TTO (batch W/E504) was kindly provi

TTO (batch W/E504) was kindly provided by Australian Plantations Pty Ltd, Wyrallah, New South Wales, Australia. The levels of the components determined by gas chromatography mass spectrometry analysis and the range specified by the international standard7 (shown in brackets) were as follows: 40.3% (>30%) terpinen-4-ol, 19.7% (10–28%) g-terpinene, 8.6% (5–13%) a- terpinene, 3.2% (trace–15%) 1,8-cineole, 3.2% (1.5–5%) terpinolene, 3.1% (1.5–8%) a-terpineol, 2.4% (1–6%) a-pinene, 2.4% (0.2–12%) r-cymene, 1.6% (trace–7%) aromadendrene, 1.2% (trace–8%) d-cadinene, 1.0% (0.5–4%) limonene, 0.5% (trace–3%) globulol, 0.4% (trace–1.5%) viridiflorol and 0.1% (trace–3.5%) sabinene. Terpinen-4-ol (purity 100%) was provided by SNP Natural Products (Sydney, NSW, Australia). Cineole (purity 99%) and a-terpineol (purity 95%) were purchased from Sigma Chemical Company (St Louis, MO, USA). g-Terpinene (purity 97%) and r-cymene (purity 99%) were purchased from Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI, USA). Terpinen-4-ol and a-terpineol were selected on the basis of their known antimicrobial activity2 and the fact that they comprise $40% of TTO. Cineole was selected since it has some antimicrobial activity and its concentration in TTO has been manipulated partly in response to the misconception that it is a skin irritant.1,2 g-Terpinene and r-cymene were selected since they constitute up to 30% of TTO.
The susceptibility of Pseudomonas isolates to TTO, terpinen-4-ol, g-terpinene, cineole, a-terpineol and r-cymene was determined using a broth microdilution method based on CLSI guidelines.8 Mueller– Hinton broth (MHB; Oxoid) was supplemented with 0.002% (v/v) Tween 80 (Sigma) (MHB-T) to enhance dispersion of the TTO or components. A stock of TTO or component at twice the desired final concentration was prepared in MHB-T and mixed vigorously by vortex. This was used to prepare serial doubling dilutions in a 96-well tray over the range 0.03–8% (v/v). Overnight broth cultures of organisms in MHB were adjusted in MHB-T so that the final concentration in each well following inoculation of the microtitre tray was $5.0 · 105 cfu/mL. Inocula concentrations were confirmed by viable counts; after serial 10-fold dilution of the inoculum in sterile distilled water, four 10 mL samples from the appropriate dilution were inoculated onto well-dried blood agar plates. After incubation at 37C for 18–24 h the number of cfu was counted and the concentration of the inocula calculated. After 18 h of incu- bation of trays at 37C, the MIC was the lowest concentration of TTO that resulted in a clear well. Ten microlitres from each well was spot-inoculated onto pre-dried nutrient agar (NA) and incubated overnight at 35C to determine the MBC. The MBC was defined as the concentration of TTO or component that killed 99.9% of the inoculum. Experiments were performed at least three times and the modal value selected.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

TTO (ชุด W/E504) ได้กรุณารับจากออสเตรเลียปลูก Pty Ltd, Wyrallah นิวเซาธ์เวลส์ ออสเตรเลีย ระดับของคอมโพเนนต์ถูกกำหนด โดยการวิเคราะห์สเปกโตรเมท chromatography ก๊าซและช่วงที่ระบุ โดย standard7 ต่างประเทศ (แสดงในวงเล็บ) มีดังนี้: 40.3% (> 30%) terpinen 4 ol, 19.7% (10-28%) g terpinene, 8.6% (5-13%) a-terpinene, 3.2% (ติดตาม – 15%) 18-cineole, 3.2% (1.5 – 5%) terpinolene, 3.1% (1.5 – 8%) ที่ terpineol, 2.4% (1-6%) เป็น pinene, 2.4% (0.2 – 12%) r cymene, aromadendrene 1.6% (ติดตาม – 7%) 1.2% (ติดตาม – 8%) d cadinene, 1.0% (0.5-4%) limonene, globulol 0.5% (ติดตาม – 3%) viridiflorol 0.4% (trace–1.5%) และ sabinene 0.1% (trace–3.5%) Terpinen-4-ol (ความบริสุทธิ์ 100%) ได้รับจากผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ SNP (ซิดนีย์ นิวเซาธ์เวลส์ ออสเตรเลีย) ซื้อจาก บริษัทเคมีซิก (St Louis, MO สหรัฐอเมริกา) (ความบริสุทธิ์ 95%) ที่ terpineol และ cineole (ความบริสุทธิ์ 99%) g-Terpinene (บริสุทธิ์ 97%) และ r-cymene (ความบริสุทธิ์ 99%) ซื้อจาก บริษัทเคมี Aldrich (มิลวอกี WI สหรัฐอเมริกา) Terpinen 4 ol และเป็น terpineol ได้เลือกตาม activity2 จุลินทรีย์รู้จักของพวกเขาและความจริงที่ว่า พวกเขาประกอบด้วย $40% ของ TTO Cineole ถูกเลือกเนื่องจากมีกิจกรรมจุลินทรีย์บางอย่าง และมีการจัดการที่ความเข้มข้นใน TTO บางส่วนในการเข้าใจผิดว่า เป็นผิว irritant.1,2 g-Terpinene และ r cymene ถูกเลือกเนื่องจากพวกเขาประกอบถึง 30% ของ TTO
ไก่ลีแยกไป TTO, terpinen 4 ol, g terpinene, cineole ต่อ terpineol และ r cymene ถูกกำหนดโดยใช้วิธี microdilution ซุปตาม CLSI guidelines.8 Mueller Hinton ซุป (MHB Oxoid) ถูกเสริม ด้วย 0.002% (v/v) Tween 80 (ซิกมา) (MHB-T) เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการกระจายตัวของ TTO หรือคอมโพเนนต์ หุ้นของ TTO หรือคอมโพเนนต์ที่สองที่ต้องสุดท้ายเข้มข้นเตรียมใน MHB T และผสมโยคะ โดย vortex นี้ถูกใช้เพื่อจัดเตรียม dilutions จะประจำในถาด 96 ดีช่วง 0.03-8% (v/v) วัฒนธรรมซุปค้างคืนของสิ่งมีชีวิตใน MHB ถูกปรับปรุงใน MHB T เพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้ายในแต่ละดีต่อ inoculation ถาด microtitre ถูก· $5.0 105 cfu/mL ความเข้มข้นของ inocula ถูกยืนยัน โดยตรวจนับได้ หลังจากประจำ 10-fold เจือจางของ inoculum ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ 10 mL ตัวอย่างที่ 4 จากการเจือจางที่เหมาะสมมี inoculated บนแผ่นแห้งดีเลือด agar หลังจากบ่มที่ 37 C สำหรับ h 18-24 มีนับจำนวน cfu และความเข้มข้นของ inocula ที่คำนวณ หลังจาก h 18 ของ incu-bation ถาดที่ 37 C MIC มีความเข้มข้นต่ำสุดของ TTO ที่ทำให้เกิดความชัดเจน Microlitres 10 จากบ่อแต่ละได้รับ inoculated ลงธาตุอาหารแห้งก่อน agar (NA) และ incubated ค้างคืนที่ 35 C กำหนดช่อง MBC ช่อง MBC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นของ TTO หรือคอมโพเนนต์ที่ 99.9% ของ inoculum ที่ฆ่า ทดลองได้ดำเนินการอย่างน้อย 3 ครั้ง และเลือกค่าโมดอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

TTO ( ชุด W / e504 ) ได้กรุณาให้ wyrallah ออสเตรเลีย Pty Ltd , สวนยางพารา , นิวเซาท์เวลส์ , ออสเตรเลีย ระดับขององค์ประกอบที่กำหนดโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟีแมสการวิเคราะห์และช่วงที่ระบุโดย standard7 นานาชาติ ( ที่แสดงในวงเล็บ ) ดังนี้ : 40.3 เปอร์เซ็นต์ ( 30% ) terpinen-4-ol ร้อยละ , ( 10 ( 28% ) g-terpinene 8.6 % ( 5 – 13 % ) - terpinene มี 3.2 % ( ร่องรอย ( 15 % ) 18-cineole ร้อยละ 3.2 ( 1.5 - 5 % ) เทอร์พิโนลีน , 3.1% ( 1.5 – 8 % ) a-terpineol 2.4 % ( 1 ) 6 % ) ไปนีน ( 0.2 2.4 % และ 12 % ) r-cymene 1.6 % ( ร่องรอย ( 7% ) aromadendrene 1.2 % ( ร่องรอย ( 8% ) d-cadinene 1.0 % ( 0.5 – 4% ) ไลโมนีน 0.5 % ( ร่องรอย ( 3% ) globulol 0.4 % ( ร่องรอย– 1.5% ) viridiflorol และ 0.1% ( ร่องรอย ( 3.5% ) ซาบินีน . terpinen-4-ol ( ความบริสุทธิ์ 100 % ) โดย SNP ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ ( ซิดนีย์ , NSW , ออสเตรเลีย )cineole ( ความบริสุทธิ์ 99% ) และ a-terpineol ( ความบริสุทธิ์ 95% ) ซื้อจาก บริษัท ซิกม่า เคมี ( เซนต์หลุยส์ โม สหรัฐอเมริกา ) g-terpinene ( ความบริสุทธิ์ 97 % ) และ r-cymene ( ความบริสุทธิ์ 99% ) ซื้อจาก บริษัท เคมีดิช ( Milwaukee , WI , USA ) และ terpinen-4-ol a-terpineol ถูกเลือกบนพื้นฐานของตนรู้จักยาต้านจุลชีพ activity2 และความจริงที่ว่าพวกเขามี $ 40 % ของ TTO .cineole ได้รับเลือกเพราะมันมีกิจกรรมการยับยั้งและความเข้มข้นของ TTO ได้รับการจัดการในการตอบสนองบางส่วนเข้าใจผิดว่ามันเป็นผิวระคายเคือง . 1 , 2 และ g-terpinene r-cymene คัดเลือกตั้งแต่พวกเขาเป็นถึง 30% ของ TTO .
ความไวของ Pseudomonas ไอโซเลทไปสักคน terpinen-4-ol g-terpinene cineole , , , ,a-terpineol r-cymene ตั้งใจและใช้น้ำซุป microdilution วิธีตามแนวทางต่าง 8 8 – ฮินตัน น้ำซุป ( mhb ; oxoid ) เสริมด้วย 0.002 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Tween 80 ( ซิกม่า ) ( mhb-t ) เพื่อเพิ่มการกระจายของ tto หรือส่วนประกอบ หุ้นของ TTO หรือส่วนประกอบในสองครั้งสุดท้ายที่ต้องการของที่เตรียมไว้ใน mhb-t ผสมอย่างแข็งขัน โดย . .นี้ถูกใช้เพื่อเตรียมอนุกรมเป็นเจือจางใน 96 ดีถาดมากกว่าช่วง 0.03 – 8 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) วัฒนธรรมของสิ่งมีชีวิตในน้ำข้ามคืน mhb ปรับข้อมูลใน mhb-t ดังนั้นที่ความเข้มข้นสุดท้ายในแต่ละดีต่อไปนี้ใส่ถาด microtitre $ 5.0 ด้วย 105 CFU / มล. inocula เท่ากับยืนยันได้นับ ;หลังจากการพับ 10 อนุกรมของเชื้อในการฆ่าเชื้อน้ำสี่ 10 มล ตัวอย่างจากการปลูกเชื้อลงบนที่แห้งดีเลือดวุ้นแผ่น หลังจากบ่มที่ 37  C 18 – 24 H จำนวนโคโลนีถูกนับและความเข้มข้นของ inocula คํานวณ หลังจาก 18 H ของ incu - bation ถาดที่ 37  Cไมค์ คือ ความเข้มข้นต่ำสุดของ TTO ที่ส่งผลให้ชัดเจนด้วย 10 microlitres จากแต่ละจุดบนดีเชื้อก่อน NUMB3RS แห้ง ( นา ) และบ่มค้างคืนที่ 35  C หา MBC MBC ถูกกำหนดเป็นความเข้มข้นของ TTO หรือคอมโพเนนต์ที่ฆ่า 99.9% ของเชื้อ . ทดลองอย่างน้อย 3 ครั้ง และการเลือกค่า .