Enzyme-linked immunosorbent assay V

Enzyme-linked immunosorbent assay
Virus detection by ELISA relies on a ‘sandwich’ technique and several variations of this have been
described. One procedure uses the reagents, solutions, times and temperature that are used in the
competitive ELISA (C-ELISA) for serology (see Section B.2.b), except that the Tween 20 concentration is
twofold (0.1% [v/v]). The microplate used should be of high adsorption capability (e.g. Nunc Maxisorp
immunoplate). The liver homogenate is a 10% (w/v) suspension in standard PBS; 50 µl/well is the standard
volume to use in each step. The ELISA buffer used for all steps is PBS with 1% yeast extract (or bovine
serum albumin [BSA]), and 0.1% Tween 20, pH 7.4. All incubation steps are for 50–60 minutes at 37°C with
gentle agitation. After all steps three washes of 3–5 minutes must be performed using PBS with 0.05%
Tween 20. A positive and negative RHD rabbit liver homogenate must be used as controls. The horseradish
peroxidase (HRPO) conjugate could be purified lgG from a specific polyclonal serum or MAbs (see Section
B.2.b). Anti-RHDV MAbs have been produced in several laboratories and can be used instead of rabbit
polyclonal sera. MAbs recognising specific epitopes expressed only by the RHDVa variant were also
produced (Capucci, pers. data).
To better characterise the antigenicity of the RHD isolates by sandwich ELISA, it is advisable to test each
sample in four replicates, and then to use four different HRPO conjugates, i.e. two MAbs recognising the
same antigenic determinant present on the virus surface and expressed alternatively by the ‘classical’ strain
or by the RHDVa variant, a polyclonal hyperimmune anti-RHDV serum (which could identify potential ‘new
variant’ or correlated calicivirus, such as EBHSV) and a pool of MAbs recognising internal epitopes that can
detect smooth, degraded VLPs as well as EBHSV. An alternative antigen-capture ELISA has been
described using a sheep anti-RHDV as the capture antibody and a MAb for detection of RHDV (Collins et al.,
1996).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay ตรวจหาไวรัส โดย ELISA อาศัยเทคนิค 'แซนวิช' และมีหลายรูปแบบนี้ อธิบาย ขั้นตอนที่หนึ่งใช้ reagents แก้ไขปัญหา เวลา และอุณหภูมิที่ใช้ในการ (C-ELISA) ELISA ในการแข่งขันสำหรับวิทยาเซรุ่ม (ดูส่วน B.2.b), ยกเว้นที่มี Tween 20 ความเข้มข้น สองเท่า (0.1% [v/v]) Microplate ที่ใช้ควรมีความสามารถในการดูดซับสูง (เช่น Nunc Maxisorp immunoplate) Homogenate ตับจะระงับ 10% (w/v) ใน PBS มาตรฐาน ดี 50 µl เป็นมาตรฐาน ปริมาณการใช้ในแต่ละขั้นตอน บัฟเฟอร์ ELISA ที่ใช้สำหรับขั้นตอนทั้งหมดคือ PBS มี 1% ยีสต์สกัด (หรือวัว serum albumin [บีเอสเอ]), และ 0.1% Tween 20 ค่า pH 7.4 การ ขั้นตอนของคณะทันตแพทยศาสตร์ทั้งหมดมี 50 – 60 นาทีที่ 37° C มี อาการกังวลต่ออ่อนโยน หลังจากขั้นตอนทั้งหมดสามต่อผิวหน้า 3-5 นาที ต้องดำเนินการด้วย PBS 0.05% Tween 20 ต้องใช้การบวก และลบ RHD กระต่ายตับ homogenate เป็นตัวควบคุม Horseradish ค่าสังยุค peroxidase (HRPO) อาจเป็น lgG บริสุทธิ์จากซีรั่ม polyclonal เฉพาะหรือ MAbs (ดูหัวข้อ B.2.b) ต่อต้าน RHDV MAbs ได้ถูกผลิตในห้องปฏิบัติการต่าง ๆ และสามารถใช้แทนกระต่าย นโยบาย polyclonal ตระหนักถึงแสดง โดยเฉพาะการแปร RHDVa epitopes เฉพาะ MAbs ได้ยัง ผลิต (Capucci อาทิข้อมูล) จะดีกว่า characterise antigenicity ของ RHD แยก โดยแซนวิ ELISA จึงแนะนำให้ทดสอบแต่ละ ตัวอย่างในการคัดลอกตัวเองสี่ และจากนั้น จะใช้แตกต่างกัน HRPO สี่ conjugates เช่นสอง MAbs ตระหนักถึงการ ดีเทอร์มิแนนต์ antigenic เดียวอยู่ในไวรัสที่ผิว และแสดงหรือ โดยพันธุ์ 'คลาสสิก' หรือตัว แปร RHDVa เซรั่มแบบ polyclonal hyperimmune RHDV ป้องกัน (ซึ่งสามารถระบุศักยภาพ ' ใหม่ ตัวแปร ' หรือ correlated calicivirus เช่น EBHSV) และกลุ่มของ MAbs ตระหนักถึง epitopes ภายในที่สามารถ ตรวจสอบเรียบ เสื่อมโทรม VLPs เป็น EBHSV ทาง ELISA ตรวจหารวบรวมข้อมูลได้ อธิบายการใช้การแกะต่อต้าน-RHDV เป็นแอนติบอดีจับและมาบที่ตรวจ RHDV (คอลลินส์ et al., 1996)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay
การตรวจจับไวรัสโดยวิธีอาศัยเทคนิค ' แซนด์วิช ' และหลายรูปแบบนี้ได้ถูก
อธิบาย หนึ่งขั้นตอนการใช้ สารเคมี สารละลาย เวลาและอุณหภูมิที่ใช้ในการแข่งขัน (
( c-elisa ) สำหรับวิทยาเซรุ่ม ( ดูมาตรา b.2 . B ) , ยกเว้นว่า Tween 20 สมาธิ
ทวีคูณ ( 0.1 % [ 5 / 5 ] )ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ควรใช้ความสามารถในการดูดซับสูง ( เช่นขณะนี้ maxisorp
immunoplate ) ตับแยกเป็น 10 % ( w / v ) ระงับใน PBS มาตรฐาน ; 50 µ L / ดีเป็นปริมาณมาตรฐาน
ที่จะใช้ในแต่ละขั้นตอน บัฟเฟอร์ที่ใช้วิธีทุกขั้นตอนมีภาพด้วยสารสกัดจากยีสต์ 1 % ( หรือวัว
อัลบูมิน [ 6 ] ) และ 0.1% Tween 20 ที่ pH 7.4 .ทุกขั้นตอนการบ่มเป็น 50 – 60 นาทีที่ 37 ° C
นุ่มนวลเขย่า หลังจากทั้งหมด 3 ขั้นตอนล้าง 3 – 5 นาทีต้องปฏิบัติใช้ PBS ) %
Tween 20 เป็นบวกและลบแยกตับ rhd กระต่ายต้องใช้เป็นตัวควบคุม . .
เปอร์ออกซิเดส ( hrpo ) คือ สามารถแยกชนิดจากที่เฉพาะเจาะจงใช้เซรั่ม หรือ โมโนโคลนอลแอนติบอดี ( ดูมาตรา
b.2 . B )ต่อต้าน rhdv แอนติบอดีได้ถูกผลิตในห้องปฏิบัติการหลายและสามารถใช้แทนกระต่าย
ใช้เซรา โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงและตระหนักถึงผู้ป่วย โดยเฉพาะ rhdva แตกต่างก็ผลิต ( capucci
, ข่าวสาร ข้อมูล )
ดีกว่าชันเจื้อยของเชื้อโดยวิธี ELISA rhd แซนวิช ควรทดสอบจำนวน 4 ซ้ำแต่ละ
,แล้วใช้ hrpo สารประกอบที่แตกต่างกันสี่ คือสองเม็ดตระหนักถึง
เดียวกันต่อแอนติเจนบนผิวของไวรัสในปัจจุบันและแสดงหรือโดย ' คลาสสิก ' เครียด
หรือโดย rhdva ตัวแปร , โพลีเอ เซรั่มต่อต้าน rhdv ( ซึ่งสามารถระบุที่มีศักยภาพใหม่ '
' หรือมีแคลลิสิไวรัสตัวแปร ,เช่น ebhsv ) และสระว่ายน้ำของโคลนจากภายในที่สามารถตระหนักถึง
ตรวจสอบเรียบ vlps เสื่อมโทรมรวมทั้ง ebhsv . มีจับแอนติเจน ELISA ได้รับทางเลือก
อธิบายการใช้แกะต่อต้าน rhdv เป็นจับภาพและการตรวจหาแอนติบอดี แอนติบอดี rhdv ( คอลลินส์ et al . ,
1996 )