2.5. Reduction of E. coli O157:H7 and S. enterica on pak choi seeds by sequential treatments with chlorine dioxide, drying, and dry heat
Pak choi seeds (300 g) were immersed in 900 ml of E. coli O157:H7 or S. enterica inoculum for 5 min. Inoculated pak choi seeds were placed on a sterile sieve (203 mm diameter, 600 mm pore size; Chung Gye Sang Gong Sa), spread evenly with a sterile spoon, and dried at 21 ± 2 C for 2 h in a larminar flow biosafety hood. After drying, pak choi seeds (150 g) were immersed in 450 ml of sterile DW or aqueous ClO2 (200 mg/ml) for 5 min and rinsed twice in 450 ml of DW for 1 min. Pak choi seeds (20 g) in a sterile sieve (75 mm diameter, 600 mm pore size) were placed above a saturated potassium acetate solution (100 ml, aw 0.230 ± 0.005) in an airtight container and held at 45 C for 24 h. Seeds in airtight containers were then incubated at 80 C for 6, 12, 24, or 48 h. At each sampling time, pak choi seeds (5 g) were transferred into a Whirl-pak bag (B01489WA; Nasco, Fort Atkinson, WI, USA) containing 50 ml of TSB and pummelled for 1 min in a stomacher (Interscience BagMixer® 400W; Interscience, Saint Nom, France).The seed and TSB mixture was serially diluted in sterile 0.1% peptone water. Undiluted mixture (0.25 ml in quadruplicate and 0.1 ml in duplicate) and diluted mixture (0.1 ml in duplicate) were spread-plated on MacConkey sorbitol agar (MSA; BBL/Difco) con-taining nalidixic acid (50 mg/ml) (MSAN) or xylose lysine deoxy-cholateagar (XLD; BBL/Difco) to determine the populations of E. coli O157:H7 or S. enterica on seeds, respectively. MSAN and XLD plates were incubated at 37 C for 24 h before counting the colonies. The remaining undiluted seed and TSB mixtures were incubated at 37 C for 24 h for enrichment. When no presumptive E. coli O157:H7 colonies formed on MSAN, the enriched mixture was streaked on MSAN and incubated at 37 C for 24 h. Colonies presumptive for
E. coli O157:H7 were randomly selected and confirmed using an E. coli O157 latex agglutination test (Oxoid, Basingstoke, UK). When no presumptive S. enterica colonies formed on XLD, the enriched seed and TSB mixture (0.1 ml) was transferred into 10 ml Rappaport-Vassiliadis R10 broth (RVB; BBL/Difco) and incubated at 42 C for 24 h. RVB cultures were streaked onto XLD plates and incubated at 37 C for 24 h. Colonies presumptive for S. enterica were stabbed into and streaked onto triple sugar iron agar (TSI; BBL/Difco) slants using sterile needles, incubated at 37 C for 24 h, and examined for the presence of S. enterica. The detection limit for E. coli O157:H7 and S. enterica by direct plating was 1.0 log CFU/g (10 CFU/g) and the detection limit byenrichment was0.7 log CFU/g (1 CFU/5 g). To determine the germination rate, pak choi seeds (n ¼ 100) with or without sequential treatments of ClO2, drying,and dry heat were placed on cheesecloth in a sprout cultivator containing sterile DW and incubated at 25 C for 5 days. The number of seeds that germinated out of 100 seeds tested was counted and expressed as a percentage.
2.5 การลดลงของเชื้อเชื้อ E. coli O157: H7 และ S. enterica
กรัม) ถูกแช่อยู่ใน 900 มล ของเชื้อเชื้อ E. coli O157: H7 หรือเอสหัวเชื้อ enterica เป็นเวลา 5 (203 มมขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 600 มมขนาดรูขุมขน; จุงฆ้อง Gye Sang Sa) 21 ± 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงใน larminar . หลังจากการอบแห้งเมล็ดปากชอย (150 กรัม) ถูกแช่อยู่ใน 450 มล ClO2 (200 mg / ml) เป็นเวลา 5 นาทีและล้างสองครั้งใน 450 มล 1 นาทีความสามารถในปากยังไม่ชอย(20 กรัม) ในตะแกรงหมัน (75 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลาง 600 มมขนาดรูขุมขน) ถูกวางไว้ข้างต้นเป็นทางออกที่ acetate โพแทสเซียมอิ่มตัว (100 มล. อัล 0.230 ± 0.005) ในภาชนะและจัด ขึ้นที่ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6, 12, 24 หรือ 48 (5 กรัม) ถูกโอนเข้ามาในถุงวนปาก (B01489WA; Nasco ฟอร์ตแอตกินสัน, วิสคอนซิน, สหรัฐอเมริกา) ที่มี 50 มล TSB และกระหน่ำเป็นเวลา 1 นาทีใน Stomacher (Interscience BagMixer® 400W; Interscience, เซนต์ Nom ฝรั่งเศส) ได้โดยเริ่มต้นเมล็ดพันธุ์และผสม TSB ถูกเจือจางลำดับในการฆ่าเชื้อ 0.1% คุณน้ำเปปโตนส่วนผสมเจือปน(0.25 มล. ใน quadruplicate และ 0.1 มล. ในที่ซ้ำกัน) และมีส่วนผสมเจือจาง (0.1 มล . ในที่ซ้ำกัน) MacConkey (MSA; BBL / Difco) นักโทษ - ในประเด็นกรด nalidixic (50 mg / ml) (MSAN) หรือไซโลสไลซีน Deoxy-cholateagar (XLD; BBL / Difco) เพื่อตรวจสอบประชากรของเชื้ออีโคไล O157 นี้: H7 หรือเอส enterica ตามลำดับยังไม่แผ่น MSAN และ XLD ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 TSB ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 เชื้อ E. coli O157: H7 อาณานิคมบน MSAN, ส่วนผสมที่อุดมไปได้ลายบน MSAN และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงอาณานิคมสันนิษฐานสำหรับอีโคไลO157: H7 สุ่มเลือกและนักโทษสาย rmed ใช้ O157 เชื้อเชื้อ E. coli การ ทดสอบน้ำยางเกาะติดกัน (Oxoid S. enterica สันนิษฐานเกิดขึ้นบน XLD เมล็ดอุดมและมีส่วนผสม TSB (0.1 มล.) ถูกย้ายเป็น 10 มล Rappaport Vassiliadis น้ำซุป -R10 (RVB; BBL / Difco). และบ่มที่ 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงวัฒนธรรมRVB ถูกลายลงบนแผ่น XLD และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงอาณานิคมสันนิษฐานสำหรับเอสenterica (TSI; BBL / Difco) slants 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 enterica ขีด จำกัด ของการตรวจสอบสำหรับเชื้อเชื้อ E. coli O157: H7 และ S. enterica โดยชุบโดยตรงเป็น 1.0 log CFU / g (10 CFU / g) และขีด จำกัด ของการตรวจสอบ byenrichment was0.7 เข้าสู่ระบบโคโล นี / กรัม (1 โคโลนี / 5 (n ¼ 100) ClO2 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 100 นับและแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์
การแปล กรุณารอสักครู่..