Total RNAs were quantified and RT-P

Total RNAs were quantified and RT-PCR was
performed using 5 mg of total RNA per reaction as
described by the manufacturer (Invitrogen). Primers
specific to b-actin and the selected cytokines are
listed in Table 1. Comparing the expression pattern
of an equivalent amount of cDNA followed the
classical RT. PCR before the PCR amplification
reached the saturation. The product obtained was
within the linear range of signal amplification
following PCR for the target genes. The reaction
conditions were in the following order: first-strand
cDNA synthesis at 65 1C for 5 min, reverse-transcriptase
inactivation at 70 1C for 15 min, and PCR
with specific primers (Table 2) after which the
products were run on a 2% agarose gel containing
ethidium bromide (100 ngmL1) and subjected to
UV visualization and densitometric analysis with a
ATTO Gel Doc system (Tokyo, Japan). Densitometric
scanning of agarose gel images using UVP
gel imaging system and subsequent analysis with
UVP gel works LD advance software facilitated thequantification of the relative levels of RNA for each
gene. The expression pattern was assessed after
normalizing the data with the corresponding expression
of house keeping gene (b-actin).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มี quantified RNAs รวม และ RT-PCR ได้ใช้อาร์เอ็นเอรวมต่อปฏิกิริยาเป็น 5 มก.อธิบาย โดยผู้ผลิต (Invitrogen) ไพรเมอร์มี cytokines เฉพาะแอกติน b และที่เลือกแสดงในตารางที่ 1 เปรียบเทียบรูปแบบของนิพจน์ของจำนวน cDNA ที่เทียบเท่าตามคลาสสิ RT. PCR ก่อนขยาย PCRอิ่มแล้ว เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้รับภายในช่วงเชิงเส้นของการขยายสัญญาณวิธี PCR สำหรับยีนเป้าหมาย ปฏิกิริยาเงื่อนไขที่อยู่ในลำดับต่อไปนี้: เดอะเฟิร์สการสังเคราะห์ cDNA ที่ 1C 65 สำหรับ 5 นาที กลับ transcriptaseยกเลิกการเรียกที่ 1C 70 15 นาที และ PCRมีเฉพาะไพรเมอร์ (ตารางที่ 2) หลังจากผลิตภัณฑ์ถูกเรียกใช้บนตัว 2% agarose เจลที่ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium (100 ngmL 1) และการแสดงภาพประกอบเพลง UV และการวิ densitometric ด้วยการระบบเอกสารเจ ATTO (โตเกียว ญี่ปุ่น) Densitometricการสแกนภาพเจ agarose ใช้ UVPระบบถ่ายภาพเจและวิเคราะห์ตามมาด้วยเจ UVP LD ล่วงหน้าซอฟต์แวร์อำนวยความสะดวก thequantification ระดับสัมพัทธ์ของอาร์เอ็นเอที่ทำงานสำหรับแต่ละยีน รูปแบบนิพจน์ถูกประเมินหลังnormalizing ข้อมูลกับนิพจน์ที่เกี่ยวข้องของบ้านรักษายีน (b-แอกติน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

RNAs ทั้งหมดถูกวัดและ RT-PCR
ได้รับการดำเนินการโดยใช้5 mg
ของอาร์เอ็นเอรวมต่อปฏิกิริยาเป็นอธิบายโดยผู้ผลิต(Invitrogen) ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงเพื่อขโปรตีนและ cytokines เลือกที่ระบุไว้ในตารางที่1 การเปรียบเทียบรูปแบบการแสดงออกของจำนวนเงินเทียบเท่าของยีนตามคลาสสิกRT PCR ก่อนที่จะขยาย PCR ถึงความอิ่มตัวของสี ผลิตภัณฑ์ที่ได้ก็อยู่ในช่วงของการขยายเชิงเส้นสัญญาณต่อไปนี้PCR ยีนเป้าหมาย ปฏิกิริยาเงื่อนไขอยู่ในลำดับต่อไปนี้เป็นครั้งแรกที่กลุ่มสาระการสังเคราะห์ยีนที่65 1C เวลา 5 นาที, ย้อนกลับ transcriptase ใช้งานที่ 70 1C นาน 15 นาทีและ PCR ด้วยไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจง (ตารางที่ 2) หลังจากที่ผลิตภัณฑ์ได้รับการทำงานใน2 % agarose เจลที่มีethidium bromide (100 ngmL? 1) และอยู่ภายใต้การสร้างภาพรังสียูวีและการวิเคราะห์densitometric กับระบบเจลATTO หมอ (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) Densitometric สแกนภาพเจล agarose UVP ใช้ระบบการถ่ายภาพเจลและการวิเคราะห์ที่ตามมาด้วยเจลUVP ทำงานซอฟต์แวร์ล่วงหน้า LD thequantification อำนวยความสะดวกระดับความสัมพันธ์ของอาร์เอ็นเอของแต่ละยีน รูปแบบการแสดงออกที่ได้รับการประเมินหลังจากnormalizing ข้อมูลที่มีการแสดงออกที่สอดคล้องกันของบ้านการรักษายีน(B-โปรตีน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้งหมดนี้คือ RNAs ตรวจ
โดยใช้ 5 mg จำนวน RNA ต่อปฏิกิริยาเป็น
บรรยายโดยผู้ผลิต ( Invitrogen ) ไพรเมอร์
เฉพาะ b-actin และเลือกชนิดที่เป็น
ที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 . การเปรียบเทียบรูปแบบการแสดงออกของยีน
เทียบเท่าตาม
คลาสสิก RT . PCR ก่อนที่ PCR (
ถึงความอิ่มตัว ผลิตภัณฑ์ที่ได้คือ
ในช่วงเชิงเส้นของสัญญาณต่อไปนี้
( ซึ่งเป็นเป้าหมายที่ยีน เงื่อนไขปฏิกิริยา
อยู่ในคำสั่งต่อไปนี้ : แรกในการสังเคราะห์ cDNA เส้น
65 c 5 นาที , reverse transcriptase
การยับยั้งที่ 70 ใน 15 นาที และ PCR
กับไพรเมอร์จำเพาะ ( ตารางที่ 2 ) หลังจากนั้น
ผลิตภัณฑ์ถูกวิ่งบน 2 % เจลที่มี
คู่ ( 100 ngml  โบรไมด์ 1 ) และภายใต้
ยูวีการแสดงและการวิเคราะห์ densitometric กับ
อัตโตเจลหมอระบบ ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) densitometric
สแกนภาพเจล ( เจลโดยใช้ระบบภาพและ uvp การวิเคราะห์ที่ตามมาด้วย

uvp เจลทำงาน LD ล่วงหน้าซอฟต์แวร์ความสะดวก thequantification ของระดับสัมพัทธ์ของ RNA แต่ละ
ยีน การแสดงออกแบบประเมินหลัง normalizing ข้อมูลด้วย

การแสดงออกที่สอดคล้องกันหลังการรักษายีน ( b-actin )