concentrations of (S)-flurbiprofen

concentrations of (S)-flurbiprofen from 2 to 300 μM were incubated with CYP2C9 (0.025 μM), CPR (0.05 or 0.1 μM for subsaturating or saturating conditions, respectively), and CYP3A4 (0, 0.025, or 0.05 μM). CYP2C9 was mixed with CYP3A4, allowed to equilibrate on ice for 5 min, after which CPR was added and the ternary mixture allowed to further equilibrate on ice for 5 min. The mixture next was reconstituted in dilauroylphosphatidylcholine (extruded through a 200-nm pore size membrane) and allowed to equilibrate for 5 min. Enzyme mixtures were then added to substrate and buffer and preincubated at 37°C for 5 min before initiation of the reaction. All the experiments were carried out in 50 mM potassium phosphate buffer, pH 7.4, at 37°C. After initiation of the reaction with NADPH (1 mM final concentration), the reactions were allowed to continue for 20 min and then terminated by the addition of 200 μl of 180 ng/ml 2-fluoro-4-biphenyl acetic acid (internal standard) in acetonitrile. To the quenched reaction was then added 40 μl of half-strength phosphoric acid to adjust the pH to ∼3.0. All the experiments were repeated three times on separate days. The amount of 4′-OH-flurbiprofen produced was used as a measure of CYP2C9 activity. Similar experiments were repeated with (S)-naproxen as a substrate (10–1800 μM naproxen concentration range). Likewise, the amount of desmethylnaproxen produced was also used as a measure of CYP2C9 activity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความเข้มข้นของ (S) -flurbiprofen จาก 2 ไป 300 μM ได้ incubated กับ CYP2C9 (0.025 μM), CPR (0.05 หรือ 0.1 μM subsaturating หรือ saturating เงื่อนไข ตามลำดับ), และ CYP3A4 (0, 0.025 หรือ 0.05 μM) CYP2C9 ถูกผสมกับ CYP3A4 อนุญาตการ equilibrate บนน้ำแข็ง 5 นาที หลังจากเข้ามาที่ CPR และผสมสามสามารถเพิ่มเติม equilibrate บนน้ำแข็ง 5 นาที ส่วนผสมต่อไป reconstituted ใน dilauroylphosphatidylcholine (extruded ผ่านการเมมเบรนขนาดรู 200 nm) และอนุญาตการ equilibrate ใน 5 นาทีเอนไซม์น้ำยาผสมแล้วเพิ่มพื้นผิวและบัฟเฟอร์ และ preincubated ที่ 37° C สำหรับ 5 นาทีก่อนเริ่มต้นของปฏิกิริยา ทดลองทั้งหมดได้ดำเนินการใน 50 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ค่า pH 7.4 ที่ 37 องศาเซลเซียส หลังจากเริ่มต้นของปฏิกิริยาด้วย NADPH (1 mM ความเข้มข้นสุดท้าย), ปฏิกิริยาที่ได้อนุญาตให้ต่อไปอีก 20 นาที และยกเลิกแล้ว โดยการเพิ่ม μl 200 ของ 180 ng/ml 2-fluoro-4-biphenyl กรดอะซิติก (ภายในมาตรฐาน) ใน acetonitrile ให้ปฏิกิริยา quenched แล้วเพิ่ม μl 40 ของกรดฟอสฟอริกครึ่งกำลังการปรับ pH ∼3.0 ทดลองทั้งหมดถูกทำซ้ำครั้งที่สามในวันที่แยกต่างหาก มีใช้จำนวน 4′-OH-flurbiprofen ผลิตเป็นการวัดกิจกรรม CYP2C9 การทดลองคล้ายถูกซ้ำกับ (S) -นาโปรเซนเป็นพื้นผิว (10 – 1800 μM นาโปรเซนเข้มข้นช่วง) ในทำนองเดียวกัน จำนวน desmethylnaproxen ที่ผลิตยังใช้การวัดกิจกรรม CYP2C9

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความเข้มข้นของ (S)-Flurbiprofen 2-300 ไมครอนบ่มด้วย CYP2C9 (0.025 ไมครอน) CPR (0.05 หรือ 0.1 ไมครอนเพื่อ subsaturating หรือเงื่อนไขตามลำดับดิบพอดี) และ CYP3A4 (0, 0.025 หรือ 0.05 ไมครอน) CYP2C9 ผสมกับ CYP3A4 ได้รับอนุญาตให้สมดุลบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากที่ซีพีได้รับการเพิ่มและการผสมที่ได้รับอนุญาตให้ประกอบสมดุลต่อไปบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาที ส่วนผสมต่อไปได้รับการสร้างขึ้นใน dilauroylphosphatidylcholine (อัดผ่าน 200 นาโนเมตรเมมเบรนขนาดรูขุมขน) และได้รับอนุญาตให้สมดุลเป็นเวลา 5 นาที ผสมเอนไซม์ถูกเพิ่มไปยังพื้นผิวและกันชนและ preinc​​ubated ที่ 37 ° C เป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะเริ่มต้นของการเกิดปฏิกิริยา การทดสอบทั้งหมดถูกดำเนินการใน 50 มิลลิบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟตค่า pH 7.4 ที่ 37 ° C. หลังจากที่เริ่มต้นของการทำปฏิกิริยากับ NADPH (1 มิลลิเข้มข้นสุดท้าย) ปฏิกิริยาได้รับอนุญาตให้ดำเนินการต่อไปเป็นเวลา 20 นาทีแล้วยกเลิกโดยการเพิ่มของ 200 ไมโครลิตรจาก 180 ng / ml 2 fluoro-4-biphenyl กรดอะซิติก (มาตรฐานภายใน) ใน acetonitrile ที่จะเกิดปฏิกิริยาดับถูกเพิ่มเข้ามาแล้ว 40 ไมโครลิตรของกรดฟอสฟครึ่งความแข็งแรงในการปรับค่าพีเอชที่จะ ~ 3.0 การทดสอบทั้งหมดถูกซ้ำสามครั้งในวันที่แยกจากกัน จำนวน 4'-OH-Flurbiprofen ผลิตถูกนำมาใช้เป็นตัวชี้วัดของกิจกรรม CYP2C9 การทดลองที่คล้ายกันซ้ำแล้วซ้ำอีกด้วย (S)-naproxen เป็นสารตั้งต้น (10-1800 ไมครอน naproxen ช่วงความเข้มข้น) ในทำนองเดียวกันจำนวนของ desmethylnaproxen ผลิตยังถูกนำมาใช้เป็นตัวชี้วัดของกิจกรรม CYP2C9

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเข้มข้นของ ( S ) - เฟอร์บิโพรเฟน จาก 2 เมตรจำนวน 300 μบ่มด้วย cyp2c9 ( 0.025 μ M ) CPR ( 0.05 หรือ 0.1 μ M สำหรับ subsaturating หรือเงื่อนไข saturating ตามลำดับ ) , สร้าง ( 0 , 0.025 , 0.05 μหรือ M ) cyp2c9 ผสมกับสร้างได้รับอนุญาตให้สมดุลกันบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาทีหลังจากที่ CPR เพิ่มส่วนผสมประกอบไปด้วย และอนุญาตให้เพิ่มเติมสมดุลกันบนน้ำแข็งสำหรับ 5 นาทีส่วนผสมต่อไปสามารถใน dilauroylphosphatidylcholine ( extruded ผ่าน 200 nm ขนาดรูแผ่น ) และอนุญาตให้สมดุลกัน 5 นาที เอนไซม์ผสมแล้วเพิ่มฐานรองและบัฟเฟอร์ และ preincubated 37 ° C เป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะเริ่มต้นของปฏิกิริยา การทดลองทั้งหมดพบว่าใน 50 มิลลิโมลาร์โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ พีเอช 7.4 ที่อุณหภูมิ 37 องศาหลังจากที่เริ่มต้นของการเกิดปฏิกิริยากับ nadph ( 1 มิลลิเมตรความเข้มข้นสุดท้าย ) , ปฏิกิริยาที่ได้รับอนุญาตต่อ 20 นาทีและจากนั้นยกเลิกโดยเพิ่ม 200 μ L 180 ng / ml 2-fluoro-4-biphenyl กรดน้ำส้ม ( มาตรฐานภายใน ) ในไน . กับดับปฏิกิริยาแล้วเพิ่ม 40 μลิตรครึ่งแรง กรดฟอสฟอริค เพื่อปรับ pH ∼ 3.0การทดลองทั้งหมด เป็นเวลา 3 ครั้ง แยกวัน จํานวน 4 นั้น - โอ้ เฟอร์บิโพรเฟนผลิตถูกใช้เป็นตัวชี้วัดกิจกรรม cyp2c9 . การทดลองคล้ายกันได้ซ้ำกับ ( S ) - บาเลนเซียเป็นสารตั้งต้น ( 10 – 1800 μ M ช่วงความเข้มข้น บาเลนเซีย ) อนึ่ง ปริมาณ desmethylnaproxen ผลิตก็ยังใช้เป็นวัดของกิจกรรม cyp2c9 .