Embryos were monitored during devel

Embryos were monitored during development for the following stages (with dpf at which sampling occurred at each temperature indicated in parentheses): end of gastrulation (~15% development, 2 °C = 23dpf, 5 °C = 14dpf, 8 °C = 8dpf), eyed stage (~30% development,2 °C = 39dpf, 5 °C = 25dpf, 8 °C = 18dpf), constant fin flutter (~60% development,2 °C = 88dpf, 5 °C = 56dpf, 8 °C = 37dpf) and hatching(prior to exogenous feeding, 3.3 °C = 130dpf, 5 °C = 95dpf, 8 °C = 82dpf). These stages were chosen as they align with our previous studies
examining physiological function of the embryos (Eme et al., 2015;Mueller et al., 2015). A small subset of eggs were removed from a bell jar, placed on ice and staged according to Price (1934a, 1934b, 1935)and Sreetharan et al. (2015) under a Zeiss AXIO Zoom V16 microscope(Carl Zeiss AG; Oberkochen, Germany). When embryos had reached the target stages, approximately 1000 eggs or 500 hatchlings were selected from four bell jars and transferred to ten 15 ml tubes (each tube contained embryos from a single bell jar) and snap frozen in liquid nitrogen. The frozen samples were then stored at −80 °C until lipid extraction. Due to a malfunctioning incubator, when 2 °C embryos reached constant fin flutter, incubation temperature was changed to 3.9 ± 0.3 °C until hatching. This resulted in an average incubation temperature throughout development of 3.3 ± 0.2 °C, and thus we refer to hatchlings from this group as being incubated at 3.3 °C throughout the manuscript.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โคลนถูกตรวจสอบในระหว่างการพัฒนาสำหรับขั้นตอนต่อไปนี้ (มี dpf ที่สุ่มตัวอย่างซึ่งเกิดขึ้นในแต่ละ อุณหภูมิที่ระบุไว้ในวงเล็บ): สิ้น gastrulation (พัฒนา ~ 15%, 2 ° C = 23dpf, 5 ° C = 14dpf, 8 ° C = 8dpf), ตาเวที (พัฒนา ~ 30%, 2 ° C = 39dpf, 5 ° C = 25dpf, 8 ° C = 18dpf), กระพือครีบอย่างต่อเนื่อง (พัฒนา ~ 60%, 2 ° C = 88dpf, 5 ° C = 56dpf, 8 ° C = 37dpf) และฟักไข่ก่อนให้อาหารจากภายนอก , 3.3 ° C = 130dpf, 5 ° C = 95dpf, 8 ° C = 82dpf) เลือกในขั้นสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้านี้ของเราตรวจสอบฟังก์ชันทางสรีรวิทยาของตัวอ่อน (Eme et al. 2015 มึลเลอร์ et al. 2015) ชุดย่อยขนาดเล็กของไข่ถูกลบออกจากโหลระฆัง วางบนน้ำแข็ง และฉากตามราคา (1934a, 1934b, 1935) และ Sreetharan et al. (2015) ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ Zeiss AXIO ซูม V16 (Carl Zeiss AG Oberkochen เยอรมนี) เมื่อตัวอ่อนได้ถึงขั้นเป้าหมาย ประมาณ 1000 ไข่หรือลูกงูแรกเกิด 500 ถูกเลือกจากขวดระฆังสี่ แล้วโอนไปสิบ 15 ml หลอด (แต่ละหลอดอยู่ตัวอ่อนจากโหลเดียวระฆัง) และแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวสแนป แล้วตัวอย่างแช่แข็งถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C จนถึงการดูดไขมัน เนื่องจากตู้อบที่ชำรุด เมื่อตัวอ่อน 2 ° C ถึงกระพือครีบคง อุณหภูมิบ่มเปลี่ยนเป็น 3.9 ± 0.3 ° C ไข่ ในอุณหภูมิบ่มเฉลี่ยตลอดการพัฒนา 3.3 ± 0.2 ° C และดังนั้น เราเรียกลูกงูแรกเกิดจากกลุ่มนี้เป็นการรับการกก 3.3 ° c ตลอดต้นฉบับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอ่อนที่ได้รับการตรวจสอบในระหว่างการพัฒนาขั้นตอนดังต่อไปนี้ (กับ DPF ที่สุ่มตัวอย่างที่เกิดขึ้นในแต่ละอุณหภูมิที่ระบุไว้ในวงเล็บ): ปลาย gastrulation (~ พัฒนา 15%, 2 ° C = 23dpf 5 ° C = 14dpf, 8 ° C = 8dpf ) เวทีตา (~ พัฒนา 30%, 2 ° C = 39dpf 5 ° C = 25dpf, 8 ° C = 18dpf) คงกระพือครีบ (~ พัฒนา 60%, 2 ° C = 88dpf 5 ° C = 56dpf, 8 ° C = 37dpf) และฟัก (ก่อนที่จะให้อาหารภายนอก 3.3 ° C = 130dpf 5 ° C = 95dpf, 8 ° C = 82dpf) ขั้นตอนเหล่านี้ได้รับการแต่งตั้งตามที่พวกเขาสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้าของเรา
ตรวจสอบการทำงานทางสรีรวิทยาของตัวอ่อน (Eme et al, 2015;.. มูลเลอร์, et al, 2015) กลุ่มย่อยขนาดเล็กของไข่ที่ถูกถอดออกจากขวดระฆังวางอยู่บนน้ำแข็งและฉากตามราคา (1934a, 1934b, 1935) และ Sreetharan et al, (2015) ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ Zeiss V16 AXIO ซูม (Carl Zeiss AG; Oberkochen เยอรมนี) เมื่อตัวอ่อนก็มาถึงขั้นตอนเป้าหมายประมาณ 1,000 ไข่หรือ 500 hatchlings ได้รับการคัดเลือกจากสี่ไหระฆังและโอนไปยังสิบ 15 มลหลอด (หลอดแต่ละหลอดมีตัวอ่อนจากขวดระฆังเดี่ยว) และสแน็ปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว กลุ่มตัวอย่างที่ถูกแช่แข็งเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนการสกัดไขมัน เนื่องจากการศูนย์บ่มเพาะชำรุดเมื่อ 2 องศาเซลเซียสตัวอ่อนถึงกระพือครีบคงอุณหภูมิบ่มได้เปลี่ยนไปเป็น 3.9 ± 0.3 ° C จนกระทั่งฟัก นี้ส่งผลให้อุณหภูมิเฉลี่ยตลอดการบ่มพัฒนา 3.3 ± 0.2 ° C และทำให้เราดู hatchlings จากกลุ่มนี้ที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 3.3 องศาเซลเซียสตลอดทั้งต้นฉบับ