In the present study MAMAs were des

In the present study MAMAs were designed and tested to detect the nt367 and nt629 SNPs
in the obg gene of M. synoviae. The genome locations, primer sequences, annealing and melting
temperatures for these assays can be found in Tables 1 and 2. Melt-MAMA PCR reactions
were performed in 10 μl total volume, containing 1μl target DNA diluted in 2 μl 5X Color-less
GoTaq Flexi Buffer (Promega Inc., Madison, WI), 1 μl MgCl2 (25mM), 0.3 μl dNTP (10 mM,
Qiagen Inc., Valencia, CA), 0.5 μl EvaGreen (Biotium Inc., Hayward, CA), primers (10 pmol/
μl) according to Table 1 and 0.08 μl GoTaq DNA polymerase (5 U/μl; Promega). MeltMAMAs were performed on an Applied Biosystems Step-One Plus real-time PCR system with
StepOne Softwarev2.2.2. Thermocycling parameters were 95°C for 10 min, followed by 39
cycles of 95°C for 15 sec and 58°C for 1 min. Endpoint PCR products were subjected to melt
analysis using a dissociation protocol comprising 95°C for 15 sec, followed by incremental temperature ramping (0.2°C) from 58°C to 95°C. EvaGreen fluorescent intensity was measured at
525 nm at each ramp interval and plotted against temperature.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษา มาม๊าถูกออกแบบ และทดสอบเพื่อตรวจหา SNPs nt367 และ nt629ในยีน obg ของ M. synoviae สถานที่ตั้งกลุ่ม ลำดับรองพื้น การหลอม และการละลายอุณหภูมิสำหรับ assays เหล่านี้สามารถพบได้ในตารางที่ 1 และ 2 ปฏิกิริยา PCR มาม่าละลายดำเนินการใน 10 μl ปริมาตรรวม 1μl ดีเอ็นเอเป้าหมายที่เจือจางใน μl 2 5 X น้อยกว่าสีที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ Flexi GoTaq (Promega Inc. เมดิสัน WI), 1 μl MgCl2 (25mM), 0.3 μl dNTP (10 mMQiagen Inc. วาเลนเซีย CA), 0.5 μl EvaGreen (Biotium Inc. เฮย์เวิร์ด CA), ไพรเมอร์ (10 pmol /Μl) ตามตารางที่ 1 และ 0.08 μl GoTaq ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (5 U μl Promega) MeltMAMAs ดำเนินการประยุกต์ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพขั้นหนึ่งบวกแบบเรียลไทม์ PCR ระบบด้วยStepOne Softwarev2.2.2 เทอร์โม゚พารามิเตอร์ได้ 95° C 10 นาที ตาม ด้วย 39รอบ 95° c สำหรับ 15 วินาที และ 58° C สำหรับผลิตภัณฑ์ปลายทาง PCR 1 นาทีถูกละลายวิเคราะห์โดยใช้โพรโทคอ dissociation ประกอบ 95° C เป็นเวลา 15 วินาที ตาม ด้วยการเพิ่มอุณหภูมิกระโจน (0.2° C) จาก 58° C ถึง 95 องศาเซลเซียส หลอดฟลูออเรสเซนต์ความเข้มซึ่งวัดได้ที่ EvaGreen525 nm ที่แต่ละช่วงทางลาด และพล็อตเทียบกับอุณหภูมิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใน
ยีน สถานที่จีโนมลำดับไพรเมอร์หลอมละลายและ
อุณหภูมิสำหรับการตรวจเหล่านี้สามารถพบได้ในตารางที่
ได้ดำเนินการใน μ ปริมาณรวม μ L μ L 5X - น้อย
GoTaq Flexi μ L MgCl2 (25mm) 0.3 μ L dNTP (10
Qiagen μ L EvaGreen (Biotium
μ L) μ L GoTaq DNA Polymerase (5 U / μ l; Promega) MeltMAMAs - วันพลัสจริง- เวลาของระบบ
StepOne Softwarev2.2.2 พารามิเตอร์
รอบจาก ผลิตภัณฑ์
การวิเคราะห์โดยใช้โปรโตคอลแยกออกจากกันประกอบด้วย EvaGreen
525