2.3. Column and thin layer chromato

2.3. Column and thin layer chromatography
The dialysed material was once again centrifuged
and then purified by ion-exchange chromatography
on DEAE-cellulose. Elution was carried
out with phosphate buffer (pH 7.0) using a linear
concentration gradient of 0.02–0.35 M. The measurementsof extinction in the eluent were taken in
the range of 300–800 nm using a Model 203
‘Spectrimom’ spectrophotometer.
Carotenoids were liberated from carotenoproteins
with acetone according to the procedure of
Shone et al. (1979). Using thin-layer chromatography,
the prosthetic group of carotenoproteins, the
ketocarotenoids were identified. The extracted
carotenoid alone was analysed or admixed with a
ketocarotenoid (canthaxanthin and asthaxanthin)
standard (Hoffman La Roche, Basle, Switzerland
and Sigma, USA). Individual pigments were identified
based on their separation on (a) thin-layer
chromatography, which was carried out on silica
gel-G supported on 20=20 cm glass plate in a
pre-saturated chamber; the solvent system consisted
of 15% acetone in petroleum ether as outlined
by Zagalsky et al. (1967); (b) based on their
partition between hexane and 95% methanol; and
(c) the mass spectrum of end groups (Wetter et
al., 1971).
2.4. Amino acid analyses
For analysing the amino acid composition, carotenoprotein
complexes were prepared according
to the methods described by Zagalsky et al.
(1967). The samples were hydrolysed for 36 h at
110 8C. Amino acids were separated in a twocolumn
system using a JEOL JLC-6 AH automatic
amino acid analyser under standard conditions
(JEOL Instruction, Tokyo).
The columns were filled with ICR-2 resin and
the separation temperature was maintained at 52
8C. For the analyses, 0.8 ml samples were injected
and the flow rate of the solvent (buffer solutions)
was programmed to 25.2 mlyh and for the ninhydrine
dye at 12.6 mlyh as outlined by Czeczuga
and Czeczuga-Semeniuk (1998). Alkaline amino
acids (Lys, His, Arg) were separated in an 8=150
mm column using 0.35 N sodium–citrate buffer
solution (pH 5.28) as mobile phase under a pressure
of approximately 8 atm.
Acidic and neutral amino acids were separated
on a 8=500 mm column in buffer solution No. 2:
0.2 N sodium–citrate at pH 4.2 under a pressure
of approximately 20 atm. Standard amino acid
solutions were obtained from Pierce Biotechnology
Inc., USA. By comparing the retention time (Rt)
with the standard amino acid run at identical
conditions, the amino acids present in the sample
were identified and total amino acid content was

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 คอลัมน์โครมาและชั้นบาง
วัสดุไตได้รับการหมุนเหวี่ยงอีกครั้ง
และทำให้บริสุทธิ์แล้วโดยโคแลกเปลี่ยนไอออน
บน DEAE-เซลลูโลส elution ได้ดำเนินการ
ออกมาพร้อมกับฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) โดยใช้เส้นตรง
ความเข้มข้นของการไล่ระดับ 0.02-0.35 เมตรการสูญเสียใน measurementsof ชะถูกถ่ายใน
ช่วง 300-800 นาโนเมตรโดยใช้รุ่น 203
spectrophotometer 'Spectrimom.
Carotenoids ได้รับอิสรภาพ จาก carotenoproteins
ด้วยอะซิโตนเป็นไปตามขั้นตอนของการ
Shone et al, (1979) การใช้สารบางชั้น
ของกลุ่มเทียม carotenoproteins,
ketocarotenoids ถูกระบุ สกัด
carotenoid คนเดียวได้รับการวิเคราะห์หรือ admixed กับ
ketocarotenoid (canthaxanthin และ asthaxanthin)
มาตรฐาน (La Roche ฮอฟแมน, บาเซิลวิตเซอร์แลนด์
และซิกสหรัฐอเมริกา) เม็ดสีส่วนบุคคลที่ถูกระบุ
อยู่บนพื้นฐานของการแยกของพวกเขาใน (ก) ชั้นบาง
โคซึ่งได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับซิลิก้า
เจลจีได้รับการสนับสนุนในวันที่ 20 = 20 ซมแผ่นกระจกใน
ห้องก่อนอิ่มตัว; ประกอบด้วยระบบตัวทำละลาย
ของอะซีโตน 15% ในปิโตรเลียมอีเทอร์ที่ระบุไว้
โดย Zagalsky et al, (1967); (ข) ตามของพวกเขา
ที่กั้นระหว่างเฮกเซนและเมทานอล 95%; และ
(ค) สเปกตรัมมวลของกลุ่มท้าย (Wetter et
al., 1971).
2.4 วิเคราะห์กรดอะมิโน
สำหรับการวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดอะมิโน carotenoprotein
คอมเพล็กซ์ถูกจัดทำขึ้นตาม
วิธีการอธิบายโดย Zagalsky et al.
(1967) ตัวอย่างที่ถูกย่อย 36 ชั่วโมงที่
110 8C กรดอะมิโนที่ถูกแยกออกใน twocolumn
ระบบโดยใช้ JEOL JLC AH-6 อัตโนมัติ
วิเคราะห์กรดอะมิโนภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน
(JEOL การเรียนการสอนโตเกียว).
คอลัมน์เต็มไปด้วย ICR-2 เรซินและ
อุณหภูมิแยกถูกเก็บรักษาไว้ที่ 52
8C สำหรับการวิเคราะห์ 0.8 มล. ตัวอย่างที่ถูกฉีด
และอัตราการไหลของตัวทำละลาย (สารละลายบัฟเฟอร์)
เป็นโปรแกรมที่จะ 25.2 mlyh และ ninhydrine
สีย้อมที่ 12.6 mlyh ดังที่ระบุไว้โดย Czeczuga
และ Czeczuga-Semeniuk (1998) อะมิโนอัลคาไลน์
กรด (ลิซเขา Arg) ถูกแยกออกใน 8 = 150
มมคอลัมน์โดยใช้ 0.35 ไม่มีบัฟเฟอร์โซเดียมซิเตรต
การแก้ปัญหา (pH 5.28) ขณะที่เฟสเคลื่อนที่ภายใต้ความกดดัน
ประมาณ 8 ตู้เอทีเอ็ม.
กรดอะมิโนกรดเป็นกลางและถูกแยก
บน 8 = 500 มมคอลัมน์ในสารละลายบัฟเฟอร์ฉบับที่ 2:
0.2 ไม่มีโซเดียมซิเตรตที่ pH 4.2 ภายใต้ความดัน
ประมาณ 20 ตู้เอทีเอ็ม มาตรฐานกรดอะมิโน
โซลูชั่นที่ได้รับจากเทคโนโลยีชีวภาพเพียร์ซ
อิงค์ประเทศสหรัฐอเมริกา โดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษา (Rt)
กับระยะกรดอะมิโนมาตรฐานที่เหมือนกัน
เงื่อนไขกรดอะมิโนที่มีอยู่ในตัวอย่าง
ที่ถูกระบุและเนื้อหากรดอะมิโนรวม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 คอลัมน์โครมาโตกราฟีผิวบาง
วัสดุ dialysed อีกครั้งที่ระดับแล้ว บริสุทธิ์ โดยการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography

บน DEAE เซลลูโลส ได้มาอุ้ม
ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) โดยใช้เส้นไล่ระดับความเข้มข้น 0.02 0.35 m (
measurementsof การสูญพันธุ์ในตัวถ่าย
ช่วง 300 - 800 nm ใช้รุ่น 203
' ' spectrimom เตอร์
คาโรทีนอยด์ถูกปลดปล่อยจาก carotenoproteins
ด้วยอะซิโตน ตามขั้นตอนของ
ส่อง et al . ( 1979 ) การใช้เทคนิค TLC พบกลุ่มเทียมของ carotenoproteins
, ,
ketocarotenoids ระบุ . สกัดแคโรทีนอยด์คนเดียว
วิเคราะห์หรือผสมกับ ketocarotenoid ( แคนทาแซนทิน และ asthaxanthin )

มาตรฐาน ( ฮอฟแมน ลา โรเช่ ,และ basle สวิตเซอร์แลนด์
Sigma , USA ) สีแต่ละตัวระบุ
ตามแยกของพวกเขา ( A )
1 เครื่อง ซึ่งพบว่าใน gel-g ซิลิกา
รองรับใน 20 = 20 ซม. จานแก้วใน
ก่อนห้องอิ่มตัว ; ระบบตัวทำละลาย )
15 % ) ในปิโตรเลียมอีเทอร์ตามที่ระบุ
โดย zagalsky et al . ( 1967 ) ; ( b ) ตาม
กั้นระหว่างเฮกเซนและ 95 % เมทานอล ;
( C ) และมวลสเปกตรัมของกลุ่ม ( Wetter et
al . , 1971 ) .
2.4 . กรดอะมิโนการวิเคราะห์
เพื่อวิเคราะห์องค์ประกอบกรดอะมิโน carotenoprotein

เชิงซ้อนเตรียมตามวิธีการที่อธิบายโดย zagalsky et al .
( 1967 ) จำนวนที่พบ 36 H
110 8C กรดอะมิโนแยกในระบบ twocolumn

ใช้จอล jlc-6 อ้าอัตโนมัติกรดอะมิโนภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน
( Jeol สอน , โตเกียว ) .
คอลัมน์ที่เต็มไปด้วย icr-2 เรซินและ
แยกอุณหภูมิไว้ที่ 52
8C สําหรับการวิเคราะห์ , 0.8 ml จำนวนฉีด
และอัตราการไหลของสารละลาย ( สารละลายบัฟเฟอร์ )
ถูกโปรแกรม ให้สามารถ mlyh และสำหรับ ninhydrine
ย้อมที่ 12.6 mlyh ตามที่ระบุโดย czeczuga
czeczuga และเซเมเนียก ( 1998 )อะมิโนกรดด่าง
( Lys ของเขา , arg ) ถูกแยกเป็น 8 คอลัมน์โดยใช้ 0.35 มม. = 150

n โซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ pH และโซลูชั่น 5.28 ) เป็นเฟสเคลื่อนที่ภายใต้ความดันประมาณ 8 ตู้
.
กรดเป็นกลาง และกรดอะมิโนแยก
ที่ 8 = 500 มม. คอลัมน์ในบัฟเฟอร์ วิธีที่ 2 :
2 N โซเดียมซิเตรตและที่ pH 4.2 ภายใต้ความดัน
ประมาณ 20 ATM กรดอะมิโนมาตรฐาน
โซลูชั่นที่ได้จากการแทงเทคโนโลยีชีวภาพ
อิงค์ สหรัฐอเมริกา โดยการเปรียบเทียบความคงทนในการจำ เวลา ( RT )
กับกรดอะมิโนมาตรฐานใช้ในเงื่อนไขที่เหมือนกัน
, กรดอะมิโนที่มีอยู่ในตัวอย่าง
ถูกระบุและปริมาณกรดอะมิโนรวม คือ