2.2. Preparation of hemolymph sampl

2.2. Preparation of hemolymph samples and tissue extracts
Hemolymph was bled from the pericardial sinus with a
hypodermic syringe provided with an 18 gauge needle and
containing 1 mM PMSF. The hemolymph was allowed to clot
overnight at 4 -C. The serum collected by centrifugation at
2500
g for 20 min at 4 -C to remove residues and cells was
then stored at 20 -C.
Ovaries and the hepatopancreas from vitellogenic females or
testis from mature shrimps were freshly dissected out and
washed three times with 50 mM Tris–HCl, pH 7.5 containing
0.15 M NaCl and 1 mM PMSF (TBSP). The tissues were then
homogenized using a hand held homogenizer in the same
buffer. The homogenate was centrifuged at 2500
g for 30 min
at 4 -C and the supernatant was collected and subjected to
electrophoresis, double immunodiffusion, ELISA and Western
blotting. Protein was determined by the method of Markwell et
al. (1978) using BSA as the standard.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การเตรียมตัวอย่าง hemolymph และสารสกัดจากเนื้อเยื่อHemolymph ถูกคราวที่แล้วจากไซนัส pericardial ด้วยการเข็มฉีดยามี 18 การวัดเข็ม และประกอบด้วย PMSF 1 มม. Hemolymph ได้รับอนุญาตให้ clotค้างคืนที่ซี - 4 เซรั่มที่รวบรวม โดย centrifugation ที่g 2500 สำหรับ 20 นาทีที่ 4 - C เพื่อลบตกค้างและเซลล์ได้แล้ว เก็บไว้ที่ - 20 เซลเซียสรังไข่และ hepatopancreas จากหญิง vitellogenic หรือtestis จากผู้ใหญ่กุ้งก็สด dissected ออก และล้าง 3 ครั้ง ด้วยตรี – HCl, 50 มม.ที่ประกอบด้วยค่า pH 7.50.15 M NaCl และ 1 มม. PMSF (ช้อนโต๊ะ) เนื้อเยื่อได้แล้วhomogenized เป็นกลุ่มใช้ homogenizer ถือมือเดียวบัฟเฟอร์ Homogenate ถูก centrifuged ที่ 2500 g สำหรับ 30 นาทีที่ 4 - C และ supernatant ถูกรวบรวม และการelectrophoresis คู่ immunodiffusion, ELISA และตะวันตกblotting วิธีการ โปรตีนถูกกำหนด โดยวิธีการ Markwell ร้อยเอ็ดal. (1978) ใช้บีเอสเอเป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การเตรียมความพร้อมของตัวอย่างเลือดและเนื้อเยื่อสารสกัดจาก
เลือดถูกหลั่งเลือดจากไซนัส pericardial กับ
เข็มฉีดยาให้กับเข็มวัด 18 และ
มี 1 มิลลิ PMSF เลือดได้รับอนุญาตให้จับตัวเป็นลิ่ม
ค้างคืนที่ 4 -C ซีรั่มที่เก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงที่
2,500? กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 -C เพื่อเอาสารตกค้างและเซลล์ที่ถูก
เก็บไว้แล้วที่? 20 -C.
รังไข่และตับจากหญิง vitellogenic หรือ
อัณฑะจากกุ้งผู้ใหญ่ถูกชำแหละสดออกและ
ล้างสามครั้ง 50 มิลลิ Tris-HCl ค่า pH 7.5 ที่มี
โซเดียมคลอไรด์ 0.15 M และ 1 มิลลิ PMSF (TBSP) เนื้อเยื่อนั้นก็
หดหายใช้โฮโมจีไนมือถือในเดียวกัน
บัฟเฟอร์ homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 2,500? กรัมเป็นเวลา 30 นาที
ที่ 4 -C และใสถูกเก็บรวบรวมและยัดเยียดให้
electrophoresis, Immunodiffusion คู่ ELISA และตะวันตก
ซับ โปรตีนถูกกำหนดโดยวิธีการของ Markwell และ
อัล (1978) โดยใช้บีเอสเอเป็นมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การเตรียมตัวอย่างเลือด และเนื้อเยื่อ สารสกัดจากเลือด มีเลือดออกจากโพรงอากาศ

pericardial ด้วยเข็มฉีดยาให้กับ 18 เข็มวัดที่มี PMSF และ
1 มิลลิเมตร ที่สามารถได้รับอนุญาตให้อุดตัน
ค้างคืนที่ 4 - ซี เซรั่ม ที่รวบรวมโดยปั่น
2500
G สำหรับ 20 นาทีที่ 4 - C เพื่อลบตกค้างและเซลล์คือ
แล้วเก็บไว้ที่  20 - C .
รังไข่และตับ จากหญิง vitellogenic หรือ
อัณฑะจากผู้ใหญ่กุ้งสดผ่าออก
ซักครั้งที่สามกับ 50 มม. โดย– HCl , pH 7.5 ที่มี
0.15 M NaCl และ 1 mM PMSF ( ช้อนโต๊ะ ) เนื้อเยื่อแล้ว
โฮโมโฮโมจีไนใช้มือถือในบัฟเฟอร์เดียวกัน

โดยแยกเป็นระดับที่ 2500
g
30 นาทีที่ 4 - C และนำเก็บ และต้อง
อิเล็กคู่ immunodiffusion , ELISA และ Western blotting
. โปรตีนที่ถูกกำหนดโดยวิธีการของมาร์กเวล et
อัล ( 1978 ) ที่ใช้ BSA เป็นมาตรฐาน