2.4. Carbonyl contentProtein carbon

2.4. Carbonyl content
Protein carbonyls were assayed as hydrazone derivatives by reacting proteins with 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) as
described by Levine, Williams, Stadman, and Shacter (1994). A 0.1 g portion of minced breast meat was dispersed in 1 ml of
0.04 M phosphate buffer (pH 6.8) with a Polytron homogeniser (T25 ULTRA TURRAX-IKA, Germany). A 0.1 ml sample was reacted
with 1 ml of 10 mM DNPH in 2 N HCl for 1 h at room temperature. Another 0.1 ml sample was mixed with 1 ml of 2 N HCl, and was
used as a control. Proteins were precipitated with 1 ml of 20%TCA and washed three times with 1.0 ml of an ethano1/ethyl acetate
mixture (1:l). The ethano1/ethyl acetate extract was virtually colourless by the third wash, indicating complete removal of
unreacted DNPH. The pellet was dried and dissolved in 2 ml of 6 M guanidine dissolved in 20 mM potassium phosphate (pH
2.3). The protein concentration was determined using a Bio-Rad Protein Assay Kit (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) based
on the Bradford method. The difference in absorbance at 370 nm between HC1-treated samples and DNPH-treated samples was
taken as a measure of reacted carbonyl groups using a molar extinction coefficient of 2.2 _ 104 M_1 cm_1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 เนื้อหา carbonylโปรตีน carbonyls ถูก assayed เป็นอนุพันธ์ของ hydrazone โดยโปรตีนปฏิกิริยากับ 2, 4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) เป็นอธิบาย โดย Levine วิลเลียมส์ Stadman และ Shacter (1994) ส่วน 0.1 กรัมของเนื้อเต้านมที่บดได้กระจายใน 1 มิลลิลิตรของ0.04 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) กับ homogeniser Polytron (T25 ULTRA สควิด TURRAX เยอรมนี) ตอบสนองของตัวอย่าง 0.1 มล.กับ 1 มล. 10 มม. DNPH ใน 2 N HCl สำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง อีก 0.1 มล.อย่างถูกผสมกับ 2 N HCl 1 มล. และก็ใช้เป็นตัวควบคุม มีการตกตะกอนโปรตีน ด้วย 1 มล. 20% TCA และล้างสามเท่ากับ 1.0 มิลลิลิตรมี ethano1/เอทิล อะซิเตทส่วนผสม (1:l) สารสกัด ethano1/เอทิล อะซิเตทเป็นแทบสีใส โดยการซักสาม ระบุเอาออกเสร็จสมบูรณ์unreacted DNPH เม็ดที่แห้ง และละลายใน 2 ml ของ 6 เมตร guanidine ละลายใน 20 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟต (ค่า pH2.3) กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนใช้ Bio Rad โปรตีนทดสอบชุด (เชื้อ เฮอร์คิวลิส CA, USA) ตามวิธีแบรดฟอร์ด ความแตกต่างของ absorbance ที่ 370 nm HC1 รักษาตัวอย่างและตัวอย่าง DNPH ที่ได้รับคือนำมาเป็นตัวชี้วัดของกลุ่ม carbonyl ปฏิกิริยาโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียโมเลกุลของ cm_1 M_1 2.2 _ 104

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 เนื้อหานิล
สำเนาโปรตีน assayed เป็นอนุพันธ์ hydrazone โดยปฏิกิริยากับโปรตีน 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) ตามที่
อธิบายโดย Levine, วิลเลียมส์ Stadman และ Shacter (1994) ส่วน 0.1 กรัมของเนื้อเต้านมสับกำลังระบาดใน 1 มิลลิลิตร
0.04 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) มี homogeniser Polytron (T25-ULTRA TURRAX IKA, เยอรมนี) 0.1 มล. ตัวอย่างมีปฏิกิริยาตอบสนอง
กับ 1 มล. 10 มิลลิเมตร DNPH 2 N HCl เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง อีก 0.1 มล. ตัวอย่างผสมกับ 1 มล. 2 N HCl และถูก
นำมาใช้เป็นตัวควบคุม โปรตีนตกตะกอน 1 มล. 20% TCA และล้างสามครั้งด้วย 1.0 มล. ของ ethano1 / น้ำนม
ผสม (1: L) สารสกัดจากอะซิเตท ethano1 / เอทิลแทบไม่มีสีโดยการล้างที่สามแสดงให้เห็นการกำจัดที่สมบูรณ์ของ
DNPH unreacted เม็ดแห้งและละลายใน 2 มิลลิลิตร 6 เมตร guanidine ละลายใน 20 มิลลิเมตรโพแทสเซียมฟอสเฟต (pH
2.3) ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้ Bio-Rad ชุดโปรตีน Assay (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ, Hercules, CA, USA) ตาม
อยู่กับวิธีการ Bradford ความแตกต่างในการดูดกลืนแสงที่ 370 นาโนเมตรระหว่างตัวอย่าง HC1 ได้รับการรักษาและตัวอย่าง DNPH รับการรักษาที่ถูก
นำมาเป็นตัวชี้วัดของกลุ่มคาร์บอนิลปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสียฟันกราม 2.2 _ 104 M_1 cm_1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 Carbonyl content。羰基化合物测定）是由hydrazone derivatives反应蛋白与As（DNPH），4-dinitrophenylhydrazine 2 As通过Stadman described，威廉姆斯，和莱文，Shacter 0.1 g（）。A 1994分散部分的肉是minced乳腺1 mlof磷酸盐缓冲液（pH 6.8 0.04 M）与一个超Polytron homogeniser（T25 TURRAX-IKA，德国）是0.1 ml sample A反应。与DNPH在1毫升的10毫米2 N HCl，在另一个房间温度1小时。0.1 ml sample of 2是1毫升混合与HCl，和N是作为一种控制用1毫升。precipitated外膜蛋白是与三倍的20%TCA和洗一个ethano1 / ml与1乙酯醋酸混合（1 : l）/乙酸乙酯提取物。ethano1）是由virtually colourless洗，第三组indicating removalofunreacted DNPH），和溶解的颗粒。是在M的2 ml溶解在6 guanidine 20 mM磷酸钾（pH值2.3）蛋白浓度使用。a）是determined BIO RAD实验室法）包（BIO RAD实验室实验室，大力士，CA，USA）基于方法：在布拉德福德在absorbance差异。在370海里之间是DNPH-treated HC1-treated样本和样本作为一taken程序使用一组的反应系数carbonyl molar extinction 2.2 _ 104 M_1 cm_1）。