2.4. SDS–PAGE
SDS–PAGE was carried out according to the previously described method of Abdel-Mohsen et al. (2003) with several mod-ifications. Briefly, SDS–PAGE was performed using 10% polyacry-lamide gels, and standard proteins (Bio-Rad Laboratories, Tokyo,Japan) were simultaneously run for protein identification. Each fer-mented mash sample (5 g) was homogenized with 45 ml of dis-tilled water. The homogenates (250 ll) were then dissolved with 50 ll of 0.5 M Tris–HCl buffer (pH 6.8), 80 ll of 10% SDS and 20 llof b-mercaptoethanol, and heated at 90 C for 3 min. After heating, 10 ll of each supernatant obtained by centrifugation was applied to each lane of the gel. The gel was stained with Coomassie brilliant blue R-250 (5.0 g/l) containing 50% ethanol and 10% acetic acid in distilled water and then distained with a solution containing 31.25% ethanol and 12.5% acetic acid in dis-tilled water until the background of the gel was clear. The gel was then scanned by a gel scanner (Chemidox XRS, Bio-Rad Laboratories, Tokyo, Japan).
2.4 . SDS SDS - หน้าหน้า
) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้วิธีการเดลโมเซน et al . ( 2003 ) กับแอนไอออนจึง mod-i หลาย บรี fl Y , SDS - หน้าแสดงการใช้ 10% polyacry lamide เจล , และโปรตีนมาตรฐาน ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) พร้อมวิ่ง โปรตีนจึง identi ไอออนบวกแต่ละเพื่อ mented บดตัวอย่าง ( 5 กรัม ) เป็นโฮโม 45 มิลลิลิตรเพาะปลูกลดน้ำ การ homogenates ( 250 ll ) แล้วละลายกับ 50 จะ 0.5 M จากบัฟเฟอร์ pH 6.8 ( HCL ) , 80 จะ 10% SDS และ 20 llof b-mercaptoethanol และอุณหภูมิ 90 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาที หลังจากความร้อน 10 จะได้ปั่นแต่ละที่นำใช้ในแต่ละช่องทางของเจลเจลเปื้อนเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส ( 5.0 กรัม / ลิตร ) ผสมเอทานอล 50% และ 10% กรดในน้ำแล้ว distained กับสารละลายที่มีเอทานอลร้อยละ 31.25 % และ 12.5 % กรดจากน้ำจนเพาะปลูกในพื้นหลังของเจลได้ชัดเจน เจลเป็นเจลแล้วสแกนด้วยสแกนเนอร์ ( chemidox xrs ชีวภาพราดห้องปฏิบัติการ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) .
การแปล กรุณารอสักครู่..
