DNA was fixed to the filters by bak

DNA was fixed to the filters by baking for 2 hr at 80”. Membranes were prehybridized for 2 hr at 42“ in 55% formamide, 5X SSPE, 5X Denhardt’s solution, 0.5% SDS, and 200 pg/ml RNA (from Torula yeast) in a Robbins hybridization incubator. Hybridizations were carried out overnight in 55% formamide, 5X SSPE, 0.2% SDS and 200 pg/ml RNA at 42”. Filters were washed twice for 20 min in 2X SSC, 0.2% SDS at room temperature. Restriction fragments were detected by the chemiluminescent assay of TIZARD et al. (1990) by applica- tion of 0.125 mM AMPPD (Tropix) to the filters and subse- quent exposure to Kodak XK-1 X-ray film for 4-5 hr. The criteria set for identifying a polymorphism was the observation of at least one heterozygote amongt he seven individuals scored for at least one of the four restriction enzymes repre- sented on a screening blot. See POGSON (1994) and POGSON and ZOUROS (1994) for more details

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอถูกแก้ไขตัวกรองการเอ่ยชม 2 ที่ 80" เยื่อหุ้มถูก prehybridized สำหรับ 2 ชั่วโมงที่ 42 นิ้วใน formamide 55%, 5 X SSPE, 5 X Denhardt ของโซลูชัน 0.5% SDS และ 200 pg/ml RNA (จากยีสต์ Torula) ในตู้อบการ hybridization ร็อบบินส์ Hybridizations ดำเนินการใน 55% formamide, 5 X SSPE, 0.2% SDS และ 200 pg/ml RNA ที่ 42 นิ้ว ตัวกรองถูกล้างสองครั้งสำหรับ 20 นาทีใน 2 X SSC, 0.2% SDS ที่อุณหภูมิห้อง บางส่วนของข้อจำกัดถูกตรวจพบ โดย assay chemiluminescent ของ TIZARD et al. (1990) โดยทางการกอนหนาค้า 0.125 มม. AMPPD (Tropix) ฟิลเตอร์และแสงเข่น quent ฟิล์มเอ็กซเรย์ Kodak XK-1 4-5 ชั่วโมง ตั้งค่าเงื่อนไขสำหรับการระบุความแตกต่างถูกสังเกตน้อยหนึ่ง heterozygote amongt เขาเจ็ดคนของเอนไซม์จำกัดสี่ยิ่ง sented ในบล็อทคัดกรองอย่างน้อยหนึ่งทำประตู ดู POGSON (1994) และ POGSON และ ZOUROS (1994) รายละเอียดเพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

DNA ถูกจับจ้องไปที่ฟิลเตอร์โดยการอบเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 80 " เยื่อถูก prehybridized เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 42 "ใน 55% formamide, 5X SSPE วิธีการแก้ปัญหาของ 5X Denhardt, 0.5% SDS 200 และ PG / ml อาร์เอ็นเอ (จาก Torula ยีสต์) ในศูนย์บ่มเพาะผสมพันธุ์ร็อบบินส์ Hybridizations ได้ดำเนินการค้างคืนใน formamide 55% 5X SSPE, SDS 0.2% และ 200 PG / ml RNA ที่ 42 " ฟิลเตอร์ถูกล้างสองครั้งเป็นเวลา 20 นาทีใน 2X SSC 0.2% SDS ที่อุณหภูมิห้อง ชิ้นส่วนข้อ จำกัด ถูกตรวจพบโดยการทดสอบ chemiluminescent ของเซอร์ด et al, (1990) โดยการประยุกต์ใช้ของ 0.125 มิลลิ AMPPD (Tropix) การกรองและการสัมผัส Quent subse- เพื่อ Kodak ฟิล์ม XK-1 X-ray สำหรับ 4-5 HR เกณฑ์ที่กำหนดสำหรับการระบุความแตกต่างคือการสังเกตอย่างน้อยหนึ่ง heterozygote amongt เขาเจ็ดบุคคลที่ได้คะแนนอย่างน้อยหนึ่งในสี่ของเอนไซม์ข้อ จำกัด repre- sented บน blot การตรวจคัดกรอง ดู Pogson (1994) และ Pogson และ ZOUROS (1994) สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม