Factor Xa generation on the surface

Factor Xa generation on the surface of HUVECs
HUVECs were preincubated with indicated concentrations of
curcumin or BDMC for 10 min. TNF-α (10 ng/ml for 6 h in
serum-free medium) stimulated confluent monolayers of
HUVECs in a 96-well culture plate were incubated with FVIIa
(10 nM) in buffer B for 5 min at 37°C in presence or absence
of anti-TF IgG (25 μg/ml). FX (175 nM) was then added to the
cells (final reaction mixture volume, 100 μl) and incubated for
15 min. The reaction was stopped by adding buffer A containing
10 mM EDTA and the amount of FXa generated in the reaction
period was measured by using a chromogenic substrate,
and the change in absorbance at 405 nm was monitored in a
microplate reader for 2 min. The initial rate of color development
was converted into FXa concentrations from a standard
curve prepared with known dilutions of purified human FXa.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รุ่น Xa ตัวบนพื้นผิวของ HUVECsHUVECs ที่ preincubated พร้อมระบุความเข้มข้นของเคอร์คูมิน หรือ BDMC ใน 10 นาทีด้วยกองทัพ TNF (10 ng/ml สำหรับ h 6 ในเซรั่มฟรีกลางถูกกระตุ้น monolayers confluent ของHUVECs 96-ดีวัฒนธรรมจานได้ incubated กับ FVIIa(10 nM) ในบัฟเฟอร์ B ใน 5 นาทีที่ 37° C ในหรือของรหัสป้องกัน IgG (25 μg/ml) เอฟเอ็กซ์ (175 nM) ถูกเพิ่มไปเซลล์ (ปฏิกิริยาขั้นสุดท้ายส่วนผสมเบา 100 μl และ incubated สำหรับ15 นาที หยุดปฏิกิริยา ด้วยการเพิ่มบัฟเฟอร์ A ประกอบด้วยEDTA 10 มม.และจำนวน FXa สร้างในปฏิกิริยารอบระยะเวลาที่วัด โดยใช้พื้นผิวแบบ chromogenicและการเปลี่ยนแปลง absorbance ที่ 405 nm ถูกตรวจสอบในการอ่าน microplate ใน 2 นาที อัตราเริ่มต้นของการพัฒนาสีแปลงความเข้มข้น FXa จากมาตรฐานเส้นโค้งพร้อม dilutions รู้จักของ FXa มนุษย์บริสุทธิ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รุ่น Xa ปัจจัยบนพื้นผิวของ HUVECs
HUVECs ถูก preincubated
ที่มีความเข้มข้นที่ระบุของขมิ้นชันหรือBDMC เป็นเวลา 10 นาที TNF-α (10 ng / ml เป็นเวลา 6
ชั่วโมงในกลางซีรั่มฟรี) กระตุ้น monolayers ไหลมารวมกันของ
HUVECs ในแผ่นวัฒนธรรม 96 หลุมถูกบ่มกับ FVIIa
(10 นาโนเมตร) ในบัฟเฟอร์ B เป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในการแสดงตนหรือ
กรณีที่ไม่มีของIgG ต่อต้าน TF (25 ไมโครกรัม / มล.) FX (175 นาโนเมตร)
ถูกบันทึกไปยังเซลล์(ปริมาตรผสมปฏิกิริยาสุดท้าย 100 ไมโครลิตร) และบ่มเป็นเวลา
15 นาที ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่มบัฟเฟอร์ที่มี
EDTA มิลลิ 10 และปริมาณของ FXA สร้างขึ้นในปฏิกิริยาระยะเวลาที่ได้รับการวัดโดยใช้พื้นผิว chromogenic, และการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตรได้รับการตรวจสอบในเครื่องอ่านmicroplate เป็นเวลา 2 นาที อัตราเริ่มต้นของการพัฒนาสีที่ถูกดัดแปลงเป็นความเข้มข้น FXA จากมาตรฐานโค้งปรุงด้วยเจือจางที่รู้จักกันของมนุษย์บริสุทธิ์FXA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปัจจัย Xa รุ่นบนพื้นผิวของกลุ่มคือกลุ่ม
preincubated กับพบความเข้มข้นของ
ขมิ้นชัน หรือ bdmc เป็นเวลา 10 นาทีα TNF - ( 10 ng / ml เป็นเวลา 6 ชั่วโมง
serum-free ขนาดกลาง ) กระตุ้นกระจู๋กระจี๋ monolayers ของ
กลุ่มในจาน 96 ดีวัฒนธรรมถูกแยก fviia
( 10 นาโนเมตร ) ในบัฟเฟอร์ B สำหรับ 5 นาทีที่ 37 ° C ในการแสดงตนหรือขาด
anti TF IgG ( 25 μ g / ml ) FX ( 175 nm ) จากนั้นเพิ่ม
เซลล์ ( สุดท้ายปฏิกิริยาผสมปริมาณ 100 μ L ) และบ่มเพื่อ
15 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่มบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย
10 mM EDTA และปริมาณของ fxa ที่เกิดในช่วงปฏิกิริยา
เป็นวัดโดยการใช้พื้นผิวการสนทนาผ่านข้อความโต้ตอบแบบทันที
, และการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 405 nm ถูกตรวจสอบในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย เป็นผู้อ่าน
2 นาทีอัตราเริ่มต้นของการพัฒนา สีถูกแปลงเป็น fxa ความเข้มข้นจากมาตรฐาน
โค้งเตรียมรู้จักวิธีการ fxa มนุษย์บริสุทธิ์