Materials and methods2.1 Preparatio

Materials and methods
2.1 Preparation of fungal spore inoculum
Spore suspensions of Aspergillus oryzae
TISTR 3102 were prepared from a fully sporulated
(7 days old) PDA slant culture using 10 ml of 0.85%
NaCl solution. This spore suspension was used as the
master suspension, which was appropriately diluted to
required density. Spore concentration in the inoculum
was estimated by a haemacytometer.
2.2 Substrate preparation
Two economic crops consisting of rice (Oryza
sativa L.) and cassava (Manihot esculenta) were used
in the experiment. The 400 g (on a dry basis) of each
substrate was weighed separately into a 2-l Erlenmeyer
flasks and distilled water containing 10% (v/v) of
supplementing salt solution (30 ppm of CaCl2) was added
and adjusted to 60% moisture level (8). The contents
of the flasks were mixed thoroughly and autoclaved at
121°C for 15 minutes.
2.3 Solid-state fermentation
The sterilised solid substrate was inoculated
with one ml of the prepared inoculum. The contents
were mixed thoroughly and incubated at 30°C for 7
days. Samples of triplicate flasks were withdrawn after
desired incubation.
2.4 Mashing
The fermented mass was mixed into water to
form the slurry of 30% w/v (on a dry basis). One litre of
the slurry was added with 0.03 g of CaCl2 and adjusted
to pH 6 by using 0.1 M lactic acid. Mashing was carried
out by following the method of Okafor and Iwouno (9).
The slurry was initially mashed at 50°C and allowed
to stand for 30 min. The supernatant was decanted and
the remained flour was heated until it gelatinized at
88°C. The supernatant was returned to the cooled and
elatinized slurry, giving an overall temperature of 62°C.
The mash was held at this temperature for 60 min.
The pH of the mash was tested and adjusted to 5.6 by
adding a few drops of lactic acid. One-half of the mash
was withdrawn, boiled and returned to the main mash
and the temperature increased to between 69 and 71°C.
The mixture was held at this temperature for 60 min. The
mash was cooled and filtered using funnel and folded
Whatman No. 1 filter paper. The filtered solution was
finally boiled for 60 min to yield the malt rice syrup.
2.5 Measure of total reducing sugar (TRS)
and free amino nitrogen (FAN)
The samples of fermented mass were diluted
with distilled water and analysed for TRS and FAN
following the methods of Miller (10) and Lie (11)
respectively.
2.6 Enzyme activity
Crude enzyme from the fermented mass was
extracted by simple extraction. A fermented mass of 10 g
was mixed thoroughly with distilled water to a total
extract volume of 100 ml. Contents were mixed by
shaking for one hour at 30°C on a 150 rpm shaker. At
the end of the extraction, the suspension was centrifuged
at 7,000 rpm for 10 min. The extracted solution was
measured for amylolytic activity, α-amylase activity
and α-glucosidase activity.
2.7 Determination of amylolytic enzyme
and α-amylase
The amylolytic activity was assayed using the
Terashima method (12) after crude extraction of malted
rice. 0.5 ml of the supernatant was added to 0.5 ml of a

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ2.1 การเตรียม inoculum สปอร์เชื้อราบริการสปอร์ของ Aspergillus แห้งระดับต่าง ๆ3102 ววถูกเตรียมจาก sporulated เต็ม(7 วันเก่า) วัฒนธรรมเอียง PDA ใช้ 10 ml 0.85%NaCl โซลูชัน ระงับสปอร์นี้ถูกใช้เป็นระงับหลัก ซึ่งถูกทำให้เหมาะสมเพื่อความหนาแน่นที่ต้องการ ความเข้มข้นของสปอร์ใน inoculumถูกประเมิน โดยการ haemacytometer2.2 ขั้นตอนการเตรียมพืชเศรษฐกิจที่สองประกอบด้วยข้าว (Oryzaซา L.) และใช้มันสำปะหลัง (Manihot esculenta)ในการทดลอง G 400 (แต่แห้ง) ของแต่ละพื้นผิวมีน้ำหนักแยกต่างหากใน Erlenmeyer 2 lน้ำและน้ำกลั่นที่ประกอบด้วย 10% (v/v) ของใช้โซลูชันเกลือ (30 ppm ของ CaCl2) ถูกเพิ่มและปรับปรุงระดับความชื้น 60% (8) เนื้อหาของน้ำถูกผสมอย่างละเอียด และ autoclaved ที่121° C 15 นาที2.3 หมักโซลิดสเตตพื้นผิวเป็นของแข็ง sterilised เป็น inoculatedกับ ml หนึ่งของ inoculum เตรียมไว้ เนื้อหาผสมอย่างละเอียด และ incubated ที่ 30° C 7วันนั้น ตัวอย่างของน้ำ triplicate ถูกถอนหลังจากคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ต้องการ2.4 mashingมวลร้าถูกผสมลงในน้ำแบบสารละลายของ 30% w/v (แต่แห้ง) ลิตรหนึ่งของสารละลายที่เพิ่มกับ 0.03 g ของ CaCl2 และปรับปรุงให้ค่า pH ที่ 6 โดยใช้กรด 0.1 M Mashing ถูกดำเนินการออก โดยทำตามวิธีของ Okafor และ Iwouno (9)สารละลายเริ่มต้นทำที่ 50° C และได้รับอนุญาตยืนสำหรับ 30 นาที Decanted supernatant ถูก และแป้งส่วนที่เหลือถูกความร้อนจนมัน gelatinized ที่88 องศาเซลเซียส Supernatant ถูกส่งกลับไปที่เย็น ๆ และสารละลาย elatinized ให้มีอุณหภูมิโดยรวม 62 องศาเซลเซียสคลุกเคล้าถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมินี้ใน 60 นาทีทดสอบ และปรับปรุง 5.6 โดย pH ของคลุกเคล้าเพิ่มกี่หยดกรด ครึ่งหนึ่งของคลุกเคล้าถูกถอน ต้ม และส่งกลับสู่สายหลักและอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นระหว่าง 69 และ 71 องศาเซลเซียสจัดขึ้นที่อุณหภูมินี้สำหรับ 60 นาทีส่วนผสมสายระบายความร้อนด้วย และกรองโดยใช้กรวย และพับกระดาษกรอง Whatman No. 1 วิธีกรองสุดท้าย ต้มสำหรับ 60 นาทีให้น้ำเชื่อมข้าวมอลต์2.5 วัดรวมลดน้ำตาล (TRS)และอะมิโนไนโตรเจน (พัดลม)ตัวอย่างของมวลร้าถูกทำให้เจือจางกลั่นด้วยน้ำ และ analysed TRS และพัดลมตามวิธีของมิลเลอร์ (10) และนอน (11)ตามลำดับ2.6 เอนไซม์มีเอนไซม์ดิบจากมวลร้าสกัด โดยแยกเรื่อง มวลร้าของ 10 gถูกผสมทำน้ำกลั่นรวมแยกเสียงของ 100 ml. เนื้อหาถูกผสมโดยสั่นในหนึ่งชั่วโมงที่ 30° C ในการเชคเกอร์ 150 รอบต่อนาที ที่มี centrifuged ท้ายแยก การระงับที่ 7000 รอบต่อนาทีใน 10 นาที วิธีแยกวัด amylolytic กิจกรรม กิจกรรมα-amylaseและα-glucosidase กิจกรรม2.7 กำหนดของเอนไซม์ amylolyticและα-amylaseกิจกรรม amylolytic ถูก assayed ใช้การวิธี Terashima (12) หลังจากสกัดน้ำมัน maltedข้าว 0.5 ml ของ supernatant ถูกเพิ่มเข้าไป 0.5 ml ของการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
2.1 การเตรียมหัวเชื้อสปอร์ของเชื้อรา
สารแขวนลอยสปอร์ของเชื้อรา Aspergillus oryzae
TISTR 3102 ที่เตรียมจาก sporulated อย่างเต็มที่
(7 วัน) เอียง PDA วัฒนธรรมโดยใช้ 10 มิลลิลิตร 0.85%
วิธีการแก้ปัญหาโซเดียมคลอไรด์ สปอร์แขวนลอยนี้ถูกนำมาใช้เป็น
ระบบกันสะเทือนต้นแบบซึ่งได้รับการปรับลดให้เหมาะสมกับ
ความหนาแน่นของที่จำเป็น ความเข้มข้นของสปอร์ในหัวเชื้อ
ได้รับการประเมินโดย haemacytometer.
2.2 การเตรียมพื้นผิว
สองพืชเศรษฐกิจประกอบด้วยข้าว (Oryza
sativa L. ) และมันสำปะหลัง (Manihot esculenta) ถูกนำมาใช้
ในการทดลอง 400 กรัม (บนพื้นฐานแห้ง) ของแต่ละ
พื้นผิวได้รับการชั่งแยกเป็นรูปกรวย 2 ลิตร
ขวดและน้ำกลั่นที่มี 10% (v / v) ของ
สารละลายเกลือเสริม (30 ส่วนในล้านส่วนของ CaCl2) เพิ่ม
และปรับปรุงถึง 60% ระดับความชื้น (8) เนื้อหา
ของขวดได้รับการผสมเชื้อที่
121 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที.
2.3 การหมักแบบ solid-state
พื้นผิวที่เป็นของแข็งฆ่าเชื้อได้รับเชื้อ
กับหนึ่งมิลลิลิตรของเชื้อที่เตรียมไว้ เนื้อหา
ถูกผสมอย่างทั่วถึงและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7
วัน ตัวอย่างขวดเพิ่มขึ้นสามเท่าถูกถอนออกหลังจาก
บ่มที่ต้องการ.
2.4 Ltd อุปกรณ์ตกแต่ง
มวลหมักผสมลงไปในน้ำเพื่อให้
รูปแบบผสม 30% w / v (บนพื้นฐานแห้ง) หนึ่งลิตรของ
สารละลายที่ถูกเพิ่มเข้ามาด้วย 0.03 กรัมของ CaCl2 และปรับ
ค่า pH 6 โดยใช้ 0.1 M กรดแลคติก mashing ได้ดำเนิน
การโดยต่อไปนี้วิธีการ Okafor และ Iwouno (9).
ได้รับการบดผสมในขั้นต้นที่ 50 ° C และได้รับอนุญาต
ที่จะยืนเป็นเวลา 30 นาที ใสถูก decanted และ
แป้งยังคงได้รับความร้อนจน gelatinized ที่
88 ° C ใสก็กลับไประบายความร้อนและ
สารละลาย elatinized ให้อุณหภูมิโดยรวมของ 62 ° C.
ยีถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมินี้ 60 นาที.
ค่า pH ของยีได้รับการทดสอบและปรับให้ 5.6 โดย
เพิ่มไม่กี่หยดของกรดแลคติก . ครึ่งหนึ่งของยี
ถูกถอนต้มและกลับไปคลุกเคล้าหลัก
และอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นระหว่าง 69 และ 71 ° C.
ส่วนผสมที่ถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมินี้ 60 นาที
คลุกเคล้าถูกระบายความร้อนและกรองโดยใช้ช่องทางและพับ
Whatman ที่ 1 กระดาษกรอง วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกกรอง
ต้มที่สุดสำหรับ 60 นาทีเพื่อให้น้ำเชื่อมข้าวมอลต์.
2.5 มาตรการในการลดน้ำตาลทั้งหมด (TRS)
และไนโตรเจนอะมิโนอิสระ (FAN)
ตัวอย่างของมวลหมักถูกเจือจาง
ด้วยน้ำกลั่นและวิเคราะห์ TRS และพัดลม
ดังต่อไปนี้ วิธีการของมิลเลอร์ (10) และโกหก (11)
ตามลำดับ.
2.6 กิจกรรมเอนไซม์
เอนไซม์หยาบจากมวลหมักถูก
สกัดโดยการสกัดง่าย มวลหมัก 10 กรัม
ได้รับการผสมกับน้ำกลั่นรวม
ปริมาณสารสกัดจาก 100 มล เนื้อหาถูกผสมโดย
การสั่นสะเทือนเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงที่ 30 ° C ในเครื่องปั่น 150 รอบต่อนาที ใน
ตอนท้ายของการสกัดระงับถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 7,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที วิธีการแก้ปัญหาที่สกัดได้เมื่อ
วัดกิจกรรม amylolytic กิจกรรมαอะไมเลส
และกิจกรรมα-glucosidase.
2.7 การกำหนดของเอนไซม์ amylolytic
และαอะไมเลส
กิจกรรม amylolytic ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้
วิธีการ Terashima (12) หลังจากที่สกัดหยาบจาก malted
ข้าว 0.5 มิลลิลิตรใสถูกบันทึกอยู่ใน 0.5 มิลลิลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
2.1 การเตรียมเชื้อสปอร์แขวนลอยสปอร์เชื้อรา

ของ Aspergillus oryzae TISTR 3102 พร้อมอย่างเต็มที่สร้างสปอร์มาก
( 7 วัน ) วัฒนธรรม ลาด PDA ใช้ 10 ml สารละลาย NaCl 0.85 %

นี้ถูกระงับการใช้สปอร์เป็น
อาจารย์ชั่วคราวที่เหมาะสม

ต้องเจือจางความหนาแน่น สปอร์ของเชื้อ
ประมาณโดย haemacytometer .

สองพืชไร่เศรษฐกิจ 2.2 การเตรียมพื้นผิวประกอบด้วยข้าว ( Oryza sativa L .
) และมันสำปะหลัง ( มันสำปะหลัง ) ใช้
ในการทดลอง 400 กรัม ( บนพื้นฐานแห้ง ) ของแต่ละแผ่นมันหนัก แยกเป็น

2-l เออร์เลนเมเยอร์และขวดน้ำกลั่นผสม 10% ( v / v )
เสริมสารละลายเกลือ ( CaCl2 30 ppm ) และได้เพิ่ม
ปรับระดับความชื้น 60% ( 8 ) เนื้อหา
ของขวดมาผสมอย่างทั่วถึงและสังเคราะห์ที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาที
.
3
sterilised ของแข็งของแข็งและพื้นผิวเป็นเชื้อ
กับหนึ่งมิลลิลิตร เตรียมไว้ 3 . เนื้อหา
ปะปนกันอย่างละเอียด และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
7 วัน ตัวอย่างของการทำสำเนาสามฉบับขวดถูกถอนหลังจาก


ระยะเวลาที่ต้องการ และบดหมักผสมเป็นมวลน้ำ

รูปเสีย 30 % W / V ( บนพื้นฐานแห้ง ) หนึ่งลิตรของน้ำเพิ่มด้วย

0.03 กรัมผลิตและปรับ pH 6 ด้วยกรดแลกติกความเข้มข้น 0.1 M . บดา
ออกตามวิธีของ โอคาฟอร์ และ iwouno ( 9 ) .
ความเข้มข้น 50 ° C ก็เริ่มบดและอนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 30 นาที

คือรินสูงและยังคงอุ่นจนแป้งวุ้นที่
88 องศาที่นำกลับมาเพื่อระบายความร้อนและ
elatinized เสีย ให้อุณหภูมิโดยรวม 62 ° C .
บดถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมิ 60 นาที
pH ของบดทดสอบและปรับให้ 5.6 โดย
เพิ่มไม่กี่หยดกรดแลกติก ถูกถอนออกไปครึ่งหนึ่งของบด
, ต้มและส่งกลับไปยังหลักบด
และอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้นระหว่าง 69 และ 71 องศา C .
ส่วนผสมจะถูกจัดขึ้นที่อุณหภูมินี้ 60 นาที
บดเป็นแท่งและกรองใช้ช่องทางและพับ
whatman 1 ไส้กรองกระดาษ กรองสารละลาย
ต้มจน 60 นาทีเพื่อให้ผลผลิตข้าวมอลต์น้ำเชื่อม .
2.5 การวัดปริมาณน้ำตาลทั้งหมด ( TRS )
และไนโตรเจนกรดอะมิโนฟรี ( พัดลม )

ลดจำนวนของมวลที่หมักด้วยน้ำกลั่นและวิเคราะห์พัดลม
ซิ่นตามวิธีของ มิลเลอร์ ( 10 ) และ ( 11 ) โกหก


2.6 ตามลำดับ เอนไซม์เอนไซม์จากการหมักมวลถูก
สกัดโดยการสกัดอย่างง่าย หมัก มวล 10 กรัม
ผสมอย่างละเอียดด้วยน้ำกลั่นให้ปริมาณสารสกัดรวม
100 มล. ต่อเนื้อหาผสมโดย
เขย่าเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง 30 ° C ใน shaker 150 รอบต่อนาที ที่
ตอนท้ายของการสกัดถูกระงับไฟฟ้า
ที่ 7 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีสกัดสารละลาย
วัดกิจกรรมไมโลไลติกแอลฟาอะไมเลส ,
กิจกรรมและกิจกรรมแอลฟากลูโคซิเดส .
2.7 การวิเคราะห์เอนไซม์แอลฟาอะไมเลสและไมโลไลติก

ไมโลไลติกเอนไซม์กิจกรรมใช้วิธีการ
เทราชิม่า ( 12 ) หลังจากการสกัดน้ำมันจากข้าวมอลต์
. 0.5 ml ของน่านคือเพิ่ม 0.5 ml ของ