. The ligated product was transform

. The ligated product was transformed into E. coli BL21 (DE3) pLysS and the positive clones obtained by selection
medium were
further confirmed by PCR and restriction analysis. Transformants were cultured 12 h in LB medium with ampicillin (50 lg/ml) at
37 C. It was subcultured into fresh LB/ampicillin medium, grown several hours at 37 C to an OD590 = 0.4 and then induced using IPTG. Before harvesting, the cells were incubated for 6 h at 37 C. To analyze the induced protein, an equivalent of 1.0 ml of cells was resuspended in 0.1 ml of cracking buffer and heated at
100 C for 5 min immediately prior to loading a 20 ll aliquot of
sample onto an SDS-polyacrylamide gel (Laemmli, 1970) using
10% running and 4% stacking gel. The molecular mass of proteins was determined using higher range protein molecular weight mar- ker (myosin rabbit muscle 205 kDa, phosphorylase b 97.4 kDa, bovine serum albumin 66 kDa, ovalbumin 43 kDa and carbonic anhydrase 29 kDa) obtained from GeNeiTM, Bangalore, India.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. ผลิตภัณฑ์ ligated ก็กลายเป็นเชื้อ E. coli BL21 (DE3) pLysS และโคลนบวกได้โดยการเลือก
สื่อที่ได้รับการ
ยืนยันต่อไปโดยวิธี PCR และการวิเคราะห์ข้อ จำกัด Transformants เลี้ยง 12 ชั่วโมงในสื่อ LB กับจิบูตี (50 LG / ml) ที่
37 องศาเซลเซียสมันถูกเลี้ยงเข้ากลางปอนด์ / ampicillin สดที่ปลูกเป็นเวลาหลายชั่วโมงที่ 37 C ไปยัง OD590 = 0.4 แล้วเหนี่ยวนำให้เกิดการใช้ IPTG ก่อนที่จะเก็บเกี่ยวเซลล์ที่ถูกบ่มเป็นเวลา 6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในการวิเคราะห์โปรตีนเทพเทียบเท่า 1.0 มล. ของเซลล์ถูก resuspended ใน 0.1 มิลลิลิตรแตกกันชนและให้ความร้อนที่
100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีทันทีก่อนที่จะโหลด 20 LL หารของ
กลุ่มตัวอย่างที่เข้าสู่ระบบ SDS-polyacrylamide เจล (Laemmli 1970) โดย
10% ทำงานและเจลซ้อน 4% มวลโมเลกุลของโปรตีนที่ถูกกำหนดใช้ช่วงโปรตีนสูงน้ำหนักโมเลกุล มี.ค. เคอร์ (กล้ามเนื้อกระต่าย myosin 205 กิโลดาลตันโฟ B 97.4 กิโลดาลตัน, อัลบูมิวัวซีรั่ม 66 กิโลดาลตัน ovalbumin 43 กิโลดาลตันและ anhydrase คาร์บอ 29 กิโลดาลตัน) ที่ได้รับจาก GeNeiTM บังกาลอร์ประเทศอินเดีย .

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

. โดยผูกผลิตภัณฑ์เปลี่ยนเป็น E . coli BL21 ( DE3 ) plyss และโคลนได้โดยการเลือกบวกกลาง คือยืนยันเพิ่มเติมโดยวิธี PCR และการวิเคราะห์ข้อจำกัด พลาสมิดโดยเลี้ยง 12 H ในปอนด์ขนาดกลางด้วยแอมพิซิลลิน ( 50 LG / ml )37 . มัน subcultured เข้าไปกลางปอนด์ / ดอกดั้วสดที่ปลูกอยู่หลายชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 เป็น od590 = 0.4 และการใช้เอนไซม์ . ก่อนการเก็บเกี่ยว เซลล์ก็บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง เพื่อวิเคราะห์และโปรตีนเทียบเท่า 1.0 มิลลิลิตรในเซลล์ถูก resuspended 0.1 มิลลิลิตรและให้ความร้อนที่แตก กันชน100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีทันทีก่อนที่โหลด 20 จะการเทศนาของตัวอย่างลงบน SDS polyacrylamide gel ( laemmli , 1970 ) โดยใช้10 % และ 4 % วิ่งซ้อนเจล มวล โมเลกุลของโปรตีนใช้วิเคราะห์โปรตีนน้ำหนักโมเลกุลสูงกว่าช่วงมี.ค. - เคอร์ ( myosin กระต่ายกล้ามเนื้อ 205 ดาลตันฟอ ฟรีเลส B 97.4 kDa อัลบูมิน 66 kDa โอวัลบูมิน 43 กิโลดาลตันและฉะนี้แล 29 กิโลดาลตัน ) ที่ได้จาก geneitm , Bangalore , อินเดีย