2. Materials and methods2.1. Fungi

2. Materials and methods
2.1. Fungi isolation
2.1.1. Isolation and morphologic identification of endophytic
Trichoderma species
To isolate endophytes, the bark of T. catappa (National Herbarium
Voucher Specimen number 51244/HNC) was collected on
the University of Yaoundé 1 main campus on September 2, 2014.
Small bark pieces, measuring about 2 mm were surfacedisinfected
by means of 5 min rinse with 70% ethanol, followed
by treatment with 1% active chlorine solution for 15 min, 2 min
in 70% ethanol, and a final rinse three times in sterile distilled
water. Disinfected bark pieces were plated on Potato Dextrose Agar
(PDA) (Sigma) containing chloramphenicol (200 mg/l). Two plates,
each containing about 15 bark pieces, were prepared and kept in
the dark at room temperature (22–26 C). After endophyte mycelium
emerged from plant tissues into the agar, mycelial fragments
were transferred to fresh PDA plates (Sánchez Márquez et al., 2007)
and maintained under natural light at room temperature. Endophytes
were identified up to genus level based on colony characters,
growth and structure of mycelium, conidiophores, phialides
and conidia as described by Kubicek and Harman (2002). Continuous
maintenance of endophytes was achieved by regular transfer
on PDA slants under aseptic conditions to keep the culture fresh
and viable. They were screened for biological activity and the most
potent biological control agent selected and progressed for molecular
characterization.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เชื้อรารบกวน2.1.1. การแยกและระบุ morphologic endophyticTrichoderma สายพันธุ์เพื่อแยกเปลือกของ T. catappa หอพรรณชาติ (ไม้ endophytesรวบรวมตัวอย่างใบสำคัญหมายเลข 51244/HNC) บนมหาวิทยาลัยยาอุนเด 1 วิทยาเขตหลักบน 2 กันยายน 2014ชิ้นส่วนเปลือกขนาดเล็ก ประมาณ 2 มม.มี surfacedisinfectedโดย 5 นาทีล้างด้วยเอทานอล 70% ตามโดยการรักษาด้วยวิธีการแก้ไขปัญหาของการใช้คลอรีน 1% 15 นาที 2 นาทีในเอทานอล 70% และล้างสุดท้ายสามครั้งใน หมันกลั่นน้ำ ฆ่าเชื้อเปลือกชิ้นถูกชุบบนมันฝรั่งเป็นอาหาร(PDA) (Sigma) chloramphenicol มี (200 mg/l) ทั้งสองแผ่นมี 15 ชิ้นเปลือก จัดทำ และเก็บไว้ในมืดที่อุณหภูมิห้อง (22 – 26 C) หลังจากยัง endophyteเกิดจากเนื้อเยื่อพืชในอาหาร เศษ mycelialให้สดแผ่น PDA (Sánchez Márquez et al. 2007)และบำรุงรักษาภายใต้แสงที่อุณหภูมิห้อง Endophytesระบุได้ถึงระดับสกุลตามอักขระอาณานิคมเจริญเติบโตและโครงสร้างของยัง conidiophores, phialidesและ conidia ตามที่อธิบายไว้ โดย Kubicek และ Harman (2002) อย่างต่อเนื่องบำรุงรักษาของ endophytes เกิดจากการส่งบน PDA slants ภายใต้สภาวะปลอดเชื้อเพื่อให้วัฒนธรรมใหม่และทำงานได้ พวกเขาต้องชีวภาพและมากสุดเลือกบริษัทตัวแทนการควบคุมทางชีวภาพที่มีศักยภาพ และก้าวหน้าสำหรับโมเลกุลคุณลักษณะ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เชื้อราแยก
2.1.1 การแยกและรูปร่างบัตรประจำตัวของเอนโดไฟท์
สายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma
เพื่อแยก endophytes เปลือกของ T. catappa (National สมุนไพร
หมายเลขคูปองตัวอย่าง 51,244 / HNC) คือการรวบรวมไว้ใน
มหาวิทยาลัยยาอุนเด 1 วิทยาเขตหลักอยู่ 2 กันยายน 2014
ชิ้นเปลือกขนาดเล็กวัดประมาณ 2 มิลลิเมตร surfacedisinfected
โดยวิธีการของ 5 นาทีล้างออกด้วยเอทานอล 70% ตามมา
ด้วยการรักษาด้วยวิธีการแก้ปัญหาการใช้งาน 1% คลอรีนเป็นเวลา 15 นาที, 2 นาที
ในเอทานอล 70% และล้างสุดท้ายสามครั้งในการฆ่าเชื้อกลั่น
น้ำ ฆ่าเชื้อชิ้นเปลือกถูกชุบบนมันฝรั่ง Dextrose Agar
(PDA) (ซิกม่า) ที่มี chloramphenicol (200 mg / l) สองแผ่น
แต่ละที่มีประมาณ 15 ชิ้นเปลือกไม้ได้จัดทำและเก็บไว้ใน
ที่มืดที่อุณหภูมิห้อง (22-26 C) หลังจาก endophyte เส้นใย
โผล่ออกมาจากเนื้อเยื่อพืชลงในวุ้นเศษเส้นใย
ถูกโอนไปยังแผ่น PDA สด (SánchezMárquez et al., 2007)
และการบำรุงรักษาภายใต้แสงธรรมชาติที่อุณหภูมิห้อง endophytes
ถูกระบุถึงระดับประเภทขึ้นอยู่กับตัวละครอาณานิคม,
การเจริญเติบโตและโครงสร้างของเส้นใย, conidiophores, phialides
และสปอร์ตามที่อธิบาย Kubicek และ Harman (2002) อย่างต่อเนื่อง
การบำรุงรักษาของ endophytes ก็ประสบความสำเร็จโดยการโอนปกติ
ใน slants PDA ภายใต้สภาวะปลอดเชื้อเพื่อให้วัฒนธรรมสด
และทำงาน พวกเขาได้รับการตรวจคัดกรองและฤทธิ์ทางชีวภาพมากที่สุด
ตัวแทนการควบคุมทางชีวภาพที่มีศักยภาพที่เลือกและก้าวหน้าสำหรับโมเลกุล
ตัวละคร