kit master mix (2X) ABI Prism ampli

kit master mix (2X) ABI Prism amplification reaction mixture
containing 100 nM each of the AcKS10L and AcKS10R primers and
50 ng of template DNA. Control samples, without template DNA,
were also included in the runs. Reactions were prepared in duplicates
of 10 mL final volume, in MicroAmp optical 96-well reaction
plates sealed with optical adhesive covers (Applied
Biosystems, USA). Runs were performed in an Applied Biosystems
7500 Fast Real-Time PCR system (Applied Biosystems) using the
following amplification protocol: one cycle of 5 min at 95 C and
40 cycles of 15 s at 95 C and 1 min at 60 C. At the end of each
run, a dissociation protocol was performed to confirm the specificity
of the assay. Melting curves were programmed as 15 s at
95 C, 15 s at 60 C, 20 min slow ramp and 15 s at 95 C. The data
for the dissociation curve were captured during this slow ramp,
and the melting curves were visualized using ABI PRISM 7900
software. Quantification of the unknown DNA samples was carried
out by interpolating the samples' CT values from a standard
curve.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชุดหลักผสม (2 X) ABI ปริซึมขยายปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย 100 nM แต่ละของไพรเมอร์ AcKS10L และ AcKS10R และ50 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ ตัวอย่างควบคุม โดยแม่แบบดีเอ็นเอนอกจากนี้ยังได้รวมอยู่ในทำงาน มีเตรียมปฏิกิริยาในสำเนาของ 10 mL สุดท้ายเสียง มัลติมิเตอร์แสง 96 ดีเกิดแผ่นปิดผนึก ด้วยกาวแสงครอบคลุม (ประยุกต์Biosystems สหรัฐอเมริกา) ทำงานได้ดำเนินการในการ Biosystems ใช้อย่าง Real-Time PCR 7500 ใช้ระบบ (Biosystems ใช้)ต่อขยายโพรโทคอล: หนึ่งรอบ 5 นาทีที่ 95 C และรอบ 40 s ที่ 95 C และ 1 นาทีที่ 60 c. 15 ในตอนท้ายของแต่ละรัน โพรโทคอ dissociation ทำเพื่อยืนยัน specificity ที่ของการวิเคราะห์ เส้นโค้งที่ละลายได้โปรแกรม 15 s ที่95 C, s ที่ 60 C 15, 20 นาทีช้าทางลาดและ 15 s ที่ซี 95 ข้อมูลสำหรับเส้นโค้ง dissociation รวมระหว่างทางลาดนี้ช้าและเส้นโค้งละลายมี visualized ใช้ ABI PRISM 7900ซอฟต์แวร์ ทำนับตัวอย่างดีเอ็นเอไม่รู้จักออก โดย interpolating ค่า CT ตัวอย่างจากมาตรฐานเส้นโค้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผสมชุดต้นแบบ (2X) ขยาย ABI
ปริซึมผสมปฏิกิริยาที่มี100 นาโนเมตรแต่ละไพรเมอร์และ AcKS10L AcKS10R และ
50 นาโนกรัมดีเอ็นเอแม่แบบ
ตัวอย่างการควบคุมโดยไม่ต้องดีเอ็นเอแม่แบบยังรวมอยู่ในการวิ่ง ปฏิกิริยาได้จัดทำรายการที่ซ้ำกันของปริมาณ 10 มิลลิลิตรสุดท้ายในไมโครแอมป์แสงปฏิกิริยา 96 หลุมแผ่นปิดผนึกด้วยกาวแสงครอบคลุม(Applied Biosystems สหรัฐอเมริกา) วิ่งได้ดำเนินการใน Applied Biosystems 7500 ระบบ Real-Time PCR เร็ว (Applied Biosystems) โดยใช้โปรโตคอลขยายต่อไปนี้: หนึ่งรอบ 5 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและ40 รอบของ 15 วินาทีที่ 95 ซีและ 1 นาทีที่ 60 องศาเซลเซียส . ในตอนท้ายของแต่ละวิ่งโปรโตคอลแยกออกจากกันได้รับการดำเนินการเพื่อยืนยันความจำเพาะของการทดสอบ เส้นโค้งจุดหลอมเหลวมีโปรแกรมเป็น 15 วินาทีที่95 องศาเซลเซียส, 15 วินาทีที่ 60 องศาเซลเซียส 20 นาทีทางลาดช้าและ 15 วินาทีที่ 95 องศาเซลเซียส ข้อมูลสำหรับการแยกตัวออกโค้งที่ถูกจับระหว่างทางลาดช้านี้และเส้นโค้งละลายที่ถูกมองเห็นโดยใช้ABI PRISM 7900 ซอฟแวร์ ปริมาณของตัวอย่างดีเอ็นเอที่ไม่รู้จักได้ดำเนินการโดย interpolating ตัวอย่าง 'ค่า CT จากมาตรฐานโค้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ต้นแบบผสม Kit ( 2x ) ABI ปริซึมแบบปฏิกิริยาผสม
( 100 nm ของแต่ละ acks10l และไพรเมอร์และ acks10r
50 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ ตัวอย่างควบคุม ไม่มีดีเอ็นเอแม่แบบ
ยังรวมอยู่ในวิ่ง ปฏิกิริยาที่เตรียมไว้ในสำเนา
10 ml สุดท้ายกําหนดในปฏิกิริยาแสง microamp
96 ดีแผ่นปิดผนึกด้วยกาวแสงคลุม ( ประยุกต์
มนุษย์ สหรัฐอเมริกา )วิ่งได้เร็วในเวลาจริงในระบบโดยประยุกต์ Biosystems
7500 ( Applied Biosystems ) โดยใช้
ดังต่อไปนี้โปรโตคอลขยาย : 1 รอบ 5 นาทีที่ 95  C
40 รอบ 15 s 95  C และ 1 นาทีที่ 60  C ที่ส่วนท้ายของแต่ละขั้นตอนคือการ
วิ่ง , เมื่อทำการเพาะ
ของการทดสอบ เส้นโค้งเป็นโปรแกรมละลาย 15 s
95  C 15 S 60  C20 นาทีช้าทางลาดและ 15 s 95  C ข้อมูล
สำหรับเส้นโค้งถูกจับในระหว่างการลาดช้านี้
และละลายเส้นโค้งเป็นภาพใช้ abi ปริซึม 7900
ซอฟต์แวร์ ปริมาณของตัวอย่างดีเอ็นเอที่ถูกนำออกโดยการ ประมาณ
ตัวอย่าง ' CT ค่าจากกราฟมาตรฐาน