Fig. 2.Characterization of the desi

Fig. 2.
Characterization of the designed BRET systems. (A) Western blot analysis of protein expression for all BRET fusions and donor-only proteins contained in lysates of HT1080 cells stably expressing the reporter proteins. (B) Spectral imaging of HT1080 cells expressing either RLuc8.6 or BRET6 using 20-nm filers in the 460–720 nm range. EnduRen luciferase substrate was used for this experiment. Error bars = SD. (C) BRET ratios of the newly designed systems measured in cell culture. HT1080 cells (6.4 × 104), stably expressing each of the BRET fusion and donor-only proteins (RLuc8 or RLuc8.6), were plated in black 96-well plates and imaged on the addition of CLZ or CLZ-v. The graph shows the average BRET ratios calculated as the A/D of the BRET system minus the A/D of donor-only cells. (D) BRET ratios calculated for the BRET6 system using various number of HT1080 cells. Experiments were performed as described in C. The dotted line represents the linear fitting for the data points. Error bars = SEM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Fig. 2คุณสมบัติของระบบเบรตมา (A) ตะวันตกทำลายโปรตีนนิพจน์ทั้งหมด fusions เบรตและผู้บริจาคเฉพาะโปรตีนมีอยู่ใน lysates ของเซลล์ HT1080 stably แสดงโปรตีนโปรแกรมรายงานวิเคราะห์ ขภาพสเปกตรัมของเซลล์ HT1080 แสดง RLuc8.6 หรือ BRET6 ใช้รเจ็ค 20 nm ในช่วง 460-720 nm พื้นผิว luciferase EnduRen ถูกใช้ในการทดลองนี้ แถบข้อผิดพลาด = SD. (C) เบรตอัตราส่วนของระบบออกแบบใหม่ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ HT1080 เซลล์ (6.4 × 104), การแสดงของเบรตฟิวชั่นและผู้บริจาคเฉพาะโปรตีน (RLuc8 หรือ RLuc8.6), stably ถูกชุบในแผ่น 96 ดีดำ และ imaged ในการเพิ่ม CLZ หรือ CLZ-v กราฟแสดงอัตราส่วนเบรตเฉลี่ยที่คำนวณเป็น A/D ระบบเบรตลบ A/D ของเซลล์ของผู้บริจาคเท่านั้น (D) คำนวณอัตราส่วนเบรตระบบ BRET6 โดยใช้จำนวนเซลล์ HT1080 ต่าง ๆ ดำเนินการทดลองตามที่อธิบายไว้ในค เส้นแทนเส้นกระชับสำหรับจุดข้อมูล แถบข้อผิดพลาด = SEM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มะเดื่อ 2.
ลักษณะของการออกแบบระบบ BRET () การวิเคราะห์ดวงตะวันของการแสดงออกของโปรตีนทั้งหมด fusions BRET และโปรตีนบริจาคอย่างเดียวที่มีอยู่ในเซลล์ lysates HT1080 เสถียรแสดงโปรตีนนักข่าว (ข) การถ่ายภาพเงาของเซลล์ HT1080 แสดงอย่างใดอย่างหนึ่งหรือ RLuc8.6 BRET6 ใช้ filers 20 นาโนเมตรในช่วง 460-720 นาโนเมตร EnduRen luciferase ตั้งต้นที่ใช้ในการทดลองนี้ ข้อผิดพลาดบาร์ SD = (C) อัตราส่วน BRET ของระบบการออกแบบใหม่ที่วัดได้ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ เซลล์ HT1080 (6.4 × 104), เสถียรแสดงแต่ละ BRET ฟิวชั่นและผู้บริจาคเพียงโปรตีน (RLuc8 หรือ RLuc8.6) ถูกชุบสีดำ 96 แผ่นดีและถ่ายภาพในการเพิ่มของ CLZ หรือ CLZ-V กราฟแสดงอัตราส่วน BRET เฉลี่ยคำนวณเป็น A / D ของระบบ BRET ลบ / D ของผู้บริจาคเซลล์เท่านั้น (D) อัตราส่วน BRET คำนวณสำหรับระบบ BRET6 โดยใช้หมายเลขต่างๆของเซลล์ HT1080 การทดลองได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในซีเส้นประแสดงให้เห็นถึงการปรับเชิงเส้นสำหรับจุดข้อมูล ข้อผิดพลาดบาร์ = SEM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 2 .
คุณสมบัติของการออกแบบ Bret ระบบ ( ก ) Western blot การวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีนสำหรับ fusions Bret ทั้งหมดและผู้บริจาคเท่านั้น โปรตีนที่มีอยู่ในเซลล์ของ ht1080 lysates เสถียรแสดงนักข่าวโปรตีน ( ข ) ภาพสเปกตรัมของ ht1080 เซลล์แสดงให้ rluc8.6 หรือ bret6 ใช้ 20 filers nm ใน 460 – 720 nm ช่วงenduren เอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( ที่ใช้สำหรับการทดลองนี้ ข้อผิดพลาดบาร์ = SD ( c ) เบร็ท อัตราส่วนของระบบวัดที่ออกแบบใหม่ในเซลล์เพาะเลี้ยง ht1080 เซลล์ ( 4 × 104 ) อย่างถาวร การแสดงของแต่ละ Bret ฟิวชั่นและผู้บริจาคโปรตีนเท่านั้น ( rluc8 หรือ rluc8.6 ) , ชุบดำ 96 แผ่น และภาพลักษณ์ที่ดี นอกจากนี้ clz หรือ clz-v.กราฟแสดงโดย Bret อัตราส่วนคำนวณเป็น A / D ของ Bret ระบบลบ / D เซลล์เฉพาะผู้บริจาค ( D ) เบร็ท อัตราส่วนที่คำนวณสำหรับระบบ bret6 โดยใช้หมายเลขต่าง ๆ ของ ht1080 เซลล์ ทดลองตามที่อธิบายไว้ใน C . เส้นประแสดงข้อต่อเชิงเส้นสำหรับข้อมูลจุด ข้อผิดพลาดบาร์ = SEM