1. Introduction
. Microorganisms
E. coli K12 strain (SSI, Copenhagen, Denmark) and S. Typhimurium P6 ( Klingberg et al., 2005) were used in the study. Stock cultures were stored at −80 °C with nutrient broth (Oxoid, Hampshire, UK) and 20% (v/v) glycerol. For the experiments, bacteria were maintained on nutrient agar (Oxoid, Hampshire, UK) plates incubated overnight at 30 °C, stored at 4 °C and used within a week. In preparation for attachment assays, 20 ml of LB broth in 50 ml conical flasks with metal capping were inoculated with single colonies of the microorganisms and incubated 24 ± 2 h at 30 °C in a water bath with shaking at 120 rpm (GFL 1083, GFL GmbH, Burgwedel, Germany) to reach stationary phase. Following incubation, cells were harvested at 3900 × g for 10 min (Hettich universal 30RF, Hettich Zentrifugen, Tuttlingen, Germany) and were washed twice, by re-suspension in PBS [phosphate buffered saline; 8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na2HPO4, and 0.27 g KH2PO4 per litre (all from Merck, Darmstadt, Germany); adjusted to pH 7.2 with HCl/NaOH], vortexing (IKA® M2, IKA, Germany) for 30 s and then centrifuging at 3900 × g for 10 min. Cells were re-suspended to an optical density of approximately 2.0 at 600 nm (Shimadzu UV-1800, Shimadzu, Japan) in PBS. Colony forming units were determined for both E. coli K12 and S. Typhimurium P6 by serial dilution and spread plate counts to be 7.53 ± 1.31 × 109 CFU/ml for E. coli K12 and 2.3 ± 0.47 × 109 CFU/ml for S. Typhimurium respectively (combined average with standard deviation for all trials).
1. แนะนำ
จุลินทรีย์
ต้องใช้ E. coli K12 (SSI โคเปนเฮเกน เดนมาร์ก) และ S. Typhimurium P6 (Klingberg et al., 2005) ที่ใช้ในการศึกษา วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C กับธาตุอาหารซุป (Oxoid แฮมเชียร์ UK) และกลีเซอร 20% (v/v) สำหรับการทดลอง แบคทีเรียที่อยู่ในแผ่นธาตุอาหาร agar (Oxoid แฮมเชียร์ UK) incubated ค้างคืนที่ 30 ° C เก็บที่ 4 ° C และใช้ภายในสัปดาห์ เตรียมพร้อมสำหรับการแนบ assays, 20 ml ของปอนด์ซุปในน้ำทรงกรวย 50 ml ด้วยโลหะ capping ได้ inoculated กับอาณานิคมเดียวที่จุลินทรีย์ และ incubated ± 24 h 2 ที่ 30 ° C ในอ่างน้ำ ด้วยการสั่นที่ 120 rpm (1083 GFL, GFL GmbH, Burgwedel เยอรมนี) ถึงระยะเครื่องเขียน ต่อไปนี้คณะทันตแพทยศาสตร์ เซลล์เก็บเกี่ยวที่ g ซื้อ 3900 สำหรับ 10 นาที (Hettich สากล 30RF, Hettich Zentrifugen, Tuttlingen เยอรมนี) และถูกล้างสองครั้ง โดยระบบกันสะเทือนใหม่ใน PBS [น้ำเกลือฟอสเฟต buffered; 8 g NaCl, 0.2 กรัม KCl, Na2HPO4 1.44 กรัม และ g 0.27 KH2PO4 ต่อลิตร (ทั้งหมดจากเมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี), ปรับค่า pH 7.2 ด้วย HCl/NaOH], vortexing (IKA ® M2, IKA เยอรมนี) s 30 และ centrifuging แล้วที่ 3900 ซื้อ g สำหรับ 10 นาที เซลล์ถูกเลื่อนออกไปอีกจะมีความหนาแน่นออปติคัลของ 2.0 ประมาณที่ 600 nm (Shimadzu UV-1800, Shimadzu ญี่ปุ่น) ใน PBS หน่วยโคโลนีขึ้นรูปถูกกำหนดสำหรับ E. coli K12 และ S. Typhimurium P6 โดยเจือจางประจำ และเผยแพร่แผ่นนับเป็น 7.53 ± 1.31 × 109 CFU/ml สำหรับ E. coli K12 และ 2.3 ± 0.47 × 109 CFU/ml สำหรับ s Typhimurium ตามลำดับ (รวมค่าเฉลี่ยกับส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานในการทดลองทั้งหมด)
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)
1 บทนำ
. จุลินทรีย์
อี สายพันธุ์ coli K12 (SSI, โคเปนเฮเกน, เดนมาร์ก) และ S. Typhimurium P6 (Klingberg et al., 2005) ได้ถูกนำมาใช้ในการศึกษา วัฒนธรรมหุ้นถูกเก็บไว้ที่ -80 ° C ที่มีน้ำซุปสารอาหาร (Oxoid นิวแฮมป์เชียร์สหราชอาณาจักร) และ 20% (v / v) กลีเซอรอล สำหรับการทดลองเชื้อแบคทีเรียได้รับการเก็บรักษาไว้บนอาหารวุ้น (Oxoid นิวแฮมป์เชียร์สหราชอาณาจักร) แผ่นบ่มค้างคืนที่ 30 ° C เก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสและใช้ภายในหนึ่งสัปดาห์ ในการเตรียมการสำหรับการตรวจสิ่งที่แนบมา, 20 มิลลิลิตรของน้ำซุป LB ในขนาด 50 ml ขวดรูปกรวยโลหะ capping ถูกเชื้อที่มีโคโลนีเดี่ยวของเชื้อจุลินทรีย์และบ่ม 24 ± 2 ชั่วโมงที่ 30 ° C ในอ่างน้ำที่มีการสั่นที่ 120 รอบต่อนาที (GFL 1083, GFL GmbH, Burgwedel, เยอรมนี) ที่จะไปถึงขั้นตอนการเขียน ต่อไปนี้การบ่มเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวที่ 3900 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที (Hettich สากล 30RF, Hettich Zentrifugen, Tuttlingen, เยอรมนี) และได้รับการล้างครั้งที่สองโดยการระงับในพีบีเอส [ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ; 8 กรัมโซเดียมคลอไรด์, 0.2 กรัมโพแทสเซียมคลอไรด์, 1.44 กรัม Na2HPO4 และ 0.27 กรัมต่อลิตร KH2PO4 (ทั้งหมดจากเมอร์, Darmstadt, เยอรมนี); ปรับค่า pH 7.2 ที่มี HCl / NaOH] vortexing (IKA® M2, IKA, เยอรมนี) เป็นเวลา 30 วินาทีจากนั้นปั่นแยกที่ 3900 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที เซลล์เป็นอีกครั้งที่จะระงับความหนาแน่นของแสงประมาณ 2.0 ที่ 600 นาโนเมตร (Shimadzu UV-1800, Shimadzu, ญี่ปุ่น) ในพีบีเอส อาณานิคมการสร้างหน่วยได้รับการพิจารณาสำหรับทั้ง E. coli K12 และ S. Typhimurium P6 โดยอนุกรมการเจือจางและการแพร่กระจายแผ่นนับเป็น 7.53 ± 1.31 × 109 CFU / ml สำหรับเชื้อ E. coli K12 และ 2.3 ± 0.47 × 109 CFU / ml สำหรับเอส typhimurium ตามลำดับ (ค่าเฉลี่ยรวมกับค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสำหรับการทดลองทั้งหมด)
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)
1 . แนะนำ
จุลินทรีย์
E . coli K12 สายพันธุ์ ( SSI , โคเปนเฮเกน , เดนมาร์ก ) และ S . typhimurium P6 ( klingberg et al . , 2005 ) สถิติที่ใช้ในการศึกษา หุ้นวัฒนธรรมที่อุณหภูมิ 80 องศา C −ธาตุอาหารกับน้ำซุป ( oxoid Hampshire , UK ) และ 20 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กลีเซอรอล . สำหรับการทดลอง แบคทีเรียถูกรักษา NUMB3RS ( oxoid Hampshire , UK ) แผ่นบ่มค้างคืนที่ 30 ° Cเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C และใช้ภายในสัปดาห์ ในการเตรียมการสำหรับสิ่งที่แนบมา ) 20 มิลลิลิตรของน้ำซุปใน 50 ml ขวดกรวยปอนด์ด้วยโลหะ•ปลูกเชื้อด้วยเดียวโคโลนีของจุลินทรีย์ และ บ่ม 24 ± 2 H 30 ° C ในอ่างน้ำกับสั่นที่ 120 รอบต่อนาที ( GFL 1104 GFL GmbH , burgwedel , เยอรมนี ) ถึงเฟสอยู่กับที่ ตามระยะเวลาเซลล์เก็บ 3 , 900 กรัม× 10 นาที ( Hettich สากล 30rf Hettich zentrifugen Tuttlingen , เยอรมนี , , ) และล้าง 2 ครั้ง โดยจะระงับใน PBS [ ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( ; 8 g NaCl KCl 0.2 กรัม na2hpo4 1.44 กรัมและ 0.27 กรัมต่อลิตร ( kh2po4 ทั้งหมดจากเมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) ; ค่า pH 7.2 กับ NaOH HCl / ] , vortexing ( Ika Ika ® M2 ,เยอรมนี ) สำหรับ 30 วินาทีและจากนั้นสาร 3 , 900 กรัม× 10 นาทีเซลล์ก็จะระงับการซิกแซ็กประมาณ 2.0 ที่ 600 nm ( Shimadzu uv-1800 Shimadzu , ญี่ปุ่น ) ใน PBS หน่วยสร้างอาณานิคมได้รับการพิจารณาทั้ง E . coli K12 และ S . typhimurium P6 โดยอุทิศถวายและการแพร่กระจายแผ่น นับเป็น 7.53 ± 1.31 × 109 CFU / ml E . coli K12 และ 2.3 ± 0.47 × 109 CFU / ml .สารตามลำดับ ( รวม ค่าเฉลี่ยส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน สำหรับการทดลอง )
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)