MATERIALS AND METHODSAnimals and ex

MATERIALS AND METHODS
Animals and experimental design
A total of ninety six rabbits (5-weeks old, male sex, HyPlus breed) were divided into 3 experimental
(EG1, EG2, EG3) groups and one control group (CG). Rabbits were kept in standard cages, two
animals per cage. The rabbits in the experimental groups as well as control group were fed with a
complete granulated mixture (ANPRO.FEED,VKZ Bučany, Slovakia, Table 1). In the EG1 the
animals received plant extract of Salvia officinalis (contained 24% of thujone, 18% of borneol, 15% of
cineole; Calendula company, Nová Ľubovňa, Slovak Republic, dose 10 µl for animal/day into the
known value of drinking water) for 21 days. Rabbits in EG2 received every day orally in drinking
water partially purified enterocin CCM4231 (dose 50 µl/animal/day; prepared according to Lauková et
al., 1997) for 21 days. Sage plant extract (10 µl for animal/day) and enterocin CCM4231 (50
µl/animal/day) were administered in EG3 into drinking water for 21 days. The experiment lasted for
42 days. All care and experimental procedures involving animals followed the guidelines stated in the
Guide for the Care and Use of Laboratory Animals which was accepted by Slovak Governmental
Veterinary Office.
Samples of faeces were taken at the beginning of the experiment, at day 7 (1 week of natural
substances administration, NSA), 21 (3 weeks of NSA administration), 28 (1 week after cessation of
NSA application) and 42 (3 weeks after cessation of NSA) to monitor the effect of enterocin
CCM4231 and sage separately and together on the rabbit microflora. The samples were treated by a
standard microbiological method using appropriate dilutions in Ringer solution (pH 7.0; Oxoid Ltd.,
Basingstoke, Hampshire, England). The appropriate dilutions were plated onto Baird-Parker agar
supplemented with egg yolk tellurite solution (Becton & Dickinson, Cockeysville, USA), Mannitol
Salt Agar (Difco Laboratories, Detroit, USA) and Clostridium difficile agar with selective supplement
(SR0096E) and 7% (v/v) defibrinated horse blood (SR0050, Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire,
England) were used to enumerate coagulase-positive staphylococci (CPS, including Staphylococcus
aureus), coagulase-negative staphylococci (CNS) and Clostridium-like sp. MacConkey agar and
Cetrimide agar (Becton & Dickinson) were used to count E. coli and Pseudomonas sp. The plates
were incubated at 30°C and/or 37°C for 24-48 h depending on the bacterial species and were Nutrition and Digestive Physiology
817
expressed as log10 of colony forming units (CFU) per gram. Three animals in each group were
slaughtered at days 21, 42 and caecal contents were collected to count bacteria. They were serially
diluted in Ringer solution and plated on the media mentioned above.
Biochemical and immunological parameters were examined at the start of the experiment, at days 21,
42: serum levels of total proteins and lipids (g/l), cholesterol (mmol/l), glucose (mmol/l), calcium
(mmol/l), glutathione peroxidase (U/ml) using commercial kit Randox (England). The phagocytic
activity (PA) was monitored and expressed as percentage of the number of bacteria ingested per
phagocyte during a limited period of incubation of particules suspension and phagocytes in serum
(Hrubiško et al., 1981).
The zootechnical parameters (feed consumption, weight gain, feed conversion, mortality) were
evaluated daily.
Eimeria sp. oocysts were enumerated in the faecal samples microscopically at days 1, 7, 21 and 42 of
the experiment and expressed in counts of oocysts per 1 g of faeces (OPG). The samples were stored
at 4°C and then evaluated by the quantitative flotation technique - McMaster method (Ministry of
Agriculture, Fischeries and Food, UK, 1986)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
สัตว์และการออกแบบการทดลอง
รวมของไนน์ตี้ซิกกระต่าย (5-สัปดาห์เพศชายพันธุ์ HyPlus) ถูกแบ่งออกเป็น 3 การทดลอง
(EG1, EG2, Eg3) กลุ่มและกลุ่มควบคุม (CG) กระต่ายที่ถูกเก็บไว้ในกรงมาตรฐานสอง
ตัวต่อกรง กระต่ายในกลุ่มทดลองเช่นเดียวกับกลุ่มควบคุมได้รับการเลี้ยงดูที่มี
ส่วนผสมทรายฉบับสมบูรณ์ (ANPRO.FEED, Vkz Bučany, สโลวาเกีย, ตารางที่ 1) ใน EG1
สัตว์ที่ได้รับสารสกัดจากพืชของใบเสจ (ที่มีอยู่ 24% ของ thujone, 18% ของพิมเสน, 15% ของ
cineole; Calendula บริษัท โนวาĽubovňaสาธารณรัฐสโลวัก, ปริมาณ 10 ไมโครลิตรสัตว์ / วันเป็น
มูลค่าที่รู้จักกันจากการดื่ม น้ำ) 21 วัน กระต่ายใน EG2 ได้รับทุกวันปากเปล่าในน้ำดื่ม
น้ำบริสุทธิ์บางส่วน enterocin CCM4231 (ปริมาณ 50 ไมโครลิตร / สัตว์ / วันจัดทำขึ้นตามLaukováและ
อัล, 1997.) เป็นเวลา 21 วัน สารสกัดจากพืช Sage (10 ไมโครลิตรสัตว์ / วัน) และ enterocin CCM4231 (50
ไมโครลิตร / สัตว์ / วัน) ได้รับยาใน Eg3 ลงไปในน้ำดื่ม 21 วัน การทดลองที่กินเวลานานถึง
42 วัน การดูแลทั้งหมดและขั้นตอนการทดลองที่เกี่ยวข้องกับสัตว์ตามแนวทางที่ระบุไว้ใน
คู่มือสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองที่ได้รับการยอมรับจากสโลวักราชการ
สำนักงานสัตวแพทย์.
ตัวอย่างอุจจาระถูกนำมาที่จุดเริ่มต้นของการทดลอง, ในวันที่ 7 (1 สัปดาห์ของ ธรรมชาติ
การบริหารสารเอ็นเอสเอ), 21 (3 สัปดาห์ที่ผ่านมาของการบริหารเอ็นเอสเอ), 28 (1 สัปดาห์หลังจากการหยุดชะงักของ
การประยุกต์ใช้ NSA) และ 42 (3 สัปดาห์หลังจากการหยุดชะงักของเอ็นเอสเอ) เพื่อตรวจสอบผลกระทบของ enterocin
CCM4231 และปัญญาชนแยกจากกันและร่วมกันใน จุลินทรีย์กระต่าย กลุ่มตัวอย่างได้รับการรักษาโดย
วิธีทางจุลชีววิทยาโดยใช้มาตรฐานเจือจางที่เหมาะสมในการแก้ปัญหา Ringer (pH 7.0; Oxoid จำกัด
เบซิงนิวแฮมป์เชียร์อังกฤษ) เจือจางที่เหมาะสมถูกชุบลงบนวุ้นบาร์ดปาร์คเกอร์
เสริมด้วยไข่แดงแก้ปัญหา tellurite (Becton & ดิกคินสัน, Cockeysville, ประเทศสหรัฐอเมริกา), Mannitol
เกลือวุ้น (Difco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์สหรัฐอเมริกา) และ Clostridium difficile วุ้นกับอาหารเสริมเลือก
(SR0096E) และ 7% (v / v) ในเลือดม้า defibrinated (SR0050, Oxoid จำกัด เบซิงนิวแฮมป์เชียร์
อังกฤษ) ถูกนำมาใช้ในการระบุเชื้อ coagulase บวก (CPS รวมทั้งเชื้อ Staphylococcus
aureus), เชื้อ coagulase ลบ (CNS) และ Clostridium เหมือน SP วุ้น MacConkey และ
Cetrimide วุ้น (Becton & ดิกคินสัน) ถูกนำมาใช้ในการนับเชื้อ E. coli และ Pseudomonas SP แผ่น
บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสและ / หรือ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24-48 ชั่วโมงขึ้นอยู่กับชนิดของเชื้อแบคทีเรียและมีโภชนาการและการย่อยอาหารสรีรวิทยา
817
แสดงเป็น log10 ของอาณานิคมอดีตหน่วย (CFU) ต่อกรัม สามสัตว์ในแต่ละกลุ่มถูก
ฆ่าวันที่ 21 42 และเนื้อหาลำไส้ถูกเก็บรวบรวมเพื่อนับจำนวนแบคทีเรีย พวกเขาถูกลำดับ
เจือจางในสารละลาย Ringer และชุบในสื่อดังกล่าวข้างต้น.
พารามิเตอร์ทางชีวเคมีและภูมิคุ้มกันมีการตรวจสอบในช่วงเริ่มต้นของการทดลองในวันที่ 21,
42: ระดับซีรั่มของโปรตีนทั้งหมดและไขมัน (g / l) คอเลสเตอรอล (mmol / ลิตร) น้ำตาล (มิลลิโมล / ลิตร) แคลเซียม
(มิลลิโมล / ลิตร), กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเด (U / ml) โดยใช้ชุดการค้า Randox (อังกฤษ) phagocytic
กิจกรรม (PA) ได้รับการตรวจสอบและแสดงเป็นร้อยละของจำนวนแบคทีเรียกินต่อ
phagocyte ในช่วงระยะเวลาที่ จำกัด ของการบ่มการระงับ particules และ phagocytes ในซีรั่ม
(Hrubiško et al., 1981).
พารามิเตอร์ zootechnical (ปริมาณอาหารที่กินน้ำหนัก กำไรจากการแปลงฟีตาย) ได้รับการ
ประเมินในชีวิตประจำวัน.
Eimeria SP oocysts ถูกระบุในตัวอย่างอุจจาระกล้องจุลทรรศน์วัน 1, 7, 21 และ 42 ของการ
ทดลองและการแสดงออกในข้อหา oocysts ต่อ 1 กรัมของอุจจาระ (OPG) ตัวอย่างถูกเก็บไว้
ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและประเมินผลแล้วโดยเทคนิคเชิงปริมาณลอย - วิธี McMaster (กระทรวง
เกษตรและอาหาร Fischeries, อังกฤษ, 1986)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สัตว์และวัสดุและวิธีการทดลอง
ทั้งหมดเก้าสิบหกกระต่าย ( 5-weeks เพศชาย อายุ เพศ พันธุ์ hyplus ) แบ่งออกเป็น 3 การทดลอง
( eg2 ตัวอย่างสินค้า , กลุ่ม , eg3 ) และกลุ่มควบคุม ( CG ) กระต่ายที่ถูกขังไว้ในกรงมาตรฐานสอง
สัตว์ต่อสัตว์ กระต่ายในกลุ่ม รวมทั้งกลุ่มควบคุมได้รับอาหารที่มีส่วนผสมของทราย
สมบูรณ์ ( anpro ฟีด , vkz บูčใด ๆสโลวาเกีย , ตารางที่ 1 ) ในตัวอย่างสินค้า
สัตว์ได้รับสารสกัดจากพืชของ Salvia officinalis ( ที่มีอยู่ 24% ของทูโจน , 18% ของพิมเสน 15 %
cineole ; บริษัท ดาวเรือง พ.ย. . kgm Ľ ubov ň , สโลวัก ขนาด 10 ลิตร สำหรับµสัตว์ / วันใน
รู้จักคุณค่าของน้ำ ) สำหรับ 21 วัน กระต่ายใน eg2 ได้รับทุกวันโดยการดื่มน้ำบริสุทธิ์บางส่วน enterocin
ccm4231 ( ขนาด 50 µ L / สัตว์ / dayเตรียมไว้ตาม laukov
. kgm et al . , 1997 ) สำหรับ 21 วัน สารสกัดจากพืชเครื่องเทศ ( 10 µ L สำหรับสัตว์ / วัน ) และ enterocin ccm4231 ( 50
µ L / สัตว์ / วัน ) ศึกษาใน eg3 เข้าไปดื่มน้ำเป็นเวลา 21 วัน การทดลองใช้เวลา
42 วัน ทั้งหมดการดูแลและวิธีการทดลองที่เกี่ยวข้องกับสัตว์ตามแนวทางที่ระบุไว้ใน
ข้อแนะนำสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง ซึ่งได้รับการยอมรับจากสำนักงานสัตวแพทย์ของรัฐ
สโลวัก .
ตัวอย่างอุจจาระถ่ายที่จุดเริ่มต้นของการทดลอง ใน 7 วัน ( 1 สัปดาห์ของธรรมชาติ
สาร ( NSA ) , 21 ( สัปดาห์ที่ 3 ของ NSA การบริหาร ) , 28 ( 1 สัปดาห์หลังจากการ
และ NSA การ ) 42 ( 3 สัปดาห์หลังจากการ NSA ) เพื่อตรวจสอบผลของ enterocin
ccm4231 และปัญญาชนแยกและร่วมกันบนกระต่ายไมโคร . ตัวอย่างที่ได้รับการรักษาโดย
มาตรฐานทางจุลชีววิทยาโดยใช้วิธีการที่เหมาะสมใน Ringer solution ( pH 7.0 ; oxoid จำกัด
Basingstoke Hampshire , อังกฤษ ) การเจือจางที่เหมาะสมมีชุบลงบนอาหารวุ้น แบร์ด ปาร์คเกอร์
ไข่แดง tellurite โซลูชั่น ( เบคตอน&ดิกคินสัน Cockeysville , สหรัฐอเมริกา , 5
)วุ้นเกลือ ( difco ห้องปฏิบัติการ , ดีทรอยต์ , สหรัฐอเมริกา ) และ Clostridium difficile วุ้นกับ
เสริมเลือก ( sr0096e ) และ 7 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) หัวใจโตจากการอุดตัน ( sr0050 oxoid ม้า , Ltd , Basingstoke , Hampshire ,
อังกฤษ ) ถูกใช้เพื่อระบุลูกเมียและบวก ( ซีพีเอส ได้แก่ Staphylococcus aureus ,
) ลูกเมียและลบ ( คมช. ) และ Clostridium sp Lynx และ
เช่นซิตริไมด์ ( เบคตอน& Dickinson ) ใช้ E . coli Pseudomonas sp . และนับจาน
อุณหภูมิ 30 องศา C และ / หรือ 37 ° C เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมง ขึ้นอยู่กับชนิดของแบคทีเรียย่อยอาหารและโภชนาการและด้านสรีรวิทยา

แสดงเป็น LN เป็นหน่วยอาณานิคม ( CFU ) ต่อ 1 กรัม สามสัตว์ในแต่ละกลุ่มถูกสังหารในวัน
21 , 42 และ caecal เนื้อหาครั้งนี้นับเชื้อแบคทีเรียพวกเขาเป็น
เจือจางใน Ringer solution และชุบบนสื่อที่กล่าวถึงข้างต้น และทำการตรวจรักษา
ทางชีวเคมีที่เริ่มต้นของการทดลอง ในวัน 21
42 : ระดับซีรั่มโปรตีนรวมและไขมัน ( กรัม / ลิตร ) , คอเลสเตอรอล ( มิลลิโมล / ลิตร ) และกลูโคส ( mmol / L ) แคลเซียม
( mmol / L ) , glutathione peroxidase ( U / ml ) ใช้ชุดพาณิชย์ randox ( อังกฤษ ) มีสิ่งแปลกปลอม
กิจกรรม ( PA ) คือการตรวจสอบและแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของจำนวนแบคทีเรียกินต่อ
ฟาโกซัยต์ในช่วงระยะเวลาที่ จำกัด ของการบ่มของ particules ระงับและฟาโกไซต์ในเซรั่ม
( hrubi šเกาะ et al . , 1981 ) .
พารามิเตอร์ zootechnical ( การบริโภค , เพิ่มน้ำหนัก , การแปลง , การตายของฟีดฟีด )
ประเมินทุกวัน .
ไอเมอเรีย .oocysts ถูกระบุในตัวอย่างผลในวันที่ 1 , 7 , 21 , 42 ของ
การทดลองและแสดงออกในข้อหา oocysts ต่อ 1 กรัมของอุจจาระ ( OPG ) ตัวอย่างที่ 4 ° C และเก็บไว้
แล้วประเมินโดยเทคนิคเชิงปริมาณ - ลอย McMaster ( กระทรวงเกษตรและ fischeries
, อาหาร , อังกฤษ , 1986 )