after the causative mutation was fo

after the causative mutation was found in the proband,
her parents decided to have another child. Prenatal diagnosis
was successful in this family.
Materials and methods
Mutation analysis
Total RNA was isolated from white blood cells of the
index patient using QIAamp RNA blood mini kit
(Qiagen, Valencia, CA, USA). Reverse transcription
was performed using ImProm-II reverse transcriptase
(Promega, Madison, WI, USA). PCR amplification of
the entire coding region of the BCKDHA, DBT, and
DLD genes was performed on the cDNA using
primers specific for each gene (Table 1). PCR products
were directly sequenced.
Genomic DNA was obtained from venous (whole)
blood of the index patient, the parents, and the
newborn. For prenatal diagnosis, genomic DNA was
extracted from chorionic villi (obtained in the 11th
week of gestation) and cultured amniocytes (obtained
by amniocentesis in the 16th week of gestation).
For mutation analysis by PCR-RFLP, exon 5 of the
BCKDHA gene was amplified using primers Ex5-F
and Ex5-R (Table 1), then treated with Sau96I (New
England Biolabs, Beverly, MA, USA). DNA extraction
and restriction enzyme digestion were performed
according to the manufacturer_s recommendations.
Results
Mutation analysis of the BCKDHA gene was first
performed in the index patient and revealed a novel
homozygous nonsense mutation, c.529C>T (p.Q177X).
Both parents were found to be carriers of the
mutation. Prenatal testing of fetal materials by RFLP
analysis revealed that the fetus was heterozygous for
the mutation (Fig. 1). The mother decided to continue
her pregnancy, which resulted in a birth of a healthy male

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลังจากผ่าสาเหตุการพบใน probandพ่อแม่ของเธอตัดสินใจที่จะมีลูกอีก ทารกในครรภ์ประสบความสำเร็จในครอบครัวนี้วัสดุและวิธีการการวิเคราะห์การกลายพันธุ์รวม RNA ถูกแยกจากเซลล์เม็ดเลือดขาวของตัวผู้ป่วยดัชนีที่ใช้ QIAamp RNA เลือดชุดมินิ(Qiagen วาเลนเซีย CA, USA) ถอดเทปย้อนหลังดำเนินการโดยใช้ ImProm II ปเท(Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) ปลักของรหัสภูมิภาคของ BCKDHA ฝากเงิน และทำปศุสัตว์ยีนการใช้ cDNAไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับแต่ละยีน (ตาราง 1) ผลิตภัณฑ์ PCRได้โดยตรงที่เรียงลำดับการดีเอ็นเอมาจากหลอดเลือดดำ (ทั้งหมด)เลือดของผู้ป่วย ผู้ปกครอง ดัชนีและทารกแรกเกิด สำหรับการวินิจฉัยก่อนคลอด ดีเอ็นเอการถูกสกัดจากขน chorionic (ได้รับใน 11thสัปดาห์ของการตั้งครรภ์) และอ่าง (รับ amniocytesโดยคร่ำในสัปดาห์ 16 ของการตั้งครรภ์)สำหรับการวิเคราะห์การกลายพันธุ์โดย PCR-RFLP, exon ที่ 5 ของการBCKDHA ยีนถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ Ex5-Fและ R Ex5 (ตาราง 1), รักษา ด้วย Sau96I (ใหม่แล้วอังกฤษ Biolabs เบเวอร์ลี่ MA สหรัฐอเมริกา) สกัดดีเอ็นเอและดำเนินการย่อยเอนไซม์จำกัดตามคำแนะนำ manufacturer_sผลลัพธ์วิเคราะห์การกลายพันธุ์ของยีน BCKDHA เป็นครั้งแรกดำเนินการในผู้ป่วยดัชนี และเผยนวนิยายกลายพันธุ์เรื่องไร้สาระหลัก c.529C > T (p.Q177X)พบว่าทั้งพ่อและแม่เป็นผู้ให้บริการของการกลายพันธุ์ การทดสอบก่อนคลอดทารกวัสดุโดย RFLPวิเคราะห์เปิดเผยว่า ทารกในครรภ์เป็น heterozygous สำหรับกลายพันธุ์ (รูปที่ 1) แม่ตัดสินใจที่จะดำเนินการต่อไปตั้งครรภ์ของเธอ ซึ่งผลในการเกิดของชายที่มีสุขภาพดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากที่กลายพันธุ์เป็นสาเหตุที่พบใน proband ที่
พ่อแม่ของเธอตัดสินใจที่จะมีลูกอีกคน การวินิจฉัยก่อนคลอด
ก็ประสบความสำเร็จในครอบครัวนี้.
วัสดุและวิธี
การกลายพันธุ์วิเคราะห์
รวม RNA แยกได้จากเซลล์เม็ดเลือดขาวของ
ผู้ป่วยโดยใช้ดัชนี QIAamp มินิเลือดอาร์เอ็นเอ Kit
(Qiagen, วาเลนเซีย, CA, USA) ย้อนกลับถอดความ
ได้รับการดำเนินการโดยใช้ ImProm-II เอนไซม์
(Promega, Madison, WI, USA) ขยาย PCR ของ
ภูมิภาคเข้ารหัสทั้งหมดของ BCKDHA, DBT และ
ยีน DLD ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับยีนโดยใช้
ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับแต่ละยีน (ตารางที่ 1) ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์
มีลำดับขั้นตอนโดยตรง.
DNA ของยีนที่ได้รับจากหลอดเลือดดำ (ทั้งหมด)
ในเลือดของผู้ป่วยดัชนีพ่อแม่และ
ทารกแรกเกิด สำหรับการวินิจฉัยก่อนคลอดดีเอ็นเอถูก
สกัดจาก villi chorionic (ที่ได้รับในวันที่ 11
สัปดาห์ของการตั้งครรภ์) และ amniocytes เลี้ยง (ที่ได้รับ
จากการเจาะตรวจน้ำคร่ำในสัปดาห์ที่ 16 ของการตั้งครรภ์).
สำหรับการวิเคราะห์การกลายพันธุ์โดยวิธี PCR-RFLP, เอกซ์ซอนที่ 5 ของ
ยีน BCKDHA เป็น ขยายโดยใช้ไพรเมอร์ EX5-F
และ EX5-R (ตารางที่ 1) ได้รับการรักษาแล้วด้วย Sau96I (New
อังกฤษ Biolabs, Beverly, MA, USA) สกัดดีเอ็นเอ
และข้อ จำกัด ของเอนไซม์ย่อยอาหารได้ดำเนินการ
ตามคำแนะนำ manufacturer_s.
ผลการ
วิเคราะห์การกลายพันธุ์ของยีน BCKDHA เป็นครั้งแรกที่
ดำเนินการในผู้ป่วยดัชนีและเปิดเผยนวนิยาย
กลายพันธุ์เรื่องไร้สาระ homozygous, c.529C> T (p.Q177X).
ทั้งพ่อและแม่ พบว่าเป็นพาหะของ
การกลายพันธุ์ การทดสอบก่อนคลอดของวัสดุของทารกในครรภ์โดย RFLP
วิเคราะห์พบว่าทารกในครรภ์เป็น heterozygous สำหรับ
การกลายพันธุ์ (รูปที่ 1). แม่ตัดสินใจที่จะดำเนิน
การตั้งครรภ์ของเธอซึ่งมีผลในการเกิดของชายที่มีสุขภาพดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจากการกลายพันธุ์ที่เป็นสาเหตุที่พบใน proband ,พ่อแม่ของเธอตัดสินใจที่จะมีบุตรอีก การวินิจฉัยก่อนคลอดประสบความสำเร็จในครอบครัววัสดุและวิธีการการวิเคราะห์การกลายพันธุ์อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่แยกได้จากเซลล์เม็ดเลือดขาวของดัชนี qiaamp เลือดผู้ป่วยใช้ RNA ชุดมินิ( เพิ่ม , Valencia , CA , USA ) ตรงกันข้ามการถอดความการใช้ improm 2 สิ่งที่ตรงกันข้าม( promega เมดิสัน , WI , USA ) การเพิ่มปริมาณของดีเอ็นเอทั้งรหัสภูมิภาคของ bckdha DBT และ ,กรมปศุสัตว์ยีนคือใช้วิธีใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะของแต่ละยีน ( ตารางที่ 1 ) ผลิตภัณฑ์ PCRอยู่ตรงนี้ดีเอ็นเอได้จากหลอดเลือดดำ ( ทั้งหมด )เลือดของดัชนีผู้ป่วย ผู้ปกครอง และเด็กแรกเกิด สำหรับการวินิจฉัยก่อนคลอด , ดีเอ็นเอคือสกัดจากไร้อารยธรรม ( ที่ได้รับในวันที่ ๑๑สัปดาห์ของการตั้งครรภ์ ) และเลี้ยง amniocytes ( ได้รับโดยการเจาะน้ำคร่ำในสัปดาห์ที่ 16 ของการตั้งครรภ์ )การวิเคราะห์มิวเตชั่นโดยว่า , exon 5 ของbckdha ยีนฮีโม ex5-f ใช้ไพรเมอร์และ ex5-r ( ตารางที่ 1 ) แล้วได้รับการรักษาด้วย sau96i ( ใหม่อังกฤษ biolabs , Beverly , MA , USA ) การสกัดดีเอ็นเอเอนไซม์ย่อยอาหารมีการปฏิบัติและตามไป manufacturer_s แนะนําผลลัพธ์การวิเคราะห์การกลายพันธุ์ของยีนเป็นครั้งแรก bckdhaดำเนินการในผู้ป่วยที่พบใหม่และดัชนีส่วนเรื่องการกลายพันธุ์ , c.529c > T ( p.q177x )ทั้งพ่อแม่ พบว่าเป็นพาหะของการกลายพันธุ์ การทดสอบก่อนคลอดของทารก โดยรวมวัสดุการวิเคราะห์พบว่าทารกในครรภ์เป็น homozygous สำหรับการกลายพันธุ์ ( รูปที่ 1 ) แม่ตัดสินใจต่อไปการตั้งครรภ์ของเธอ ซึ่งส่งผลให้ในวันเกิดของสุขภาพเพศชาย