Peroxide tolerant versatile peroxid

Peroxide tolerant versatile peroxidases are required for industrial applications. In this study, rational
protein engineering was performed to improve the oxidative stability of Pleurotus eryngii versatile
ligninolytic peroxidase. Residues which are easily oxidized such as methionine, and close
to H2O2-binding pocket and heme were identified for site-directed mutagenesis. Enzyme activity
and steady-state kinetics were affected to different extent by different mutations. They were
investigated for H2O2 stability, among which mutants A79L, P141A, M247L, M265L, M247L/M265L,
A77E/I81L, A77E/A79S/I81L, A77S/A79L/I81L, A77E/A79S/I81L/M265L, A77E/A79S/I81L/M247L/M265L,
and A77E/A79S/I81L/S168A showed significantly increased oxidative tolerance, proving that oxidizable
residues such as Met247 and Met265, residues close to heme like Pro141 and H2O2-binding
pocket such as Ala77, Ala79, and Ile81 exerted important impact on H2O2 stability. Double and triple
mutants demonstrated some additive or synergistic effects, which were only inactivated by higher concentration
H2O2, whereas multiple mutants A77E/A79S/I81L/M265L, A77E/A79S/I81L/M247L/M265L,
and A77E/A79S/I81L/S168A did not. Importantly, mutants I81L, S168A, Met265, M247L/M265L,
A77E/A79S/I81L, and A77E/A79S/I81L/M247L/M265L exhibited both improved catalytic efficiencies and
H2O2 resistance. The enhanced oxidative stability could result from delayed or suppressed compound III
formation and/or heme bleaching caused by replacement of some residues. The identified mutants with
higher oxidative tolerance and catalytic efficiencies would be helpful for further improving the oxidative
stability of versatile peroxidase.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เปอร์ออกไซด์ peroxidases อเนกประสงค์ป้องกันความผิดพลาดจำเป็นสำหรับงานอุตสาหกรรม ในการศึกษานี้ เชือดดำเนินการปรับปรุงเสถียรภาพ oxidative ของอเนกประสงค์ eryngii เห็ดนางวิศวกรรมโปรตีนligninolytic peroxidase ตกค้างซึ่งได้มีการออกซิไดซ์เช่น methionine และปิดการผูก H2O2 กระเป๋าและ heme มีระบุสำหรับ mutagenesis ไซต์โดยตรง เอนไซม์และจลนพลศาสตร์ท่อนได้รับผลกระทบในกรณีต่าง ๆ โดยการกลายพันธุ์แตกต่างกัน พวกเขาตรวจสอบสำหรับเสถียรภาพ H2O2 ระหว่างที่สายพันธุ์ A79L, P141A, M247L, M265L, M247L/M265LA77E/I81L, A77E/A79S/I81L, A77S/A79L/I81L, A77E/A79S/I81L/M265L, A77E/A79S/I81L/M247L/M265Lและ A77E/A79S/I81L/S168A แสดงให้เห็นมากขึ้นอย่างมากเผื่อ oxidative พิสูจน์ที่ oxidizableตกเช่น Met247 และ Met265 ตกใกล้กับ heme เช่น Pro141 และผูก H2O2กระเป๋าเช่น Ala77, Ala79 และ Ile81 นั่นเองผลกระทบสำคัญต่อเสถียรภาพ H2O2 รีวอร์ดสายพันธุ์แสดงการบวก หรือพลังลักษณะพิเศษบางชนิด ซึ่งถูกยกเลิก โดยความเข้มข้นสูงเท่านั้นH2O2 ในขณะที่สายพันธุ์หลาย A77E/A79S/I81L/M265L, A77E/A79S/I81L/M247L/M265Lและไม่มี A77E/A79S/I81L/S168A สำคัญ สายพันธุ์ I81L, S168A, Met265, M247L/M265LA77E/A79S/I81L และ A77E/A79S/I81L/M247L/M265L จัดแสดงประสิทธิภาพการตัวเร่งปฏิกิริยาทั้งสองดีขึ้น และต้านทาน H2O2 เสถียรภาพ oxidative เพิ่มขึ้นอาจทำจาก III ซับซ้อนล่าช้า หรือหยุดก่อหรือ heme ฟอกสีเกิดจากการแทนที่ของตกค้างบาง ระบุสายพันธุ์ด้วยยอมรับ oxidative สูงและประสิทธิภาพของตัวเร่งปฏิกิริยาจะเป็นประโยชน์สำหรับการเพิ่มเติม ปรับปรุงการ oxidativeความมั่นคงของ peroxidase เอนกประสงค์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เปอร์ออกไซด์ peroxidases อเนกประสงค์ใจกว้างจำเป็นสำหรับการประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรม ในการศึกษานี้มีเหตุผล
วิศวกรรมโปรตีนที่ได้ดำเนินการเพื่อปรับปรุงเสถียรภาพออกซิเดชันของเห็ดออรินจิอเนกประสงค์
peroxidase ligninolytic ตกค้างซึ่งถูกออกซิไดซ์ได้อย่างง่ายดายเช่น methionine และใกล้
กระเป๋า H2O2 ผูกพันและ heme ถูกระบุสำหรับฉับเว็บไซต์กำกับ กิจกรรมของเอนไซม์
และจลนศาสตร์รัฐคงได้รับผลกระทบที่มีขอบเขตที่แตกต่างกันจากการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกัน พวกเขาได้รับ
การตรวจสอบเพื่อความมั่นคง H2O2 หมู่ที่กลายพันธุ์ A79L, P141A, M247L, M265L, M247L / M265L,
A77E / I81L, A77E / A79S / I81L, A77S / A79L / I81L, A77E / A79S / I81L / M265L, A77E / A79S / I81L / M247L / M265L,
และ A77E / A79S / I81L / S168A แสดงให้เห็นเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญความอดทนออกซิเดชันพิสูจน์ว่าออกซิไดซ์
สารตกค้างเช่น Met247 และ Met265 ตกค้างใกล้กับ heme เช่น Pro141 และ H2O2 ผูก
กระเป๋าเช่น Ala77, Ala79 และ Ile81 ออกแรง ผลกระทบที่สำคัญต่อเสถียรภาพ H2O2 สองและสาม
สายพันธุ์ที่แสดงให้เห็นถึงสารเติมแต่งบางส่วนหรือการเสริมฤทธิ์ซึ่งถูกยกเลิกโดยเฉพาะความเข้มข้นสูง
H2O2 ในขณะที่หลาย ๆ คนกลายพันธุ์ A77E / A79S / I81L / M265L, A77E / A79S / I81L / M247L / M265L,
และ A77E / A79S / I81L / S168A ได้ ไม่ ที่สำคัญการกลายพันธุ์ I81L, S168A, Met265, M247L / M265L,
A77E / A79S / I81L และ A77E / A79S / I81L / M247L / M265L แสดงทั้งปรับปรุงประสิทธิภาพการเร่งปฏิกิริยาและ
ความต้านทาน H2O2 เสถียรภาพออกซิเดชันที่เพิ่มขึ้นอาจเป็นผลมาจากสารประกอบล่าช้าหรือระงับ III
การก่อตัวและ / หรือการฟอกสี heme ที่เกิดจากการเปลี่ยนสารตกค้างบาง การกลายพันธุ์ระบุด้วย
ความอดทนออกซิเดชันที่สูงขึ้นและมีประสิทธิภาพในการเร่งปฏิกิริยาจะเป็นประโยชน์ต่อการปรับปรุงออกซิเดชัน
เสถียรภาพของ peroxidase อเนกประสงค์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เปอร์ออกไซด์ใจกว้างอเนกประสงค์เพอร์ กซิเดสที่จําเป็นสําหรับอุตสาหกรรม ในการศึกษานี้ได้ทำการเชือด
โปรตีนวิศวกรรมเพื่อปรับปรุงเสถียรภาพต่อการเกิดออกซิเดชันของนางรมรินจิอเนกประสงค์
ค่าในประเทศไทย ตกค้าง ซึ่งจะสลายตัวได้ง่าย เช่น เมทไธโอนีน และใกล้ชิดกับกระเป๋าผูกและ H2O2
ฮีมถูกระบุสำหรับเว็บไซต์โดยการ . เอนไซม์
จลนศาสตร์และได้รับผลกระทบในขอบเขตที่แตกต่างกันคงที่โดยการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกัน พวกเขา
เพื่อความมั่นคง H2O2 ในที่กลายพันธุ์ a79l p141a m247l m265l , , , ,
a77e m265l m247l / , / i81l a77e / , / i81l a79s , a79l i81l a77s / / , / / / m265l a77e a79s i81l , a79s a77e / / i81l / m247l / m265l
a77e / a79s / , และ i81l / s168a พบเพิ่มขึ้นเกิดความอดทน พิสูจน์ว่า oxidizable
เช่น met247 ตกค้างและปิด met265 ของฮีมและชอบ pro141 H2O2 ผูกพัน
กระเป๋า เช่น ala77 ala79 , และผลกระทบต่อความมั่นคง ile81 นั่นเอง ที่สำคัญแบตเตอรี่ . สองและสาม
กลายพันธุ์ แสดง บาง เสริมหรือเพิ่มผล ซึ่งเป็นเพียงการศึกษา
H2O2 ความเข้มข้นสูง ในขณะที่หลายสายพันธุ์ a77e / a79s / i81l / m265l a77e / , a79s / i81l / m247l / m265l
,และ a77e / a79s / i81l / s168a ไม่ได้ ที่สำคัญ พวกกลายพันธุ์ i81l s168a met265 , , , m265l m247l / , /
a77e a79s / i81l และ a77e / a79s / i81l / m247l / m265l จัดแสดงทั้งปรับปรุงประสิทธิภาพในการเร่งปฏิกิริยาและ
H2O2 ต้านทาน เพิ่มออกซิเดชันเสถียรภาพผลจากการล่าช้า หรือการปราบปราม 3
ผสมและ / หรือท่านฟอกขาวเกิดจากการแทนที่ของบางส่วนที่ตกค้าง ระบุด้วย
กลายพันธุ์ความอดทนและการเกิดประสิทธิภาพสูงจะเป็นประโยชน์สำหรับการปรับปรุงเพิ่มเติมเสถียรภาพออกซิเดชัน
อเนกประสงค์ในประเทศไทย