านี้ บริสุทธิ์ mtDNA และแม้แต่การODN ที่โดดเด่นประเภทวัสดุสิ้นเปลืองขาด แต่ประกอบด้วยสารตกค้างเดียว 8-oxoGอักเสบอาจเมื่อฉีด intraarticularly ในหนู [30]ในทางตรงข้าม การ ODN ด้วยว่าตามลำดับ ยกเว้นที่มันขาดฐานตกแต่ง ได้ในสัตว์ทดลองทั้งหมด inert [30] ในอีกศึกษา โมเลกุล ODN ประเภทวัสดุสิ้นเปลือง ฐาน guanine ได้แทน ด้วย 8 oxoG เกิดเป็นจำนวนสูงมากของ TNF ด้วยกองทัพจากเซลล์ macrophage เหมือน RAW264.7 กว่าควบคุมunsubstituted คน [51] 8-oxoG-ประกอบด้วยเกิดจากดีเอ็นเอเพิ่มในการผลิต TNF ด้วยกองทัพยังได้สังเกตในหลักแยกต่างหากจากหนูป่าชนิด แต่ไม่บังเอิญอ่างสังเกตในจากหนูชนะน็อกโดยเทคนิค TLR9 [51] นอกจากนี้ฉีดใต้ของ ODN ประเภทวัสดุสิ้นเปลือง 8-oxoG-ประกอบด้วยไฟ led เพื่อการfootpad บวมเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับของ ODN ประเภทวัสดุสิ้นเปลืองทั่วไป[51]ในการทดลองในสัตว์ทดลองของคุณสมบัติของ murine ไทป์pDCs ในเลือดต่อพ่วงถูกสอบสวนจากกระแสเซลล์ ในขณะที่อย่างไร cytokine และ chemokine ระดับในซีรั่มตัวอย่างที่วัด โดย ELISA สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่าในขณะที่กระแส cytometric วิเคราะห์นำเสนอข้อมูลที่ชัดเจนเกี่ยวกับเปลี่ยนแปลงไทป์ของ pDCs, cytokines ที่ตรวจพบ และ chemokinecould be released by diverse cell types responding tomtDNA treatment. In humans, TLR9 expression in mononuclearblood cells and lymphoid tissues is restricted to B cells and pDCs,whereas in mice, TLR9 expression has also been demonstrated inmacrophages, myeloid DCs, and activated T cells in addition topDCs and B cells [52]. Despite this fact, the results of our in vivoexperiments correlate very well with those of cell culture assays.Both in human pDC cultures and in mice, treatment with oxidizedmtDNA resulted in much higher production of all tested mediators,except IFN-α, than stimulation with the native form. The nativeform of mtDNA proved to be a better inductor of IFN-α release.Based on these observations, it seems that effects of oxidizedmtDNA on TLR9-expressing cells are similar to those of type B CpGODNs. It has been previously shown that type B CpG ODNspredominantly activate pDCs in a manner that results in phenotypicchanges and proinflammatory cytokine production, as wellas weak induction of type I IFN responses [53]. The functionalactivity of type B CpG ODNs is attributed to their localization tolysosome-associated membrane protein 1-positive endosomes,while activation of TLR9 by type A CpG ODNs occurs in transferrinreceptor-positive endosomes [54]. Although prior X-ray crystaland NMR structures had showed that DNA with 8-oxoG lesionsappears virtually identical to the corresponding unmodifiedduplex, recent thermodynamic studies have indicated that8-oxoG has a destabilizing influence [55]. The presence of8-oxoG has a profound effect on the level and nature of DNAhydration, indicating that the environment around an 8-oxoG:C isfundamentally different than that found at G:C [55]. The instabilityof the 8-oxoG modification is attributed to changes in the hydrophilicityof the base and may influence the recognition of oxidizedmtDNA by TLR9.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลของเราจากทั้งในหลอดทดลองและในการทดลองกับสัตว์ทดลองแสดงให้เห็นว่าการแก้ไข mtDNA extracellular oxidatively มีคุณสมบัติที่มีศักยภาพมากขึ้นในการเปิดใช้งานPDCs กว่า mtDNA พื้นเมือง สอดคล้องกับข้อสังเกตของเราในการศึกษาก่อน mtDNA บริสุทธิ์และแม้แต่ ODN ที่ขาดลวดลาย CpG แต่มี 8 oxoG ตกค้างเดียวโรคข้ออักเสบเหนี่ยวนำเมื่อฉีดintraarticularly ในหนู [30]. ในทางตรงกันข้ามการ ODN ตรงกับลำดับเดียวกัน ยกเว้นว่ามันขาดฐานออกซิไดซ์ที่เป็นทั้งหมดเฉื่อยในร่างกาย[30] อีกการศึกษา CpG โมเลกุล ODN ซึ่งเป็นฐาน guanine ถูกแทนด้วย8 oxoG เทพเป็นจำนวนเงินที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ TNF-αจาก RAW264.7 เซลล์ macrophage เหมือนกว่าควบคุมคนunsubstituted [51] 8 oxoG ที่มีดีเอ็นเอที่เกิดเพิ่มขึ้นในการผลิตTNF-αยังพบว่าในระดับประถมศึกษาขนาดใหญ่ที่แยกได้จากการเพาะเลี้ยงหนูป่าชนิดแต่ไม่พบว่าในผู้ที่มาจากTLR9 หนูที่น่าพิศวง [51] นอกจากนี้การฉีดใต้ผิวหนังของ 8 oxoG ที่มี CpG ODN นำไปสู่การบวมเพิ่มขึ้นในโจรปล้นคนเดินทางเมื่อเทียบกับปกติCpG ODN [51]. ในในร่างกายการทดลองของเราคุณสมบัติฟีโนไทป์ของหมาPDCs ในเลือดถูกตรวจสอบโดยวิธีการของ ไหลภูมิคุ้มกันในขณะที่ไซโตไคน์และระดับchemokine ในซีรั่มตัวอย่างถูกวัดโดยวิธีELISA มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะทราบว่าในขณะที่การวิเคราะห์การไหลของ cytometric ให้ข้อมูลที่ชัดเจนเกี่ยวกับ PDCs 'การเปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ที่ตรวจพบและ cytokines chemokine อาจจะมีการปล่อยออกมาจากเซลล์ชนิดที่มีความหลากหลายตอบสนองต่อการรักษา mtDNA ในมนุษย์แสดงออก TLR9 ในโมโนนิวเคลียร์เซลล์เม็ดเลือดและเนื้อเยื่อน้ำเหลืองถูกจำกัด ไปยังเซลล์บีและ PDCs, ในขณะที่หนูแสดงออก TLR9 ยังได้รับการแสดงให้เห็นในขนาดใหญ่, พล myeloid และเปิดใช้งานเซลล์ทีนอกเหนือไปจากPDCs และเซลล์ B [52] . แม้จะมีความจริงข้อนี้ผลของในร่างกายของเราการทดลองมีความสัมพันธ์ที่ดีมากกับผู้ตรวจการเพาะเลี้ยงเซลล์. ทั้งในวัฒนธรรมของมนุษย์ pDC และในหนูรักษาด้วยออกซิเจนmtDNA ส่งผลในการผลิตที่สูงขึ้นมากของผู้ไกล่เกลี่ยที่ผ่านการทดสอบทั้งหมดยกเว้นIFN-αกว่า การกระตุ้นที่มีรูปแบบพื้นเมือง พื้นเมืองรูปแบบของ mtDNA พิสูจน์แล้วว่าเป็นตัวเหนี่ยวนำที่ดีขึ้นของการปล่อย IFN-α. ตามข้อสังเกตเหล่านี้ก็ดูเหมือนว่าผลกระทบของการออกซิไดซ์mtDNA ใน TLR9-แสดงเซลล์มีความคล้ายคลึงกับประเภท B CpG ODNs มันแสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ว่าประเภท B CpG ODNs ส่วนใหญ่เปิดใช้งาน PDCs ในลักษณะที่จะส่งผลในฟีโนไทป์การเปลี่ยนแปลงและการผลิตไซโตไคน์proinflammatory รวมทั้งเป็นการเหนี่ยวนำชนิดที่อ่อนแอของฉันIFN การตอบสนอง [53] ทำงานได้กิจกรรมประเภท B CpG ODNs มีสาเหตุมาจากการแปลของพวกเขาไปเมมเบรนlysosome เกี่ยวข้องโปรตีน endosomes 1 บวกในขณะที่เปิดใช้งานของTLR9 โดยประเภท CpG ODNs เกิดขึ้นใน transferrin endosomes รับบวก [54] แม้ว่าก่อนคริสตัลเอ็กซ์เรย์และโครงสร้าง NMR ได้แสดงให้เห็นว่าดีเอ็นเอที่มีรอยโรค 8 oxoG ปรากฏจริงเหมือนกับที่ยังไม่แปรสอดคล้องเพล็กซ์, การศึกษาอุณหพลศาสตร์ที่ผ่านมาได้แสดงให้เห็นว่า 8 oxoG มีอิทธิพลทำให้เกิดความวุ่นวาย [55] การปรากฏตัวของ8 oxoG มีผลอย่างยิ่งในระดับและลักษณะของดีเอ็นเอชุ่มชื้นแสดงให้เห็นว่าสภาพแวดล้อมรอบ8 oxoG: C เป็นพื้นฐานที่แตกต่างกว่าที่พบที่G: C [55] ความไม่แน่นอนของการปรับเปลี่ยน 8 oxoG มีสาเหตุมาจากการเปลี่ยนแปลงในความชอบน้ำของฐานและอาจมีผลต่อการรับรู้ของออกซิไดซ์mtDNA โดย TLR9

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลจากทั้งในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง พบว่า oxidatively แก้ไขและแสดง

มีศักยภาพมากขึ้นเพื่อเปิดใช้งาน pdcs กว่าพื้นเมืองแสดง . ในบรรทัดที่มี
ข้อสังเกตของเรา ในการศึกษาก่อน และให้แสดงแม้
odn ที่ขาด CPG ลวดลายแต่บรรจุกาก 8-oxog เดียว
เกิดข้ออักเสบเมื่อฉีดเข้าไปในหนู intraarticularly [ 30 ] .
ในความคมชัดการ odn ตรงกับลำดับเดียวกัน ยกเว้นว่า
มันขาดจากฐาน มันเฉื่อยในสิ่งมีชีวิต [ 30 ] ในอีกการศึกษา
, CPG odn โมเลกุลซึ่งในกัวนีน ฐานถูกทดแทนด้วย 8-oxog
,
) สูงกว่าปริมาณของ TNF - αจาก raw264.7 แมคโครฟาจเหมือนเซลล์มากกว่าการควบคุม
คูมารินที่ไม่มีหมู่แทนที่ที่ [ 51 ] การ 8-oxog-containing ชักนำ
ดีเอ็นเอเพิ่มเม็ดเลือดขาวในการผลิตαถูกพบในแมคโครฟาจของหนูที่แยกได้จากอาหารหลัก

แต่ไม่สังเกตจาก tlr9 น็อกหนู [ 51 ] นอกจากนี้ การฉีดใต้ผิวหนังของ 8-oxog-containing ยิ่งขึ้น

odn นำไปสู่การเพิ่ม footpad บวม เมื่อเทียบกับที่ของ [ odn
CPG ปกติ 51 ] .
ในการทดลองในหลอดทดลองคุณสมบัติคุณสมบัติของ ~
ของเราpdcs ในกระแสเลือดได้โดยการไหล
( ส่วนคีโมไคน์ไซโตไคน์ และระดับในซีรั่ม
จำนวนวัดโดยวิธีอีไลซ่า มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะทราบว่าในขณะที่การวิเคราะห์ลักษณะการไหล

ให้ข้อมูลที่ชัดเจนเกี่ยวกับ pdcs ' พบการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ , การป้องกันและเคโมไคน์
อาจจะออกโดยหลากหลายชนิดของเซลล์ที่ตอบสนอง
แสดงรักษา ในมนุษย์tlr9 การแสดงออกปกติ
เซลล์เม็ดเลือดและเนื้อเยื่อน้ำเหลืองจำกัด B เซลล์และ pdcs
, ส่วนในหนู การแสดงออก tlr9 ยังถูกแสดงในแมโครเฟจชนิด
, DCS , และกระตุ้นเซลล์ T นอกจาก
pdcs และ B เซลล์ [ 52 ] แม้ข้อเท็จจริงนี้ ผลลัพธ์ที่ได้จากการทดลองในสัตว์ทดลอง
ของเราสัมพันธ์อย่างดีกับผู้ทดสอบ
เซลล์เพาะเลี้ยงในวัฒนธรรมมนุษย์และ PDC ) , การรักษาด้วยออกซิเจนแสดงผลในการผลิตที่สูงมาก

ยกเว้นทดสอบทั้งหมดผู้ไกล่เกลี่ย , IFN - α มากกว่าการกระตุ้นด้วยรูปแบบพื้นเมือง รูปแบบพื้นเมือง
ของแสดงพิสูจน์จะดีกว่าการของ IFN - αปล่อย .
จากการสังเกตเหล่านี้ ดูเหมือนว่าผลของออกซิเจนในเซลล์ tlr9
แสดงแสดงเป็นคล้ายกับบรรดาของ CPG
odns ประเภท B .