2.6. Measurement of enzyme activity

2.6. Measurement of enzyme activity
In each treatment, 10 g flesh from 10 fruit was collected and
homogenized in 25 mL of ice-cold extraction buffer and 0.5 g
polyvinyl polypyrrolidone (PVPP) with a Kinematica tissue grinder
(Crl-6010, Kriens-LU, Switzerland). For CAT and SOD assays, the
extraction buffer was 50 mM sodium phosphate (pH 7.8). For
POD, 100 mM sodium phosphate buffer (pH 6.4) was used. The
homogenate was centrifuged at 27,000
×g for 50 min at 4 ◦C and
the resulting supernatants were used directly for assay.
Determination of CAT and SOD activities was performed by the
method of Wang et al. (2005).
For CAT, the reaction mixture consisted of 2.8 mL H2O2 (40 mM,
in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.0) and 0.2 mL enzyme
extract. The decomposition of H2O2 was measured by the decline
in absorbance at 240 nm during 120 s. The specific activity was
expressed as U g−1, where one unit of catalase converts l mol of
H2O2 per mass of fresh fruit pulp per min at 30 ◦C.
For SOD, the reaction mixture (3 mL) contained 65 mM sodium
phosphate buffer (pH 7.8), 13 mM methionine, 75 M nitroblue
tetrazolium (NBT), 10 M EDTA, 2 M riboflavin and 0.1 mL
of the enzyme extract. The mixtures were illuminated by light
(60 mol m−2 s−1) for 10 min and the absorbance was then determined
at 560 nm. Identical solutions held in the dark served as
blank. SOD activity was expressed as U g−1, where one unit was
defined as the amount of enzyme that caused a 50% decrease of the
SOD inhibitable NBT reduction per mass of fruit pulp per hour.
POD activity was measured at 30 ◦C and determined by monitoring
the increase rate of absorbance at 398 and 460 nm, according to
the methodology described by Tian et al. (2005). POD activity was
expressed as U g−1, where one unit was expressed as the increase
rate of absorbency per mass of fruit pulp per min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. การวัดกิจกรรมของเอนไซม์ในแต่ละทรีทเม้นต์ เนื้อ 10 กรัมจาก 10 ผลไม้รวบรวม และhomogenized ในบัฟเฟอร์สกัดฉ่ำ 25 mL และ 0.5 กรัมpolypyrrolidone (PVPP) โพลีไวนิล ด้วยเครื่องบดเนื้อเยื่อ Kinematica(Crl-6010 นี้ LU สวิตเซอร์แลนด์) สำหรับแมวและ SOD assays การบัฟเฟอร์ที่สกัดมี 50 มม.โซเดียมฟอสเฟต (pH 7.8) สำหรับใช้ POD, 100 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.4) การhomogenate เป็นผลิตภัณฑ์ที่ 27,000กรัม× 50 นาทีที่ 4 ◦C และsupernatants ได้ถูกใช้โดยตรงสำหรับทดสอบการกำหนดกิจกรรมแมวและสดดำเนินการโดยการวิธีการของวัง et al. (2005)สำหรับแมว ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 2.8 mL H2O2 (40 mMใน 50 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0) และเอนไซม์ 0.2 mLสารสกัดจาก การสลายตัวของ H2O2 โดยวัดจากการลดลงในค่าที่ 240 nm ในช่วง 120 s แก้ไขกิจกรรมแสดงเป็น g−1 U ที่หนึ่งหน่วยคาแปลง l โมลของH2O2 ต่อมวลของกากผลไม้สดต่อนาทีที่ 30 ◦Cสำหรับสด ส่วนผสมของปฏิกิริยา (3 mL) 65 mM โซเดียมที่มีอยู่ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8), เมไทโอนีน 13 มม. 75 M nitrobluetetrazolium (NBT), 10 M EDTA, M riboflavin 2 และ 0.1 มล.ของสารสกัดเอนไซม์ ส่วนผสมถูกส่องสว่าง ด้วยแสง(60 โมล m−2 s−1) สำหรับ 10 นาทีและค่าที่แล้วกำหนดที่ 560 nm จัดขึ้นในมืดเป็นโซลูชั่นเหมือนกันว่างเปล่า กิจกรรมสดถูกแสดงเป็น U g−1 ซึ่งเป็นหนึ่งหน่วยกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ลดลง 50% ทำให้เกิดการลด NBT inhibitable สดต่อมวลของกากผลไม้ต่อชั่วโมงกิจกรรม POD วัดที่ 30 ◦C และถูกกำหนด โดยการตรวจสอบอัตราการเพิ่มขึ้นของค่าที่ 398 และ 460 nm ตามวิธีการอธิบายโดยเทียน et al. (2005) แก้ไขกิจกรรม PODแสดงเป็น g−1 U ที่หนึ่งหน่วยได้แสดงออกเป็นการเพิ่มอัตราการดูดซับต่อมวลของกากผลไม้ต่อนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การวัดการทำงานของเอนไซม์
ในการรักษาแต่ละ 10 กรัมเนื้อจาก 10 ผลไม้ที่ถูกเก็บรวบรวมและ
ปั่นใน 25 มลเย็นบัฟเฟอร์สกัดและ 0.5 กรัม
โพลีไวนิล polypyrrolidone (PVPP) ด้วยเครื่องบดเนื้อเยื่อ Kinematica
(Crl-6010, Kriens-LU วิตเซอร์แลนด์ ) แมวและ SOD ตรวจที่
กันชนสกัด 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟต (pH 7.8) สำหรับ
POD, 100 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.4) ถูกนำมาใช้
homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 27,000
×กรัมสำหรับ 50 นาทีที่ 4 ◦Cและ
supernatants เกิดถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบโดยตรง.
กําหนดของแมวและ SOD กิจกรรมที่ได้ดำเนินการโดย
วิธีการของวัง et al, (2005).
แมว, ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 2.8 มล H2O2 (40 มิลลิเมตร,
50 มิลลิบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตค่า pH 7.0) และ 0.2 มิลลิลิตรเอนไซม์
สารสกัดจาก การสลายตัวของ H2O2 โดยวัดจากการลดลง
ในการดูดกลืนแสงที่ 240 นาโนเมตรในช่วง 120 วินาที กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงได้รับการ
แสดงเป็น U G-1 ซึ่งเป็นหนึ่งหน่วยของ catalase แปลง L mol ของ
H2O2 ต่อมวลของเนื้อผลไม้สดต่อนาทีที่ 30 ◦C.
สำหรับ SOD ปฏิกิริยาผสม (3 มิลลิลิตร) มี 65 มิลลิโซเดียม
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8) 13 มิลลิเมตร methionine, 75? M nitroblue
tetrazolium (NBT), 10? M EDTA, 2? M riboflavin และ 0.1 มิลลิลิตร
ของสารสกัดจากเอนไซม์ ผสมส่องด้วยแสง
(60 mol M-2 S-1) เป็นเวลา 10 นาทีและการดูดกลืนแสงที่ถูกกำหนดแล้ว
ที่ 560 นาโนเมตร การแก้ปัญหาเหมือนกันจัดขึ้นในที่มืดทำหน้าที่เป็น
ที่ว่างเปล่า กิจกรรม SOD ถูกแสดงเป็น U G-1 ที่หน่วยหนึ่งถูก
กำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ก่อให้เกิดการลดลง 50% ของ
SOD inhibitable ลด NBT ต่อมวลของเยื่อไม้ต่อชั่วโมง.
กิจกรรม POD วัดวันที่ 30 ◦Cและความมุ่งมั่น โดยการตรวจสอบ
อัตราการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่ 398 นาโนเมตรและ 460 ตาม
วิธีการที่อธิบายโดย Tian et al, (2005) กิจกรรม POD ถูก
แสดงเป็น U G-1 ซึ่งเป็นหนึ่งหน่วยงานที่แสดงออกถึงการเพิ่มขึ้นของ
อัตราการดูดซับต่อมวลของเยื่อไม้ต่อนาที