The samples (100 g by net) were tre

The samples (100 g by net) were treated with 1000 ml of a disaggregating solution containing 0.5 M NaCl, 50 mM EDTA, 0.2 M β-mercaptoethanol, and 0.1 M Tris–HCl (pH 8.0), as described by Matsumura (1973). After active stirring for 3 days at 4 °C, the collagen fibre bundles of the body wall were completely disaggregated into collagen fibrils, forming a highly viscous suspension. The suspension was filtered through cheesecloth, and the filtrate was centrifuged (7500g, 30 min). The disaggregated collagen fibrils were treated with 1000 ml of 0.1 M NaOH to remove non-collagenous substances as contaminants and to exclude the effects of endogenous proteinases on collagen fibrils. After gentle stirring for 3 days at 4 °C, the suspension was centrifuged (7500g, 30 min). The collagen fibril precipitate was washed with successive changes of distilled water and lyophilised. The NaOH-treated collagen fibrils were suspended in 500 ml of 0.5 M acetic acid and solubilised by limited digestion with porcine pepsin (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA) at 4 °C with gentle stirring. The digestion was performed for 2 days at a collagen: pepsin weight ratio of 100:1. After centrifugation (7500g, 1 h), the resulting viscous solution was adjusted to 0.8 M NaCl by adding 4.0 M NaCl to precipitate the solubilised collagen. The precipitate was collected by low-speed centrifugation, dissolved in 0.5 M acetic acid, and dialysed extensively against 0.02 M Na2HPO4 (pH 8.0) to inactivate the pepsin. After several changes of the 0.02 M Na2HPO4, the collagen fibrils were harvested by centrifugation. This solubilised collagen precipitate was finally dissolved in 0.5 M acetic acid, dialysed against 0.1 M acetic acid, and lyophilised. These collagen preparations were analysed by SDS–PAGE on 6% gels, and the proteins on the gels were stained with Coomassie Brilliant Blue R-250.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่าง (100 กรัม โดยสุทธิ) ได้รับการรักษา ด้วย 1000 ml ของโซลูชัน disaggregating ที่ประกอบด้วย 0.5 M NaCl, EDTA 50 มม. 0.2 M β-mercaptoethanol และ 0.1 M Tris–HCl (ค่า pH 8.0), อธิบายไว้โดย Matsumura (1973) หลังจากใช้งานกวนสำหรับ 3 วันที่ 4 ° C คอลลาเจนรวมกลุ่มเส้นใยของผนังร่างกายได้อย่างสมบูรณ์ disaggregated เป็นคอลลาเจน fibrils ระงับความหนืดสูงขึ้น การระงับถูกกรองผ่าน cheesecloth และสารกรองมี centrifuged (7500 กรัม 30 นาที) Fibrils disaggregated คอลลาเจนได้รับการรักษา ด้วย 1000 ml ของ 0.1 M NaOH เพื่อเอาสารไม่ collagenous เป็นสารปนเปื้อน และแยกผลของ endogenous proteinases บน fibrils คอลลาเจน หลังจากกวนเบา ๆ 3 วันที่ 4 ° C การระงับก็ centrifuged (7500 กรัม 30 นาที) Precipitate fibril คอลลาเจนถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่นต่อเนื่องเปลี่ยนแปลง และ lyophilised Fibrils NaOH ถือว่าคอลลาเจนได้ชั่วคราวในขนาด 500 มล.กรดอะซิติก 0.5 M และ solubilised โดยย่อยอาหารจำกัดกับช่วงเพพซิน (ซิกเคมี Co. เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) ที่ 4 ° C กับกวนเบา ๆ ทำการย่อยอาหาร 2 วันที่เป็นคอลลาเจน: เพพซินอัตราส่วนน้ำหนักของ 100:1 หลังจาก centrifugation (7500g, 1 h), โซลูชันข้นได้ถูกปรับปรุงไป 0.8 M NaCl โดยเพิ่ม 4.0 M NaCl กับ precipitate คอลลาเจน solubilised Precipitate ถูกรวบรวม โดย centrifugation ความเร็วต่ำ ละลายในกรดอะซิติก 0.5 M และ dialysed อย่างกว้างขวางกับ 0.02 M Na2HPO4 (pH 8.0) ยกเพพซินการ หลังจากการเปลี่ยนแปลงหลายอย่างของ 0.02 M Na2HPO4 fibrils คอลลาเจนถูกเก็บเกี่ยว โดย centrifugation Precipitate คอลลาเจนนี้ solubilised สุดท้ายละลายในกรดอะซิติก 0.5 M, dialysed กับกรดอะซิติก 0.1 M และ lyophilised เตรียมคอลลาเจนเหล่านี้ถูก analysed โดย SDS–PAGE บน 6% และโปรตีนบนมีสีด้วย Coomassie Brilliant Blue R-250

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่าง (100 กรัมโดยสุทธิ) ได้รับการรักษาด้วย 1000 มล. ของการแก้ปัญหาการแยกที่มี 0.5 M NaCl, 50 mM EDTA, 0.2 M β-Mercaptoethanol และ 0.1 M Tris-HCl (pH 8.0) ตามที่อธิบาย Matsumura (1973) . หลังจากตื่นเต้นที่ใช้งานเป็นเวลา 3 วันที่ 4 ° C, การรวมกลุ่มเส้นใยคอลลาเจนของผนังร่างกายถูก disaggregated เข้าซ่านคอลลาเจนรูประงับความหนืดสูง ระงับถูกกรองผ่านผ้าและการกรองที่ถูกหมุนเหวี่ยง (7500G, 30 นาที) คอลลาเจนซ่านแยกได้รับการรักษาด้วย 1000 มล. 0.1 M NaOH ที่จะเอาสารที่ไม่เป็น collagenous สารปนเปื้อนและที่จะไม่รวมผลกระทบของเอนไซม์ภายนอกในคอลลาเจนซ่าน หลังจากที่ตื่นเต้นอ่อนโยนเป็นเวลา 3 วันที่ 4 ° C, ช่วงล่างได้รับการหมุนเหวี่ยง (7500G, 30 นาที) ตะกอน fibril คอลลาเจนถูกล้างกับการเปลี่ยนแปลงต่อเนื่องของน้ำกลั่นและ lyophilised NaOH รับการรักษาคอ​​ลลาเจนซ่านถูกระงับใน 500 มล. 0.5 M กรดอะซิติกและ solubilised โดยการย่อยอาหารที่ จำกัด ด้วยหมูน้ำย่อย (Sigma เคมี จำกัด , เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่, สหรัฐอเมริกา) ที่ 4 ° C ที่มีความตื่นเต้นอ่อนโยน การย่อยอาหารได้ดำเนินการเป็นเวลา 2 วันที่คอลลาเจน: อัตราส่วนน้ำหนักน้ำย่อยของ 100:1 หลังจากการหมุนเหวี่ยง (7500G, 1 ชั่วโมง), การแก้ปัญหาความหนืดทำให้มีการปรับ 0.8 M โซเดียมคลอไรด์โดยการเพิ่ม 4.0 M NaCl การตกตะกอนคอลลาเจน solubilised ตะกอนที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงความเร็วต่ำละลายใน 0.5 M กรดอะซิติกและ dialysed อย่างกว้างขวางกับ 0.02 M Na2HPO4 (pH 8.0) ที่จะยับยั้งน้ำย่อย หลังจากหลายเปลี่ยนแปลง 0.02 M Na2HPO4, ซ่านคอลลาเจนถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง คอลลาเจนนี้ตะกอน solubilised ก็เลือนหายไปในที่สุด 0.5 M กรดอะซิติก dialysed กับ 0.1 กรดอะซิติก M และ lyophilised เตรียมคอลลาเจนเหล่านี้ถูกวิเคราะห์โดย SDS-PAGE ในเจล 6% และโปรตีนในเจลที่ถูกย้อมด้วยสีฟ้าสดใส Coomassie R-250

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่าง ( 100 กรัม โดยสุทธิ ) ได้รับการรักษาด้วย disaggregating 1000 มิลลิลิตรของสารละลายที่มีเกลือโซเดียมคลอไรด์ 0.5 M 50 mM EDTA , 0.2 M บีตา - mercaptoethanol และ 0.1 M HCl ( ทริส ) pH 8.0 ) ตามที่อธิบายไว้โดยมัตสึมุระ ( 1973 ) หลังจากงานกวน 3 วันที่ 4 ° C คอลลาเจนไฟเบอร์ การรวมกลุ่มของผนังลำตัวถูก disaggregated เป็นใยคอลลาเจนรูปช่วงล่างหนืดสูง .ระงับถูกกรองผ่านผ้าและกรองได้ระดับ ( 7500g 30 นาที ) การรักษาด้วย disaggregated ใยคอลลาเจน 1000 ml 0.1 M NaOH ลบไม่ collagenous สารเป็นสารปนเปื้อนและการรวมผลของโครงสร้าง proteinases บนใยคอลลาเจน . หลังจากอ่อนโยนกวน 3 วันที่ 4 ° C , ระงับได้ระดับ ( 7500g 30 นาที )คอลลาเจนไฟบริลที่ถูกล้างด้วยน้ำกลั่น และการต่อเนื่องของ lyophilised . ที่ใช้ทำใยคอลลาเจนถูกระงับใน 500 มิลลิลิตรของกรด solubilised 0.5 m และโดยการย่อยด้วยเอนไซม์เปปซิน ( ซิกม่า จำกัด จาก บริษัท เคมี St . Louis , MO , USA ) ที่ 4 ° C อ่อนโยนปลุกเร้า การย่อยอาหารถูกจัดขึ้น 2 วันในคอลลาเจน : อัตราส่วนน้ำหนักเปปซินของสามารถหลังการปั่นเหวี่ยง ( 7500g 1 H ) ส่งผลให้โซลูชั่นที่ปรับหนืด 0.8 M NaCl โดยเพิ่ม 4.0 M NaCl จะผลัก solubilised คอลลาเจน ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยความเร็วสูงปั่นละลายในกรด 0.5 เมตร และ dialysed อย่างกว้างขวางกับ 0.02 M na2hpo4 ( pH 8.0 ) ยับยั้งเอนไซม์เปปซิน หลังจากการเปลี่ยนแปลงของหลาย na2hpo4 0.02 ม. ,คอลลาเจนไฟบริลถูกเก็บเกี่ยวโดยการปั่นเหวี่ยง นี้ solubilised คอลลาเจนและสุดท้ายละลาย 0.5 M กรดอะซิติก dialysed กับ 0.1 M กรดอะซิติก และ lyophilised . การเตรียมคอลลาเจนเหล่านี้วิเคราะห์โดย SDS –หน้าบน 6 % เจล , และโปรตีนในเจลถูกย้อมด้วยสีเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส