DNA cloning and protein engineering

DNA cloning and protein engineering are basic methodologies employed for various applications in all life-science disciplines. Manipulations of DNA however, could be a lengthy process that slows down subsequent experiments. To facilitate both DNA cloning and protein engineering, we present Transfer-PCR (TPCR), a novel approach that integrates in a single tube, PCR amplification of the target DNA from an origin vector and its subsequent integration into the destination vector. TPCR can be applied for incorporation of DNA fragments into any desired position within a circular plasmid without the need for purification of the intermediate PCR product and without the use of any commercial kit. Using several examples, we demonstrate the applicability of the TPCR platform for both DNA cloning and for multiple-site targeted mutagenesis. In both cases, we show that the TPCR reaction is most efficient within a narrow range of primer concentrations. In mutagenesis, TPCR is primarily advantageous for generation of combinatorial libraries of targeted mutants but could be also applied to generation of variants with specific multiple mutations throughout the target gene. Adaptation of the TPCR platform should facilitate, simplify and significantly reduce time and costs for diverse protein structure and functional studies.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โคลน dna และวิศวกรรมโปรตีนเป็นวิธีการพื้นฐานที่ใช้สำหรับการใช้งานที่แตกต่างกันในทุกสาขาวิชาวิทยาศาสตร์ชีวิต กิจวัตรของ dna แต่อาจจะเป็นกระบวนการที่ยาวที่ช้าลงภายหลังการทดลอง เพื่ออำนวยความสะดวกทั้งการโคลน dna และวิศวกรรมโปรตีนเรานำเสนอการถ่ายโอน-PCR (tpcr) แนวทางใหม่ที่รวมในหลอดเดียวขยาย pcr ของดีเอ็นเอเป้าหมายจากเวกเตอร์ที่มาและบูรณาการต่อมาเป็นเวกเตอร์ปลายทาง tpcr สามารถนำมาใช้สำหรับการรวมตัวกันของชิ้นส่วนดีเอ็นเอในตำแหน่งที่ต้องการได้ภายในพลาสมิดวงกลมโดยไม่ต้องใช้การทำให้บริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ pcr กลางและโดยไม่ต้องใช้ชุดการค้าใด ๆ โดยใช้ตัวอย่างหลายเราแสดงให้เห็นถึงการบังคับใช้ของแพลตฟอร์ม tpcr ทั้งโคลน dna และหลายสถานที่ที่กำหนดเป้​​าหมายฉับ ในทั้งสองกรณีเราแสดงให้เห็นว่าปฏิกิริยา tpcr มีประสิทธิภาพมากที่สุดในช่วงที่แคบของความเข้มข้นของไพรเมอร์ ในฉับ,tpcr เป็นหลักประโยชน์สำหรับรุ่นของห้องสมุด combinatorial ของการกลายพันธุ์ที่กำหนดเป้​​าหมาย แต่ไม่สามารถนำมาใช้เพื่อสร้างสายพันธุ์ที่มีการกลายพันธุ์หลายเฉพาะทั่วยีนเป้าหมาย การปรับตัวของแพลตฟอร์ม tpcr ควรอำนวยความสะดวกง่ายและลดเวลาและค่าใช้จ่ายสำหรับโครงสร้างโปรตีนที่มีความหลากหลายและการศึกษาการทำงาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การโคลนดีเอ็นเอและโปรตีนวิศวกรรมเป็นวิธีพื้นฐานที่ทำงานสำหรับโปรแกรมประยุกต์ต่าง ๆ ในสาขาวิทยาศาสตร์สุขภาพทั้งหมด Manipulations ภาพเอ็นอย่างไรก็ตาม อาจจะใช้เวลานานที่ทำงานช้าลงภายหลังการทดลอง เพื่ออำนวยความสะดวกทั้งการโคลนดีเอ็นเอและโปรตีนวิศวกรรม เสนอโอนย้าย PCR (TPCR), วิธีนวนิยายที่รวมในหลอดเดียว ขยาย PCR ดีเอ็นเอเป้าหมายจากเวกเตอร์ยังจุดเริ่มต้นและการบูรณาการภายหลังเข้าสู่ปลายทางเวกเตอร์ TPCR สามารถใช้สำหรับจดทะเบียนของชิ้นส่วนดีเอ็นเอในตำแหน่งใด ๆ ต้องภายใน plasmid วงกลมโดย ไม่ต้องฟอกผลิตภัณฑ์ PCR กลาง และ ไม่ใช้ชุดเชิงพาณิชย์ใด ๆ ใช้หลายอย่าง เราแสดงให้เห็นถึงความเกี่ยวข้องของของแพลตฟอร์ม TPCR สำหรับการโคลนดีเอ็นเอทั้งสอง และ mutagenesis เป้าหมายหลายไซต์ ในทั้งสองกรณี เราแสดงว่าปฏิกิริยา TPCR มีประสิทธิภาพสูงสุดภายในช่วงแคบของความเข้มข้นของสีรองพื้น ใน mutagenesis TPCR เป็นข้อได้เปรียบหลักสำหรับการสร้างปัญหาไลบรารีของสายพันธุ์เป้าหมาย แต่อาจจะยังใช้กับรุ่นย่อยกับเฉพาะกลายพันธุ์หลายตลอดทั้งยีนเป้าหมาย ปรับตัวของแพลตฟอร์ม TPCR ควรอำนวยความสะดวก ง่าย และลดเวลาและค่าใช้จ่ายสำหรับโครงสร้างโปรตีนที่หลากหลายและทำการศึกษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทางด้านวิศวกรรมอาหารโปรตีนและการลอกแบบดีเอ็นเอเป็นแนวเรียบง่ายใช้สำหรับแอพพลิเคชั่นที่หลากหลายในสาขาวิชาวิทยาศาสตร์แห่งชีวิตทั้งหมด ต้นเหตุของดีเอ็นเอแต่ถึงอย่างไรก็ตามไม่มีกระบวนการความยาวที่ว่ามันจะทำให้ลงการทดลองใน ภายหลัง การลอกแบบดีเอ็นเอเพื่ออำนวยความสะดวกและการใช้งานด้านวิศวกรรมโปรตีนทั้งสองเรามีบริการรับส่ง - pcr ( tpcr )วิธีการใหม่ที่รวมอยู่ในท่อดูดฝุ่นแบบเดี่ยวใช้การขยายเสียง pcr ของดีเอ็นเอเป้าหมายนี้ได้จากปัจจัยที่มาที่ไปของมันและการผนวกรวมเข้าไปใน Initialization Vector ปลายทาง tpcr สามารถนำไปใช้สำหรับบริษัทของเศษดีเอ็นเอในตำแหน่งที่ต้องการที่อยู่ ภายใน plasmid แบบกลมโดยไม่จำเป็นต้องทำน้ำบริสุทธิ์ของ ผลิตภัณฑ์ pcr ระดับกลางและไม่มีการใช้ชุดทางการค้าใดๆ การใช้ตัวอย่างหลายแห่งเราจะแสดงให้เห็นถึงการใช้บังคับได้ของแพลตฟอร์ม tpcr สำหรับผลผลิตเป้าหมายทั้งการลอกแบบดีเอ็นเอและสำหรับหลายไซต์ ในทั้งสองกรณีเราแสดงให้เห็นว่าปฏิกิริยา tpcr จะมี ประสิทธิภาพ มากที่สุดอยู่ในช่วงแคบๆของความเข้มข้นเชื้อปะทุ ในผลผลิตtpcr มีประโยชน์เป็นหลักสำหรับรุ่นของไลบรารี combinatorial ของข้าวเจ้าเป้าหมายแต่ก็ยังนำไปใช้ในการสร้างความแตกต่างด้วยเข้าไปเปลี่ยนแปลงรหัสหลายรุ่นตลอดทั่วทั้งพื้นที่เป้าหมายยีนที่ การปรับตัวของแพลตฟอร์ม tpcr ควรจะช่วยอำนวยความสะดวกและง่ายดายยิ่งขึ้นอย่างมีนัยสำคัญช่วยลดเวลาและค่าใช้จ่ายในการปรับโครงสร้างโปรตีนที่หลากหลายและการศึกษาเน้นประโยชน์ใช้สอย