2. Materials and methods2.1. Microo

2. Materials and methods
2.1. Microorganisms and inoculum production
Isolates AM13, BA17, and BA47 (group I), AM7 and BA66 (group II) of T. stromaticum were used in this study. Isolate AM13 was obtained from a dead broom collected in Paraiso, Colombia; AM7 was obtained from a dead cacao broom in Bele´m, Para´ State, Brazil; BA17 from dead fallen broom in Itubera´, Bahia State; BA47 from a dead pod in Urucuca, Bahia State and BA66 was isolated from inside the trunk of a cupuassu tree in Itajuı´pe, Bahia State. For spore production, T. stromaticum strains were grown on corn meal agar medium (CMA) (Difco, Detroit, MI) for 4 days at 25 C. Spores were scraped from the plates and the concentration was adjusted to 107 spores per ml with the use of a hemocytometer. All isolates were stored in 10% glycerol at 80 C. For every experiment, fresh plates were obtained by culturing the isolates from the 80 C stocks. M. perniciosa isolate ALF 42, obtained from green, infected branches at the municipality of Itajuı´pe, Bahia State, was used in the induction of resistance assays. Basidiospores of M. perniciosa were produced, collected, and stored according to Macagnan et al. (2005). Briefly, the fungus was cultivated on PDA for 10 days under laboratory conditions. Mycelium plugs were then transferred to petri dishes containing a sterile substrate composed of a homogeneous mixture of finely ground dry witches’ brooms (37%), oat flour (10%), CaSO4 (1.5%), and water (51.5%). Petri dishes were kept in an incubator at 25 C for 15 days. Fully colonized substrate was placed in a glass chamber (1.0 0.5 0.5 m) submitted to a watering regime of 1 l per day and a photoperiod of 8 h light and 16 h dark. After 15 days of incubation, the water supply was interrupted for 4 days to induce basidiocarp formation. The basidiocarps produced were collected, disinfested with streptomycin sulfate (150 lg per ml), washed with sterile distilled water, and had their caps fixed with Vaseline to the upper part of petri dishes. The lower part of the cap remained free for the discharge of basidiospores, which were collected in a solution containing glycerol (16%) and 2-(N-morpholine) ethane sulfonic (MES) acid (0.195%) with shaking for a period of 18 h under laboratory conditions. Basidiospore suspensions were kept in liquid nitro gen until use. Before use, the co ncentra tion of the basidio spore suspensi ons was adjusted to 5 105 basidiospores
per ml.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. จุลินทรีย์และผลิต inoculumIsolates AM13, BA17, and BA47 (group I), AM7 and BA66 (group II) of T. stromaticum were used in this study. Isolate AM13 was obtained from a dead broom collected in Paraiso, Colombia; AM7 was obtained from a dead cacao broom in Bele´m, Para´ State, Brazil; BA17 from dead fallen broom in Itubera´, Bahia State; BA47 from a dead pod in Urucuca, Bahia State and BA66 was isolated from inside the trunk of a cupuassu tree in Itajuı´pe, Bahia State. For spore production, T. stromaticum strains were grown on corn meal agar medium (CMA) (Difco, Detroit, MI) for 4 days at 25 C. Spores were scraped from the plates and the concentration was adjusted to 107 spores per ml with the use of a hemocytometer. All isolates were stored in 10% glycerol at 80 C. For every experiment, fresh plates were obtained by culturing the isolates from the 80 C stocks. M. perniciosa isolate ALF 42, obtained from green, infected branches at the municipality of Itajuı´pe, Bahia State, was used in the induction of resistance assays. Basidiospores of M. perniciosa were produced, collected, and stored according to Macagnan et al. (2005). Briefly, the fungus was cultivated on PDA for 10 days under laboratory conditions. Mycelium plugs were then transferred to petri dishes containing a sterile substrate composed of a homogeneous mixture of finely ground dry witches’ brooms (37%), oat flour (10%), CaSO4 (1.5%), and water (51.5%). Petri dishes were kept in an incubator at 25 C for 15 days. Fully colonized substrate was placed in a glass chamber (1.0 0.5 0.5 m) submitted to a watering regime of 1 l per day and a photoperiod of 8 h light and 16 h dark. After 15 days of incubation, the water supply was interrupted for 4 days to induce basidiocarp formation. The basidiocarps produced were collected, disinfested with streptomycin sulfate (150 lg per ml), washed with sterile distilled water, and had their caps fixed with Vaseline to the upper part of petri dishes. The lower part of the cap remained free for the discharge of basidiospores, which were collected in a solution containing glycerol (16%) and 2-(N-morpholine) ethane sulfonic (MES) acid (0.195%) with shaking for a period of 18 h under laboratory conditions. Basidiospore suspensions were kept in liquid nitro gen until use. Before use, the co ncentra tion of the basidio spore suspensi ons was adjusted to 5 105 basidiosporesต่อมล.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 จุลินทรีย์และการผลิตหัวเชื้อแยก AM13, BA17 และ BA47 (กลุ่ม I) Am7 และ BA66 (กลุ่มที่สอง) ของที stromaticum ถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้
แยก AM13 ที่ได้รับจากไม้กวาดตายเก็บใน Paraiso, โคลัมเบีย; Am7 ที่ได้รับจากไม้กวาดโกโก้ตายใน Bele'm, Para' รัฐบราซิล BA17 จากไม้กวาดลดลงตายอยู่ใน Itubera', รัฐบาเยีย; BA47 จากฝักตายใน Urucuca เฮียรัฐและ BA66 ที่แยกได้จากภายในลำต้นของต้นไม้ cupuassu ในItajuı'peรัฐบาเยีย สำหรับการผลิตสปอตสายพันธุ์ stromaticum ปลูกในสื่อวุ้นข้าวโพด (CMA) (Difco, ดีทรอยต์, มิชิแกน) เป็นเวลา 4 วันที่ 25 สปอร์ซีถูกคัดลอกมาจากแผ่นเปลือกโลกและความเข้มข้นที่ถูกปรับให้สปอร์ต่อ 107 มล. กับ ใช้ hemocytometer ไอโซเลททั้งหมดถูกเก็บไว้ในกลีเซอรีน 10% ที่ 80 องศาเซลเซียสสำหรับการทดสอบทุกจานสดที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเชื้อจาก 80 หุ้น C เอ็มอาล์ฟ perniciosa แยก 42 ที่ได้รับจากสีเขียวเป็นสาขาการติดเชื้อในเขตเทศบาลของItajuı'pe, รัฐบาเยียถูกนำมาใช้ในการเหนี่ยวนำของการวิเคราะห์ความต้านทาน basidiospores ของ perniciosa เมตรกำลังผลิตที่เก็บรวบรวมและจัดเก็บไว้ตาม Macagnan et al, (2005) สั้น ๆ , เชื้อราได้รับการปลูกฝังบน PDA เป็นเวลา 10 วันในห้องปฏิบัติการ ปลั๊กเส้นใยถูกโอนไปแล้ว Petri อาหารที่มีพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อประกอบด้วยส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกันของพื้นดินอย่างประณีตไม้กวาดแม่มดแห้ง (37%), แป้งข้าวโอ๊ต (10%), CaSO4 (1.5%) และน้ำ (51.5%) จานเลี้ยงเชื้อที่ถูกเก็บไว้ในตู้อบที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 วัน ครบพื้นผิวอาณานิคมที่วางอยู่ในห้องกระจก (1.0 0.5 0.5 เมตร) ส่งไปยังระบบการปกครองของรดน้ำ 1 ลิตรต่อวันและแสงของแสง 8 ชั่วโมงและ 16 ชั่วโมงที่มืด หลังจาก 15 วันของการบ่มน้ำประปาถูกขัดจังหวะเป็นเวลา 4 วันเพื่อก่อให้เกิดการก่อตัว basidiocarp basidiocarps ผลิตถูกเก็บ disinfested กับซัลเฟต streptomycin (150 มล. ต่อ ๆ lg) ล้างด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและหมวกของพวกเขาคงมีวาสลีนไปยังส่วนบนของอาหารเลี้ยงเชื้อ ส่วนล่างของฝายังคงเป็นอิสระสำหรับการปล่อยของ basidiospores ซึ่งถูกเก็บไว้ในการแก้ปัญหาที่มีกลีเซอรอล (ที่ 16%) และ 2 (N-morpholine) อีเทนซัลโฟ (MES) กรด (0.195%) ที่มีการสั่นเป็นระยะเวลา 18 ชั่วโมงภายใต้เงื่อนไขที่ห้องปฏิบัติการ สารแขวนลอย Basidiospore ถูกเก็บไว้ในเก็นเหลวจนการใช้ไนโตร ก่อนที่จะใช้ร่วม ncentra การของสปอร์ basidio SUSPENSI ons ปรับ 5 105 basidiospores
ต่อมิลลิลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การผลิตเชื้อจุลินทรีย์และ
am13 ba17 แยก , และ ba47 ( กลุ่ม 1 ) , am7 และ ba66 ( กลุ่มที่ 2 ) ของ stromaticum กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ แยก am13 ได้รับจากไม้กวาดเก็บตายใน Paraiso , โคลัมเบีย ; am7 ได้จากไม้กวาดโกโก้ตายใน bele ใหม่ M พาราใหม่รัฐบราซิล ba17 ตายตกจากไม้กวาดใน itubera ใหม่ Bahia รัฐba47 จากฝักแล้ว urucuca Bahia รัฐและ ba66 ได้เข้าไปในลำต้นของต้นไม้ใน cupuassu itaju ı´ PE , Bahia รัฐ การสร้างสปอร์ ต. stromaticum สายพันธุ์ปลูกข้าวโพดป่นในอาหารวุ้น ( CMA ) ( difco , Detroit , MI ) 4 วัน ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสสปอร์ถูกขูดจานและมีค่าปรับ 107 สปอร์ต่อมิลลิลิตร มีใช้ใน hemocytometer .ทุกสายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ใน 10% กลีเซอรอลที่ 80 องศาเซลเซียส สำหรับทุกการทดลอง แผ่นใหม่ที่ได้รับจากการเพาะเชื้อจาก 80 C หุ้น เมตร ที่แยกได้จาก perniciosa อัลฟ์ 42 สีเขียว กิ่งก้านที่ติดเชื้อในเขตเทศบาลเมือง itaju ı´ PE , Bahia รัฐถูกใช้ในการเหนี่ยวนำยีนต้านทาน การถ่ายทอดเชื้อ M . perniciosa ที่รวบรวมและเก็บไว้ตาม macagnan et al . ( 2005 ) สั้น ๆ , เชื้อราบนอาหาร PDA สำหรับ 10 วันภายใต้เงื่อนไขปฏิบัติการ เส้นใยปลั๊กแล้วโอนไปยังจานเลี้ยงเชื้อที่มีการฆ่าเชื้อพื้นผิวประกอบด้วยสารเนื้อเดียวบดแห้งของแม่มดไม้กวาด ( 37% ) , แป้งข้าวโอ๊ต ( 10% ) , การระเบิด ( 1.5% ) และน้ำ ( 51.5 % )จานเพาะเลี้ยงไว้ในตู้อบที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 วัน ครบอยู่ในอาณานิคม ( ห้องกระจก ( 1.0 0.5 0.5 M ) ส่งไปยังระบบรดน้ำ 1 ลิตรต่อวัน และช่วงแสงของแสง 8 H และ 16 H ดำ หลังจาก 15 วัน ระยะเวลาน้ำประปาถูกขัดจังหวะสำหรับ 4 วัน จากการ basidiocarp . ที่พิสูจน์ผลิต รวบรวมไว้disinfested กับสเตรปโตมัยซินซัลเฟต ( 150 ) ต่อมิลลิลิตร ) การล้างด้วยน้ำกลั่นปราศจากเชื้อ และมีหมวกถาวรด้วยวาสลีนกับส่วนบนของจานเพาะเลี้ยง ส่วนล่างของหมวกยังคงอยู่ฟรีสำหรับการไหลของการถ่ายทอดเชื้อ ซึ่งถูกเก็บในสารละลายที่มีกลีเซอรอล ( 16% ) และ 2 - ( n-morpholine ) อีเทนซัลโฟนิค ( MES ) กรด ( 0195 % ) เขย่าเป็นเวลา 18 ชั่วโมง ภายใต้สภาวะในห้องปฏิบัติการ บาสิดิโอสปอร์แขวนลอยอยู่ในของเหลว ไนโตรเจน จนเก็บไว้ใช้ ก่อนใช้ โค ncentra tion ของ basidio สปอร์ suspensi ส่วนเสริมปรับ 5 105 ถ่ายทอดเชื้อ
ต่อมิลลิลิตร