Copper/BCA assays are based on redu

Copper/BCA assays are based on reduction of Cu2+ to Cu+
by amides. Although quite accurate,
these assays require freshly prepared reagent solutions, which must be carefully measured
and mixed during the assay. This is followed by lengthy, precisely timed incubations at closely
controlled, elevated temperatures, and then immediate absorbance measurements. Both
assays may be affected by other substances frequently present in biochemical solutions,
including detergents, lipids, buffers, and reducing agents (3). This requires that the assays also
include a series of standard solutions, each with a different, known concentration of protein,
but otherwise having the same composition as the sample solutions.
The Bradford dye assay is based on the equilibrium between three forms of Coomassie Blue G
dye. Under strongly acidic conditions, the dye is most stable in its double protonated form (red).
Upon binding to protein, however, it is most stable in an unprotonated form (blue).
In comparison with the other assays described above, the Bradford dye assay is faster, involves
fewer mixing steps, does not require heating, and gives a more stable colorimetric response.
The assay is prone, however, to influence from non-protein sources, particularly detergents,
and becomes progressively less linear at the high end of its useful protein concentration range.
The response also varies with the structure of the protein. These limitations make it necessary
to use protein standard solutions in this assay.
The Bradford dye reagent reacts primarily with arginine residues and, to a lesser extent,
with histidine, lysine, tyrosine, tryptophan, and phenylalanine residues. The assay is thus
less accurate for basic or acidic proteins and is more sensitive to bovine serum albumin than
"average" proteins, by about a factor of two. IgG is the preferred protein standard for the
Bradford dye assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทอง แดง/BCA assays ยึดลดของ Cu2 + กับ Cu + โดย amides แม้ว่าค่อนข้างถูกต้องassays เหล่านี้จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ลิ้มโซลูชั่น ซึ่งต้องระมัดระวังวัดและแบบผสมระหว่างการทดสอบ นี้ตาม ด้วย incubations ยาว เวลาแม่นยำที่ใกล้เคียงอุณหภูมิสูง ควบคุม และวัด absorbance ทันทีแล้ว ทั้งสองอย่างassays อาจได้รับผลจากสารอื่น ๆ มักจะอยู่ในโซลูชั่นชีวเคมีรวมทั้งผงซักฟอก โครงการ บัฟเฟอร์ และตัวแทนลดลง (3) ต้องที่ assays ยังรวมชุดมาตรฐานโซลูชั่น อื่น มีความเข้มข้นของโปรตีน ที่รู้จักกันแต่มีองค์ประกอบเดียวกันเป็นการแก้ปัญหาอย่างอื่นทดสอบย้อมแบรดฟอร์ดขึ้นอยู่กับสมดุลระหว่าง Coomassie Blue G ได้สามรูปแบบย้อม ภายใต้เงื่อนไขขอเปรี้ยว ย้อมมีเสถียรภาพมากที่สุดแบบ protonated คู่ (สีแดง)เมื่อรวมเข้ากับโปรตีน อย่างไรก็ตาม ได้มีเสถียรภาพมากที่สุดในแบบ unprotonated (สีน้ำเงิน)เมื่อเปรียบเทียบกับอื่น ๆ assays ข้าง ทดสอบย้อมแบรดฟอร์ดได้เร็ว เกี่ยวข้องกับน้อยผสมขั้นตอน ไม่ต้องใช้ความร้อน และให้การตอบสนองเหมือนมีเสถียรภาพมากขึ้นการวิเคราะห์จะเสี่ยง ไร อิทธิพลจากโปรตีนไม่ใช่แหล่งข้อมูล โดยเฉพาะอย่างยิ่งผงซักฟอกและความก้าวหน้าน้อยกว่าเส้นที่ด้านบนของช่วงความเข้มข้นของโปรตีนที่เป็นประโยชน์การตอบสนองยังกับโครงสร้างของโปรตีนแตกต่างกันไป ข้อจำกัดเหล่านี้ทำให้จำเป็นการใช้โปรตีนโซลูชั่นมาตรฐานในการทดสอบนี้รีเอเจนต์ย้อมแบรดฟอร์ดปฏิกิริยาหลักตกอาร์จินีน และ ขอบ เขตที่น้อยกว่ามีตก histidine แอล-ไลซีน tyrosine ทริปโตเฟน และ phenylalanine การวิเคราะห์จึงถูกต้องน้อยกว่าโปรตีนพื้นฐาน หรือเปรี้ยวและอ่อนไหวมากกับวัว serum albumin กว่า"เฉลี่ย" โปรตีน โดยเกี่ยวกับตัวคูณสอง IgG เป็นโปรตีนที่ต้องการมาตรฐานสำหรับการแบรดฟอร์ดย้อมวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทองแดง / การตรวจ BCA จะขึ้นอยู่กับการลดลงของ Cu2 + เพื่อ Cu +
โดยเอไมด์ แม้ว่าจะค่อนข้างถูกต้อง,
การตรวจเหล่านี้ต้องเตรียมสดการแก้ปัญหาสารซึ่งจะต้องถูกวัดอย่างระมัดระวัง
และผสมในระหว่างการทดสอบ นี้ตามด้วยความยาวหมดเวลาได้อย่างแม่นยำฟักตัวของเชื้ออย่างใกล้ชิดที่
ควบคุมอุณหภูมิที่สูงขึ้นและจากนั้นการวัดการดูดกลืนแสงทันที ทั้ง
การตรวจอาจได้รับผลกระทบจากสารอื่น ๆ ที่พบบ่อยในปัจจุบันในการแก้ปัญหาทางชีวเคมี
รวมทั้งผงซักฟอกไขมันบัฟเฟอร์และรีดิวซ์ (3) ซึ่งกำหนดให้การตรวจยัง
รวมถึงชุดของโซลูชั่นมาตรฐานแต่ละคนมีความแตกต่างกันที่รู้จักกันในความเข้มข้นของโปรตีน
แต่อย่างอื่นที่มีองค์ประกอบเดียวกับตัวอย่างการแก้ปัญหา.
ทดสอบสีย้อม Bradford จะขึ้นอยู่กับความสมดุลระหว่างสามรูปแบบของ Coomassie สีน้ำเงิน G
ย้อม ภายใต้เงื่อนไขที่เป็นกรดอย่างรุนแรงย้อมเป็นมีเสถียรภาพมากที่สุดในรูปแบบของโปรโตเนตคู่ (สีแดง).
เมื่อจับกับโปรตีน แต่มันเป็นความเสถียรมากที่สุดในรูปแบบ unprotonated (สีฟ้า).
ในการเปรียบเทียบกับการตรวจอื่น ๆ ที่อธิบายไว้ข้างต้น, สีย้อม Bradford การทดสอบจะเร็วขึ้นเกี่ยวข้องกับ
ขั้นตอนการผสมน้อยลงไม่ต้องใช้ความร้อนและให้การตอบสนองสีมีเสถียรภาพมากขึ้น.
ทดสอบมีแนวโน้ม แต่จะมีอิทธิพลต่อจากแหล่งที่ไม่ใช่โปรตีนผงซักฟอกโดยเฉพาะอย่างยิ่ง
และจะกลายเป็นเชิงเส้นก้าวหน้าน้อยที่ปลายสูงของ ช่วงความเข้มข้นของโปรตีนที่มีประโยชน์.
การตอบสนองยังแตกต่างกันที่มีโครงสร้างของโปรตีน ข้อ จำกัด เหล่านี้ทำให้มันเป็นเรื่องจำเป็น
ที่จะใช้โปรตีนโซลูชั่นมาตรฐานในการทดสอบนี้.
น้ำยาย้อม Bradford ปฏิกิริยาที่เกี่ยวเนื่องกับสารตกค้าง arginine และในระดับน้อย
กับฮิสติดีนไลซีน, ซายน์, โพรไบโอและเฟนนิลตกค้าง การทดสอบจึงเป็น
ความถูกต้องน้อยโปรตีนพื้นฐานหรือเป็นกรดและมีความไวต่ออัลบูมิซีรั่มวัวกว่า
"ค่าเฉลี่ย" โปรตีนประมาณปัจจัยที่สอง IgG เป็นมาตรฐานโปรตีนที่ต้องการสำหรับ
การทดสอบสีย้อม Bradford

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทองแดง / BCA ) อยู่บนพื้นฐานของการลดการใช้สาร CU2
โดย . แม้ว่าถูกต้องทีเดียว
วิธีเหล่านี้ต้องใช้สารเคมีที่เตรียมสดโซลูชั่นซึ่งต้องวัดให้ดี
และผสมระหว่างการทดสอบ นี้ตามด้วยยาว แน่นอนเวลาที่ incubations อย่างใกล้ชิด
ควบคุม อุณหภูมิสูงและจากนั้นทันทีค่าการวัด ทั้ง
หรืออาจจะได้รับผลกระทบจากสารบ่อยครั้งในทางชีวเคมี โซลูชั่น อื่น ๆ ,
รวมถึงผงซักฟอก ไขมัน เนื้อเยื่อ และการเจ้าหน้าที่ ( 3 ) นี้ต้องการให้หรือยัง
รวมถึงชุดของโซลูชั่นมาตรฐาน แต่ละคนมีความแตกต่างกัน รู้จักกัน ความเข้มข้นของโปรตีน ,
แต่อย่างอื่นมีองค์ประกอบเช่นเดียวกับตัวอย่าง
โซลูชั่น .ที่แบรดฟอร์ดย้อม ( ขึ้นอยู่กับความสมดุลระหว่างสามรูปแบบเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า g
ย้อม ภายใต้สภาวะที่เป็นกรดรุนแรง การย้อมมีเสถียรภาพมากที่สุดในรูปแบบของ protonated คู่ ( สีแดง )
เมื่อการจับกับโปรตีน แต่เป็นมีเสถียรภาพมากที่สุดใน unprotonated แบบฟอร์ม ( สีฟ้า ) ในการเปรียบเทียบกับอื่น ๆ .
) ที่อธิบายไว้ข้างต้น , Bradford ย้อมโดยเร็วเกี่ยวข้องกับ
น้อยกว่าผสมขั้นตอนไม่ต้องใช้ความร้อน และช่วยให้มีเสถียรภาพมากขึ้น ตอบสนอง 7.4 .
( เสี่ยง อย่างไรก็ตาม อิทธิพลจากแหล่งโปรตีนไม่โดยเฉพาะอย่างยิ่งสาร
และจะกลายเป็นก้าวหน้าน้อยเชิงเส้น ที่ปลายสูงของช่วงที่มีประโยชน์ โปรตีน .
การตอบสนองยังแตกต่างกันกับโครงสร้างของโปรตีน ข้อ จำกัด เหล่านี้ทำให้จำเป็น
การใช้โซลูชั่นโปรตีนมาตรฐานในการทดสอบนี้ ใช้เป็นสีย้อม
แบรดฟอร์ด reacts กับอาร์จินีนตกค้างและในระดับน้อยกว่า
กับฮิสติดีน , ไลซีน , ฟีนิลอะลานีนและไทโรซีน ทริปโตเฟนที่ตกค้าง ( จึง
น้อยถูกต้องพื้นฐาน หรือ เปรี้ยว และมีความไวต่อโปรตีนอัลบูมินมากกว่า
" เฉลี่ย " โปรตีน โดยปัจจัยที่สองIgG เป็นโปรตีนมาตรฐานที่ต้องการสำหรับ
แบรดฟอร์ดย้อม ตามลำดับ