Materials and methods2.1 Experiment

Materials and methods
2.1 Experimental animals
animalsBlood samples (n = 112) were collected from males and females of young and adult Vembur sheep maintained at the farmers’ households inthe breeding tract (between 9◦00 and 9◦30 N and 77◦90 and 78◦25 E).Genomic DNA was extracted using standard phenol–chloroform extrac-tion procedure (Sambrook et al., 1989) with slight modifications by using DNAzol reagent, instead of SDS and proteinase K.
2.2. Primer synthesis and PCR–RFLP reactions
The published primer sequences were used for amplification of GH(Hua et al., 2009) genes.
GH1-F 5 -CTCTGCCTGCCCTGGACT-3
GH1-R 5 -GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3
Both PCR reactions were performed in a 20 l mixture containing10 pmol forward and reverse primers each, 10 l master mix which con-tained 200 M dNTP (deoxyribonucleotide phosphate), 1.5 mM MgCl2, 1unit of Taq-DNA polymerase (Sigma), and 50 ng genomic DNA as tem-plate. Gradient PCR was used to optimize the reaction accuracy: 95◦C for

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ2.1 สัตว์ทดลองanimalsBlood ตัวอย่าง (n = 112) ได้รวบรวมจากชายและหญิงของหนุ่มสาว และผู้ใหญ่ Vembur แกะเก็บรักษาในครัวเรือนของเกษตรกรในทางเดินอาหารการผสมพันธุ์ (ระหว่าง 9◦00 และ 9◦30 N และ 77◦90 และ 78◦25 E) Genomic DNA ถูกสกัดด้วยมาตรฐานวาง – คลอโรฟอร์ม extrac สเตรชันกระบวน (Sambrook et al., 1989) ปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โดยใช้รีเอเจนต์ DNAzol, SDS และ proteinase คุณแทน2.2 การรองพื้นการสังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR-RFLPลำดับประกาศพื้นที่ใช้สำหรับการขยายของ GH (หัว et al., 2009) ยีนGH1-F 5 - CTCTGCCTGCCCTGGACT-3 GH1-R 5 - GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3 ดำเนินทั้งสองปฏิกิริยา PCR ในการ 20 l ผสม containing10 pmol ไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์ละ 10 l หลักผสม (deoxyribonucleotide ฟอสเฟต) dNTP 200 M ที่คอน tained, 1.5 มม. MgCl2, 1unit ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (ซิกมา), และดีเอ็นเอ genomic ng 50 เป็นยการแผ่น ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความถูกต้องของปฏิกิริยา PCR ไล่ระดับ: 95◦C สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
2.1 สัตว์ทดลอง
animalsBlood ตัวอย่าง (n = 112) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากชายและหญิงของหนุ่มสาวและผู้ใหญ่ Vembur แกะไว้ที่ครัวเรือนเกษตรกรเบี่ยงทางเดินพันธุ์ (ระหว่าง9◦00และ9◦30 n และ77◦90 78 ◦25 E) .Genomic ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ขั้นตอนฟีนอลคลอโรฟอร์มสกัด-การมาตรฐาน (Sambrook et al., 1989) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยโดยใช้น้ำยา DNAzol แทน SDS และโปรเค
2.2 ไพรเมอร์สังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR-RFLP
ลำดับไพรเมอร์ที่ตีพิมพ์ถูกนำมาใช้สำหรับการขยายของ GH (Hua et al., 2009) ยีน.
GH1-F 5 -CTCTGCCTGCCCTGGACT-3
GH1-R 5 -GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3
ทั้งสองปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการใน 20 ลิตรผสม containing10 pmol ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์แต่ละ 10 ลิตรผสมต้นแบบซึ่งนักโทษ tained-200 M dNTP (deoxyribonucleotide ฟอสเฟต) 1.5 มิลลิ MgCl2, 1unit ของโพลิเมอร์ Taq ดีเอ็นเอ (ซิกม่า) และ 50 ng ดีเอ็นเอเป็น TEM จาน . PCR ไล่โทนสีถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความแม่นยำในการเกิดปฏิกิริยา: 95◦Cสำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการทดลองสัตว์

2.1 ตัวอย่าง animalsblood ( n = 112 ) โดยใช้ข้อมูลจากชายและหญิงเด็กและผู้ใหญ่ vembur แกะไว้ที่เกษตรกรครัวเรือนในระบบการผสมพันธุ์ระหว่าง 9 ◦ 00 และ 9 ◦ 30 N และ 77 ◦ 90 และ 78 ◦ 25 E ) จีโนมดีเอ็นเอโดยใช้มาตรฐานฟีนอล - คลอโรฟอร์มสกัดกระบวนการ tion ( sambrook et al . ,1989 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โดยการใช้สารเคมี dnazol แทนที่จะ SDS และโปรตีน K .
2.2 . การสังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์สำหรับรองพื้น :
หัวข้อลำดับที่ใช้เป็นแบบ GH ( หัว et al . , 2009 ) ยีน gh1-f 5
-

- ctctgcctgccctggact-3 gh1-r 5 ggagaagcagaaggcaacc-3 ทั้ง PCR ปฏิกิริยาได้ใน 20 ลิตร ผสม containing10 pmol ไปข้างหน้าและย้อนกลับจากแต่ละต้นแบบผสม 10 ลิตร ซึ่งคอน tained 200 M dntp ( deoxyribonucleotide ฟอสเฟต 1.5 มม. ชุด 1unit , ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( Sigma ) และ 50 ของ genomic DNA เป็นเทมเพลท การใช้ปฏิกิริยา PCR เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความแม่นยำ : 95 ◦ C