The electrophoresed gel was blotted

The electrophoresed gel was blotted onto a
nitrocellulose membrane (pore size, 0.1 mm) inblotting buffer (3.03 g Tris base, 14.4 g glycine,
and 200 ml methanol per liter) at 100 V for 1 h.
The membrane was then rinsed in PBS (pH 7.4),
soaked in 5% skim milk (in PBS) for 1 h, and
rinsed in PBS for 5 min. The membrane was
treated with 1:1000 dilution of the the primary
antibody (either a polyclonal hyperimmune anti-
YHV IgG or anti-CBV IgG) for 1 h, rinsed 3
with PBS for 5 min, and then treated with 1:2500
dilution of the secondary antibody (goat anti-rabbit
IgG-horseradish peroxidase conjugate
(Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc.,
Gaithersburg, MD)) for 1 h. The membrane was
again rinsed 3 with PBS for 5 min and then
treated with the substrate (3,3%,5,5%-tetramethylbenzidine
or TMB (Kirkegaard and Perry Laboratories))
until the bluish purple color developed.
The reaction was stopped by soaking the membrane
in distilled water. All of the incubations
were done at room temperature (r.t., 25°C) unless
specified otherwise.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เจ electrophoresed ถูก blotted ไป
nitrocellulose เมมเบรน (ขนาดรูขุมขน 0.1 mm) inblotting บัฟเฟอร์ (ฐานทริสเรทติ้ง 3.03 g, 14.4 g glycine,
และเมทานอล 200 ml ต่อลิตร) ที่ 100 V สำหรับ 1 h.
เมมเบรนมีแล้ว rinsed ใน PBS (pH 7.4),
นำไปแช่ในนม skim 5% (ใน PBS) สำหรับ 1 h และ
rinsed ใน PBS ใน 5 นาที เมมเบรนจะถูก
รับ 1:1000 เจือจางของตัวหลัก
แอนติบอดี (ทั้งแบบ polyclonal hyperimmune ป้องกัน-
IgG ในกุ้งหรือ IgG ต่อต้าน CBV) สำหรับ 1 h, rinsed 3
ด้วย PBS ใน 5 นาที และรับ 1:2500 แล้ว
เจือจางของแอนติบอดีรอง (แพะป้องกันกระต่าย
IgG horseradish peroxidase ค่าสังยุค
(Kirkegaard และปฏิบัติ Perry, Inc.,
Gaithersburg, MD)) สำหรับ 1 h เมมเบรนจะถูก
rinsed 3 กับ PBS ใน 5 นาทีอีก แล้ว
รับกับพื้นผิว (3,3%, 55% tetramethylbenzidine
หรือทหารไทย (Kirkegaard และปฏิบัติ Perry))
จนสีม่วงระยับพัฒนา.
หยุดปฏิกิริยา โดยการแช่ในเมมเบรน
ในกลั่นน้ำ ทั้งหมดที่ incubations
ทำที่อุณหภูมิห้อง (r.t., 25° C) ยกเว้น
ระบุเป็นอย่างอื่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เจล electrophoresed ถูกเปื้อนลงบน
เมมเบรน nitrocellulose (ขนาดรูขุมขน, 0.1 มม. ) inblotting บัฟเฟอร์ (3.03 กรัมฐาน Tris 14.4 กรัม glycine,
และ 200 มล. เมทานอลต่อลิตร) ที่ 100 V เป็นเวลา 1 ชั่วโมง
เมมเบรนได้รับการล้างแล้วในพีบีเอส ( pH 7.4),
แช่ในนมพร่องมันเนย 5% (ในพีบีเอส) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ
ล้างในพีบีเอสเป็นเวลา 5 นาที เมมเบรนได้รับการ
รักษาด้วยการลดสัดส่วนของ 1:1000 หลัก
แอนติบอดี (ทั้งภูมิต้านทานโพลีป้องกัน
YHV IgG หรือป้องกัน CBV IgG) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงล้าง 3?
ด้วยพีบีเอสเป็นเวลา 5 นาทีและจากนั้นได้รับการรักษาด้วย 1:2500
เจือจาง แอนติบอดีรอง (แพะป้องกันกระต่าย
IgG-มะรุม peroxidase ผัน
(Kirkegaard และเพอร์รี่ Laboratories, Inc,
เฮิร์นดอน)) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เมมเบรนได้รับการ
ล้างอีกครั้ง 3? ด้วยพีบีเอสเป็นเวลา 5 นาทีและจากนั้น
ได้รับการรักษาด้วยสารตั้งต้น (3,3% 5,5% tetramethylbenzidine
หรือทหารไทย (Kirkegaard และห้องปฏิบัติการเพอร์รี่))
จนถึงสีม่วงสีน้ำเงินพัฒนา
ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการแช่เมมเบรน
ในน้ำกลั่น . ทุก incubations
ได้ทำที่อุณหภูมิห้อง (RT, 25 ° C) เว้นแต่
ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ electrophoresed เจลก็เปื้อนบน
ไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ( ขนาดรูพรุน 0.1 มิลลิเมตร ) inblotting บัฟเฟอร์ ( 3.03 กรัมต่อฐาน 14.4 กรัม ไกลซีน และเมทานอล
200 มล. ต่อ 1 ลิตร ) ที่ 100 V 1 h .
เยื่อหุ้มแล้วล้างใน PBS ( pH 7.4 ) ,
แช่ 5% หางนม ( ใน PBS ) 1 H ,
ล้างใน PBS 5 นาที เยื่อแผ่น
ถือว่า 000 เจือจางของหลัก
แอนติบอดี ( ทั้งโพลีเอต่อต้าน -
ต่อ IgG หรือต่อต้าน CBV IgG ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ล้าง 3 
กับช่อง นาน 5 นาที แล้วได้รับการรักษาด้วย 1:2500
เจือจางของแอนติบอดี IgG anti รอง ( แพะกระต่าย
.
( peroxidase ) เคอร์คีการ์ดกับเพอร์รี่ห้องปฏิบัติการ , Inc . ,
Gaithersburg MD ) ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเมมเบรน
อีก 3  ล้างด้วย pbs เป็นเวลา 5 นาทีแล้ว
รักษาพื้นผิว ( 3 , 3 ) 55 - tetramethylbenzidine
หรือ TMB ( เคอร์คีการ์ด และ เพอร์รี ห้องปฏิบัติการ )
จนถึงสีน้ำเงินสีม่วงสีพัฒนา
ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการแช่เยื่อ
ในน้ำกลั่น ทั้งหมดของ incubations
ทำที่อุณหภูมิห้อง ( r.t . 25 °องศาเซลเซียส ) นอกจาก
ที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น