2.8. Antioxidants enzymes assay in

2.8. Antioxidants enzymes assay in serum and liver
2.8.1. Glutathione peroxidase (GPx)
GPx activity was measured spectrophotometrically at 340 nm using a
technique based on the Flohe´ and Gu¨nzler (1984) procedure, in which
GSH formation is followed by measurement of oxidation of the reduced
form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) to the
oxidized form, nicotinamide adenine phosphate (NADP+). Final concentrations
in the reaction mixture, in 0.1 mol/l potassium phosphate
buffer (pH 7.0) were 0.2 mmol/l NADPH, 1 mmol/l diethylenetriaminepentaacetic
acid, 1.5 mmol/l reduced glutathione (GSH) and 7.3 · 106 U/
ml reductase glutathione (GR). The reaction was started with 0.12 mmol/l
tert-butyl hydroperoxide (t-BuOOH). GPx activity is expressed as
lmol min1 g1 or ml1
.
2.8.2. Superoxide dismutase (SOD)
SOD activity was measured as described by Paoletti and Mocali
(1972). Samples (25 ll) were added to the reaction mixture containing, at
final concentrations, 100 mmol/l diethanolamine buffer (pH 7.4),
0.14 mmol/l NADPH, 2.27/1.14 mmol/l EDTA/MnCl2 (pH 7.0). The
oxidation of NADPH was started by the addition of 1 mmol/l
b-mercaptoethanol. Oxidation of NADPH was measured spectrophotometrically
at 340 nm. A standard curve for SOD activity was constructed
using SOD from bovine erythrocytes (Sigma, St Louis, MO, USA). One
unit of SOD activity was defined as the amount of the enzyme required to
inhibit the oxidation of NADPH by 50%. SOD activity was expressed in
units per gram of tissue or ml of serum.
2.8.3. Catalase (CAT)
CAT activity was estimated following the method of Aebi (1984). The
reaction was started by the addition of 20 ll of sample in 2 ml of 30 mmol/l
hydrogen peroxide (H2O2) in 50 mmol/l potassium phosphate buffer (pH
7.0). Enzyme units are expressed as mmol/l of consumed H2O2 per min g
or ml.
2.9. Isolated blood vessels and histopathology analysis
After 10 weeks of treatment, animals were euthanized using CO2
chamber and serum samples were taken through heart puncture for biochemical
parameters. The thoracic aorta was rapidly removed, rinsed in
0.9% saline, fixed in 10% buffered formalin, processed for dehydration,
and embedded in paraffin. Five-micron sections were cut transversally on a
glass slide, mounted, rehydrated and stained with Harris hematoxylin/
eosin (H&E).
2.10. Statistical analysis
The data was analyzed using GraphPad Prism V.4 (GraphPad Software,
Inc., San Diego, CA). The statistical significance of differences
between data means was determined by using analysis of variance one way
(ANOVA), followed by post hoc testing by Tukeys test. A value of
P < 0.05 was considered as statistically significant. Results are given as
means ± SD, n = 6. For correlation analysis, Carl Pearson Moment
correlation test was employed.
3. Results
3.1. Antioxidant activity of the T. indica L. extract in vitro
As an initial chemical characterization of the extract, an
HPLC-UV chromatogram was performed. An UV spectra
was obtained for each observed peak in the chromatogram.
812

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8. Antioxidants enzymes assay in serum and liver2.8.1. Glutathione peroxidase (GPx)GPx activity was measured spectrophotometrically at 340 nm using atechnique based on the Flohe´ and Gu¨nzler (1984) procedure, in whichGSH formation is followed by measurement of oxidation of the reducedform of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) to theoxidized form, nicotinamide adenine phosphate (NADP+). Final concentrationsin the reaction mixture, in 0.1 mol/l potassium phosphatebuffer (pH 7.0) were 0.2 mmol/l NADPH, 1 mmol/l diethylenetriaminepentaaceticacid, 1.5 mmol/l reduced glutathione (GSH) and 7.3 · 106 U/ml reductase glutathione (GR). The reaction was started with 0.12 mmol/ltert-butyl hydroperoxide (t-BuOOH). GPx activity is expressed aslmol min1 g1 or ml1.2.8.2. Superoxide dismutase (SOD)SOD activity was measured as described by Paoletti and Mocali(1972). Samples (25 ll) were added to the reaction mixture containing, atfinal concentrations, 100 mmol/l diethanolamine buffer (pH 7.4),0.14 mmol/l NADPH, 2.27/1.14 mmol/l EDTA/MnCl2 (pH 7.0). Theoxidation of NADPH was started by the addition of 1 mmol/lb-mercaptoethanol. Oxidation of NADPH was measured spectrophotometricallyat 340 nm. A standard curve for SOD activity was constructedusing SOD from bovine erythrocytes (Sigma, St Louis, MO, USA). Oneunit of SOD activity was defined as the amount of the enzyme required toinhibit the oxidation of NADPH by 50%. SOD activity was expressed inunits per gram of tissue or ml of serum.2.8.3. Catalase (CAT)CAT activity was estimated following the method of Aebi (1984). Thereaction was started by the addition of 20 ll of sample in 2 ml of 30 mmol/lhydrogen peroxide (H2O2) in 50 mmol/l potassium phosphate buffer (pH7.0). Enzyme units are expressed as mmol/l of consumed H2O2 per min gor ml.2.9. Isolated blood vessels and histopathology analysisAfter 10 weeks of treatment, animals were euthanized using CO2chamber and serum samples were taken through heart puncture for biochemicalparameters. The thoracic aorta was rapidly removed, rinsed in0.9% saline, fixed in 10% buffered formalin, processed for dehydration,and embedded in paraffin. Five-micron sections were cut transversally on aglass slide, mounted, rehydrated and stained with Harris hematoxylin/eosin (H&E).2.10. Statistical analysisThe data was analyzed using GraphPad Prism V.4 (GraphPad Software,Inc., San Diego, CA). The statistical significance of differencesbetween data means was determined by using analysis of variance one way(ANOVA), followed by post hoc testing by Tukeys test. A value ofP < 0.05 was considered as statistically significant. Results are given asmeans ± SD, n = 6. For correlation analysis, Carl Pearson Momentcorrelation test was employed.3. Results3.1. Antioxidant activity of the T. indica L. extract in vitroเป็นการจำแนกลักษณะเคมีเบื้องต้นของสารสกัด การHPLC UV chromatogram ที่ได้ดำเนินการ การสเปกตรัมรังสียูวีได้รับสำหรับแต่ละ chromatogram จุดสังเกต812

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ทดสอบในซีรั่มและตับ
2.8.1 กลูตาไธโอน peroxidase (GPx)
กิจกรรม GPx วัด spectrophotometrically ที่ 340 นาโนเมตรโดยใช้
เทคนิคที่อยู่บนพื้นฐานของ Flohe' และGu¨nzler (1984) ขั้นตอนซึ่งใน
GSH การก่อตัวตามด้วยการวัดของการเกิดออกซิเดชันของลด
รูปแบบของ Nicotinamide adenine dinucleotide ฟอสเฟต ( NADPH) กับ
รูปแบบออกซิไดซ์ Nicotinamide adenine ฟอสเฟต (NADP +) ความเข้มข้นของรอบชิงชนะเลิศ
ในการผสมปฏิกิริยาใน 0.1 mol / L โพแทสเซียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) เป็น 0.2 มิลลิโมล / ลิตร NADPH 1 มิลลิโมล / ลิตร diethylenetriaminepentaacetic
กรด 1.5 มิลลิโมล / ลิตรลดลงกลูตาไธโอน (GSH) และ 7.3 · 106 U /
reductase มล. กลูตาไธโอน (GR) ปฏิกิริยาเริ่มต้นด้วย 0.12 มิลลิโมล / ลิตร
tert-butyl hydroperoxide (T-BuOOH) กิจกรรม GPx จะแสดงเป็น
G1 lmol min1 หรือ ML1
.
2.8.2 dismutase superoxide (SOD)
กิจกรรม SOD วัดตามที่อธิบาย Paoletti และ Mocali
(1972) ตัวอย่าง (25 LL) ถูกเพิ่มเข้าไปผสมปฏิกิริยาที่มีที่
มีความเข้มข้นสุดท้าย 100 มิลลิโมล / ลิตร Diethanolamine บัฟเฟอร์ (pH 7.4)
0.14 มิลลิโมล / ลิตร NADPH, 2.27 / 1.14 มิลลิโมล / ลิตร EDTA / MnCl2 (pH 7.0)
ออกซิเดชันของ NADPH เริ่มต้นจากการเพิ่มขึ้นของ 1 มิลลิโมล / ลิตร
B-mercaptoethanol ออกซิเดชันของ NADPH วัด spectrophotometrically
ที่ 340 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานสำหรับกิจกรรม SOD ถูกสร้างขึ้น
โดยใช้ SOD จากเม็ดเลือดแดงวัว (Sigma, St Louis, MO, USA) หนึ่ง
หน่วยของกิจกรรม SOD ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินของเอนไซม์ที่จำเป็นในการ
ยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ NADPH โดย 50% กิจกรรม SOD ถูกแสดงออกใน
หน่วยต่อกรัมหรือมิลลิลิตรของซีรั่ม.
2.8.3 catalase (CAT)
กิจกรรม CAT เป็นที่คาดกันดังต่อไปนี้วิธีการ Aebi นี้ (1984)
ปฏิกิริยาเริ่มต้นจากการเพิ่มขึ้นของ LL 20 ของกลุ่มตัวอย่างใน 2 มิลลิลิตร 30 มิลลิโมล / ลิตร
ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ใน 50 มิลลิโมล / ลิตรบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH
7.0) หน่วยเอนไซม์จะแสดงเป็นมิลลิโมล / ลิตร H2O2 บริโภคต่อนาทีกรัม
หรือมล.
2.9 บางแห่งหลอดเลือดและการวิเคราะห์จุลพยาธิวิทยา
หลังจาก 10 สัปดาห์ของการรักษาสัตว์ที่ถูกฆ่าเพื่อเก็บเนื้อเยื่อโดยใช้ CO2
หอการค้าและซีรั่มถูกนำตัวอย่างผ่านการเจาะหัวใจชีวเคมี
พารามิเตอร์ เส้นเลือดทรวงอกถูกลบออกอย่างรวดเร็วล้างใน
0.9% น้ำเกลือแก้ไขใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ประมวลผลสำหรับการคายน้ำ
และฝังตัวอยู่ในพาราฟิน ส่วนห้าไมครอนถูกตัด transversally บน
สไลด์แก้วติด rehydrated และย้อมด้วยสี hematoxylin แฮร์ริส /
Eosin (H & E).
2.10 การวิเคราะห์ทางสถิติ
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ปริซึม GraphPad V.4 (GraphPad ซอฟแวร์
อิงค์, San Diego, CA) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของความแตกต่าง
ระหว่างข้อมูลวิธีที่ถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางหนึ่ง
(ANOVA) ตามด้วยการโพสต์เฉพาะกิจการทดสอบโดยการทดสอบ Tukeys ค่า
P <0.05 ได้รับการพิจารณาเป็นนัยสำคัญทางสถิติ ผลที่จะได้รับเป็น
วิธี± SD, N = 6 สำหรับการวิเคราะห์ความสัมพันธ์คาร์ลเพียร์สัน
ทดสอบความสัมพันธ์เป็นลูกจ้าง.
3 ผลการค้นหา
3.1 ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจาก T. indica L. ในหลอดทดลอง
ในฐานะที่เป็นลักษณะทางเคมีเบื้องต้นของสารสกัดที่
chromatogram HPLC-UV ได้ดำเนินการ สเปกตรัมรังสียูวี
ที่ได้รับในแต่ละจุดสูงสุดตั้งข้อสังเกตใน chromatogram ได้.
812