MATERIALS AND METHODSReagentsTetrab

MATERIALS AND METHODS
Reagents
Tetrabutylammonium hydrogen sulfate (BAHS) and KH 2PO4 were
obtained from Fisher Scientific. Tetrabutylammonium hydroxide (TBAOH;
40% in water) was obtained from Fluka. Standards of IHP, ATP, ADP, and
AMP, were obtained from Sigma Chemical Company.
Mobile Phase
Preliminary experiments were conducted using different mixtures of the
solvents and ion-pairing reagents described by Patthy et al. F1 to determine the
optimal mixture for nucleotide separation. It was determined that the optimal
mobile phase composition for separation of all three nucleotides consisted of
15 mM TBAHS, 15 mM KH2PO4, and 7% acetonitrile. The mobile phase was
adjusted to pH 5.5 with concentrated H2504, filtered (0.45 imn) and degassed.
The mobile phase used for separation of IHP consisted of 0.05 M formic
acid:methanol (49:51 v/v) and 1.5 mL TBAOH/100 mL. E61 The pH was
adjusted to 4.3 with H2504, filtered (0.45 imn) and degassed.
HPLC Procedure
A reverse phase C-18 column (Waters Nova-Pak C18 3.9 x 75 mm) 4 μm
particle size was equilibrated with the mobile phase overnight. Analyses were
conducted with a Waters HPLC system, and either a refractive index detector
(Waters 410) for the 1HP or a photo diode array (PDA) detector (Waters 991)
for the nucleotides. Separation of ADP and AMP was optimal with a
1 mL min-1 flow rate, 10 1.11 injection volume, and detection at 260 nm
(Fig. 1). Separation of ATP was optimal at a flow rate of 2.5 mL min -1 , 10 ILL
injection volume and detection at 260 nm (Fig. 2). Separation of IHP was
optimal at a flow rate of 3 mL min -1 with a 30 μL injection volume (Fig. 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการReagentsTetrabutylammonium ไฮโดรเจนซัลเฟต (BAHS) และ KH 2PO4ได้รับจากวิทยาศาสตร์ Fisher Tetrabutylammonium ไฮดรอกไซด์ (TBAOH40% ในน้ำ) ได้รับจาก Fluka มาตรฐาน IHP, ATP, ADP และAMP ได้รับจาก บริษัทเคมีซิกระยะเคลื่อนการทดลองเบื้องต้นได้ดำเนินการโดยใช้ส่วนผสมแตกต่างกันของการหรือสารทำละลายและ reagents จับคู่ไอออนโดย F1 Patthy et al. เพื่อตรวจสอบการส่วนผสมที่เหมาะสมสำหรับการแยกนิวคลีโอไทด์ ได้กำหนดที่ดีที่สุดองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่สำหรับแยกของนิวคลีโอไทด์สามทั้งหมดประกอบด้วย15 มม. TBAHS, KH2PO4 15 มม. และ 7% acetonitrile เฟสเคลื่อนปรับค่า pH 5.5 มีเข้มข้น H2504 กรอง (0.45 imn) และ degassedระยะเคลื่อนที่ใช้สำหรับแบ่งแยก IHP ประกอบด้วย 0.05 M formicกรด: เมทานอล (49:51 v/v) และ 1.5 mL TBAOH/100 mL E61 มี pHปรับปรุง 4.3 กับ H2504 กรอง (0.45 imn) และ degassedวิธี HPLCคอลัมน์ย้อนขั้นตอน C-18 (3.9 C18 โนวาปากน้ำ x 75 mm) 4 μmขนาดอนุภาคถูก equilibrated กับเฟสเคลื่อนที่ค้างคืน วิเคราะห์ได้ดำเนินการกับระบบ HPLC น้ำ การตรวจจับการดรรชนี(น้ำ 410) 1HP ที่หรือเป็นภาพไดโอดอาร์เรย์ (PDA) จับ (น้ำ 991)ในนิวคลีโอไทด์ แยกของ ADP และ AMP เหมาะสมกับการอัตราการไหลต่ำสุด 1 1 mL ปริมาณฉีด 10 1.11 และตรวจสอบที่ 260 nm(Fig. 1) แยกของ ATP ได้สูงสุดที่อัตราการไหลของขั้นต่ำ 2.5 mL -1, 10 ป่วยปริมาณการฉีดและการตรวจหารายการที่ 260 nm (Fig. 2) มีการแบ่งแยก IHPสูงสุดที่อัตราการไหล -1 นาที 3 mL ด้วย 30 μL ฉีด (Fig. 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธี
การวิเคราะห์สาร
Tetrabutylammonium ซัลเฟตไฮโดรเจน (BAHS) และ KH 2PO4 ถูก
ที่ได้รับจาก Fisher Scientific ไฮดรอกไซ Tetrabutylammonium (TBAOH;
40% ในน้ำ) ที่ได้รับจาก Fluka มาตรฐานการ IHP เอทีพี, ADP และ
แอมป์ที่ได้รับจาก บริษัท Sigma เคมี.
มือถือขั้นตอน
การทดลองเบื้องต้นได้รับการดำเนินการโดยใช้ผสมที่แตกต่างกันของ
ตัวทำละลายและสารเคมีไอออนจับคู่อธิบายโดย Patthy และคณะ F1 เพื่อตรวจสอบ
ส่วนผสมที่ดีที่สุดสำหรับการแยกเบื่อหน่าย มันได้รับการพิจารณาแล้วว่าดีที่สุด
องค์ประกอบเฟสเคลื่อนที่สำหรับการแยกของทั้งสามประกอบด้วยนิวคลีโอ
15 มิลลิ TBAHS, 15 มิลลิ KH2PO4 และ 7% acetonitrile เฟสเคลื่อนที่ถูก
. ปรับให้ค่า pH 5.5 ที่มีความเข้มข้น H2504 กรอง (0.45 IMN) และ degassed
เฟสเคลื่อนที่ที่ใช้สำหรับการแยก IHP ประกอบด้วย 0.05 M ฟอร์มิ
กรด: เมทานอล (49:51 v / v) และ 1.5 มิลลิลิตร TBAOH / 100 มิลลิลิตร E61 พีเอชได้รับการ
ปรับเปลี่ยนให้กับ 4.3 H2504 กรอง (0.45 IMN) และ degassed.
HPLC ขั้นตอนการ
กลับเฟสเสา C-18 (น้ำ Nova-ปาก C18 3.9 x 75 มม) 4 ไมครอน
ขนาดอนุภาคถูก equilibrated กับเฟสเคลื่อนที่ในชั่วข้ามคืน การวิเคราะห์ได้
ดำเนินการกับระบบน้ำ HPLC และทั้งตรวจจับดัชนีหักเห
(น้ำ 410) สำหรับ 1HP หรืออาร์เรย์ไดโอดภาพ (PDA) เครื่องตรวจจับ (น้ำ 991)
สำหรับนิวคลีโอ แยก ADP และแอมป์เป็นที่เหมาะสมกับ
1 มิลลิลิตรนาทีอัตราการไหล 1, 10 1.11 ปริมาณการฉีดและการตรวจสอบที่ 260 นาโนเมตร
(รูปที่ 1). แยกเอทีพีเป็นที่ดีที่สุดที่อัตราการไหล 2.5 มิลลิลิตรนาที -1, 10 ILL
ปริมาณการฉีดและการตรวจสอบที่ 260 นาโนเมตร (รูปที่ 2). แยก IHP เป็น
ที่ดีที่สุดที่อัตราการไหลของ 3 มิลลิลิตรนาที -1 มีปริมาณการฉีดไมโครลิตร 30 (รูปที่. 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ

โมลาร์สารเคมีไฮโดรเจนซัลเฟต ( bahs ) และ KH 2po4 ถูก
ได้รับจากชาวประมงทางวิทยาศาสตร์ โมลาร์โซเดียมไฮดรอกไซด์ ( tbaoh ;
40% ในน้ำ ) ได้จาก fluka . มาตรฐานของ IHP ATP ADP และ
, , , แอมป์ , ที่ได้รับจาก บริษัท ซิกม่า เคมี

มือถือระยะเบื้องต้น การทดลองใช้ส่วนผสมที่แตกต่างกันของ
สารละลายและไอออนคู่สามารถอธิบายโดย patthy et al . F1 เพื่อหาส่วนผสมที่เหมาะสมสำหรับการแยกยีน
. มันเป็นตัดสินใจที่เหมาะสมสำหรับการแยกองค์ประกอบ
เฟสเคลื่อนที่ทั้งหมด 3 คู่ ประกอบด้วย kh2po4
15 tbahs มม. 15 มม. และ 7% ไน . ระยะเคลื่อนที่
ค่า pH 5.5 กับความเข้มข้น h2504 , กรอง ( 0.45 Immersion ) และ degassed .
ขั้นตอนการใช้โทรศัพท์มือถือสำหรับการแยกของ IHP คือ 0.05 M มิค
กรด : เมทานอล ( 49:51 v / v ) และ 1.5 กรัม / 100 มิลลิลิตร tbaoh E61 pH คือ
ปรับ 4.3 กับ h2504 , กรอง ( 0.45 Immersion ) และ degassed .

ย้อนกลับขั้นตอนขั้นตอน HPLC คอลัมน์ ( น้ำ - ปาก c18 3.9 โนวา x 75 มิลลิเมตร ) 4 μ M
ขนาดอนุภาค equilibrated กับเฟสเคลื่อนที่อย่างรวดเร็ว วิเคราะห์ข้อมูล ด้วยระบบ HPLC
) น้ำและ ทั้ง
ตรวจจับดัชนีหักเห ( น้ำ 410 ) เพื่อ 1HP หรือโฟโตไดโอดเรย์ ( PDA ) เครื่องตรวจจับ ( น้ำ 991 )
สำหรับเรา . การแยกของ ADP และแอมป์ก็เหมาะสมกับ
1 มิลลิลิตร อัตราการไหลของ min-1 10 1.11 การฉีดปริมาณ และการตรวจจับที่ 260 nm
( รูปที่ 1 ) การแยกของเอทีพีได้สูงสุดที่อัตราการ ไหลของ 2.5 มิลลิลิตรต่อนาที - 1 , 10 ป่วย
ฉีดปริมาณและการตรวจสอบที่ 260 nm ( รูปที่ 2 )การแยกของ IHP คือ
ที่ดีที่สุดที่อัตราการไหล 3 มิลลิลิตรต่อนาที - 1 กับการฉีดปริมาณ 30 μ L
( รูปที่ 3 )