Material and methodsChemicalsDiesel

Material and methods
Chemicals
Diesel oil used in this study was obtained from a local petrol
pump (Sfax, Tunisia). Diesel oil was used as a model contaminant
because it is a common environmental polluant. SDS (anionic surfactant)
and Tween 80 (non-ionic surfactant) were purchased from
Sigma and dissolved in distilled water. They were used as synthetic
chemical emulsifiers to perform the solubilization tests in parallel
with the biosurfactant from An6 strain.
Microorganism and culture conditions
In a previous work, during a screening program on proteaseproducing
strains, which have potential industrial applications,
B. amyloliquefaciens An6 was isolated from the soil of detergent
industry in Tunisia. It was identified, according to the methods
described in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology and on
the basis of the 16S rDNA sequence analysis. It was assigned the
accession number (FJ517583). This strain was found to produce
multiple proteases, and fibrinolytic BAF1 enzyme was partially
purified and characterized (Agrebi et al., 2010).
In this study, biosurfactant production by the An6 strain was
performed on Landy medium which contains: glucose 20 g/L, Lglutamic
acid 5 g/L, yeast extract 1 g/L, K2HPO4 1 g/L, MgSO4 (7H2O)
0.5 g/L, KCl 0.5 g/L, CuSO4 1.6 mg/L, Fe2(SO4)3 1.2 mg/L and MnSO4
0.4 mg/L (Landy et al., 1948). The production was carried out in 1 L
conical flasks with 100 mL of liquid medium and shaken at 160 rpm
for 72 h on a rotary shaker. The fermentation temperature, initial
pH value were 30 C and 7.0, respectively.
Estimation of biosurfactant activity
Biosurfactant activity was detected for the culture broth of
B. amyloliquefaciens An6 by three different methods namely: oil
displacement test, drop collapsing test and surface tension
measurement.
Oil displacement test
The oil displacement test is a method used to measure the
diameter of the clear zone, which occurs after dropping a
surfactant-containing solution on an oil-water interphase. The oil
displacement test was carried out according to the method of
Rodrigues et al. (2006) by adding 50 mL of distilled water to a Petri
dish with a diameter of 15 cm. After that 20 mL of diesel oil was
dropped onto the surface of the water, followed by the addition of
10 mL of culture broth supernatant. The diameter of the clear halo
on the oil surface was measured and compared with 10 mL of
distilled water as negative control.
Drop collapse test
Qualitative drop collapse test was performed according to the
protocol of Youssef et al. (2004). 2 mL of diesel oil was added to the
96 well microtitre plates. The plates were equilibrated for 1 h at
37 C and 5 mL of culture broth supernatant was added to the
surface of the oil. The shape of drop on oil surface was observed
after 1 min. The culture supernatant that make the oil drop
collapsed was indicated as positive result and that drops remain
beaded were scored as negative. Distilled water was used as
negative control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเคมีภัณฑ์น้ำมันดีเซลที่ใช้ในการศึกษานี้ได้รับจากน้ำมันเครื่องปั๊ม (Sfax ตูนิเซีย) มีใช้น้ำมันดีเซลเป็นสารปนเปื้อนรุ่นเนื่องจากการ polluant สิ่งแวดล้อมทั่วไปได้ SDS (ย้อม surfactant)และ Tween 80 (ไม่ใช่ ionic surfactant) ซื้อจากซิกและละลายในน้ำกลั่น พวกเขาใช้เป็นสังเคราะห์emulsifiers เคมีการทดสอบ solubilization ควบคู่กันกับ biosurfactant จาก An6 ต้องใช้จุลินทรีย์และวัฒนธรรมเงื่อนไขในการทำงานก่อนหน้านี้ ในระหว่างโปรแกรมคัดกรองบน proteaseproducingสายพันธุ์ ที่ได้ไปประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมเกิด amyloliquefaciens An6 ถูกแยกจากดินของผงซักฟอกอุตสาหกรรมในประเทศตูนิเซีย มันก็ระบุไว้ ตามวิธีการอธิบาย ใน Bergey ของคู่มือของ Determinative Bacteriology และพื้นฐานของ 16S rDNA ลำดับวิเคราะห์ ที่กำหนดในเลขทะเบียน (FJ517583) มีการค้นพบนี้ต้องใช้ในการผลิตหลาย proteases และ BAF1 fibrinolytic เอนไซม์ถูกบางส่วนบริสุทธิ์ และลักษณะ (Agrebi et al., 2010)ในการศึกษานี้ ถูกผลิต biosurfactant โดยพันธุ์ An6การสื่อ Landy ที่ประกอบด้วย: น้ำตาลกลูโคส 20 g/L, Lglutamicกรด 5 g/L, 1 g/L, K2HPO4 สารสกัดจากยีสต์ 1 g/L, MgSO4 (7H2O)0.5 g/L, KCl 0.5 g/L, CuSO4 1.6 mg/L, Fe2 (SO4) 3 1.2 mg/L และ MnSO40.4 mg/L (Landy et al., 1948) การผลิตที่ดำเนินการใน 1 Lนำทรงกรวย มี 100 มล.ของเหลวปานกลาง และเขย่าที่ 160 รอบต่อนาทีสำหรับ h 72 ในเชคเกอร์โรตารี่ อุณหภูมิหมัก เริ่มต้นค่า pH 30 C และ 7.0 ตามลำดับประเมินกิจกรรม biosurfactantพบกิจกรรม Biosurfactant สำหรับซุปวัฒนธรรมของเกิด amyloliquefaciens An6 ได้สามวิธีได้แก่: น้ำมันปริมาณกระบอกสูบทดสอบ ฝากยุบทดสอบและแรงตึงผิววัดทดสอบแทนน้ำมันทดสอบแทนน้ำมันเป็นวิธีการที่ใช้ในการวัดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนชัดเจน ซึ่งเกิดขึ้นหลังจากวางการโซลูชันที่ประกอบด้วย surfactant ในมี interphase น้ำน้ำมัน น้ำมันปริมาณกระบอกสูบทดสอบถูกดำเนินการตามวิธีการโรดริเกวส et al. (2006) โดยการเพิ่ม 50 mL ของน้ำกลั่น Petriจาน มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 15 ซม. หลังจากนั้นปริมาณ 20 mL น้ำมันดีเซลได้ปล่อยลงบนพื้นผิวของน้ำ ตาม ด้วยการเพิ่มmL 10 ของ supernatant ซุปวัฒนธรรม เส้นผ่าศูนย์กลางของคุณปืนชัดเจนน้ำมันบน ผิวถูกวัด และเมื่อเทียบกับ 10 mL ของกลั่นน้ำเป็นตัวควบคุมค่าลบฝากทดสอบยุบทำการทดสอบเชิงคุณภาพฝากยุบตามโพรโทคอลของ Youssef et al. (2004) 2 mL น้ำมันดีเซลถูกเพิ่มเข้าไป96 microtitre ทั้งแผ่น แผ่นที่ equilibrated สำหรับ h 1 ที่37 C และ 5 mL ของ supernatant ซุปวัฒนธรรมถูกเพิ่มเข้าไปพื้นผิวของน้ำมัน มีสังเกตรูปร่างของหล่นบนพื้นผิวน้ำมันหลังจาก 1 นาที วัฒนธรรม supernatant ที่ทำให้น้ำมันลดลงยุบเผยเป็นบวกผลลัพธ์และหยดที่ยังคงลูกปัดมีคะแนนเป็นค่าลบ ใช้น้ำกลั่นเป็นควบคุมค่าลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
สารเคมี
น้ำมันดีเซลที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้มาจากน้ำมันท้องถิ่น
ปั๊ม (Sfax, ตูนิเซีย) น้ำมันดีเซลที่ใช้เป็นสารปนเปื้อนรูปแบบ
เพราะมันเป็น polluant สิ่งแวดล้อมทั่วไป SDS (ลดแรงตึงผิวประจุลบ)
และ Tween 80 (ลดแรงตึงผิวที่ไม่ใช่ไอออนิก) ที่ซื้อมาจาก
Sigma และละลายในน้ำกลั่น พวกเขาถูกนำมาใช้เป็นสารสังเคราะห์
emulsifiers สารเคมีที่จะดำเนินการทดสอบการละลายในแบบคู่ขนาน
กับแหล่งคาร์บอนจากความเครียด AN6.
จุลินทรีย์และเงื่อนไขวัฒนธรรม
ในการทำงานก่อนหน้านี้ในระหว่างโครงการตรวจคัดกรองใน proteaseproducing
สายพันธุ์ที่มีการประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมที่มีศักยภาพ
บี amyloliquefaciens AN6 ที่แยกได้จากดินผงซักฟอก
อุตสาหกรรมในตูนิเซีย มันถูกระบุว่าเป็นไปตามวิธีการที่
อธิบายไว้ในคู่มือการใช้งาน Bergey ของ Determinative แบคทีเรียและ
พื้นฐานของการวิเคราะห์ลำดับ 16S rDNA มันได้รับมอบหมาย
จำนวนภาคยานุวัติ (FJ517583) สายพันธุ์นี้ถูกพบในการผลิต
โปรตีเอสหลายและเอนไซม์ BAF1 fibrinolytic เป็นบางส่วน
บริสุทธิ์และโดดเด่น (Agrebi et al, 2010.).
ในการศึกษานี้ทำการเพาะเลี้ยงเชื้อความเครียด AN6 ได้รับการ
ดำเนินการในระดับปานกลางซึ่งมี Landy: กลูโคส 20 กรัม / ลิตร , Lglutamic
กรด 5 กรัม / ลิตร, สารสกัดจากยีสต์ 1 กรัม / ลิตร, K2HPO4 1 กรัม / ลิตร, MgSO4 (7H2O)
0.5 กรัม / ลิตร, โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัม / ลิตร, CuSO4 1.6 มิลลิกรัม / ลิตร, Fe2 (SO4) 3 1.2 mg / L และ MnSO4
0.4 มิลลิกรัม / ลิตร (Landy et al., 1948) การผลิตได้รับการดำเนินการใน 1 ลิตร
ขวดรูปกรวย 100 มิลลิลิตรของอาหารเหลวและเขย่าที่ 160 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 72 ชั่วโมงในการปั่นหมุน อุณหภูมิการหมักเริ่มต้น
มีค่าพีเอช 30 C และ 7.0 ตามลำดับ.
การประมาณค่าของกิจกรรมแหล่งคาร์บอน
กิจกรรมทำการเพาะเลี้ยงเชื้อที่ตรวจพบสำหรับน้ำซุปวัฒนธรรมของ
บี amyloliquefaciens AN6 โดยสามวิธีที่แตกต่างกันกล่าวคือ: น้ำมัน
ทดสอบรางเลื่อนยุบทดสอบและพื้นผิวตึงเครียด
วัด.
ทดสอบการกำจัดน้ำมัน
ทดสอบการกำจัดน้ำมันเป็นวิธีที่ใช้ในการวัด
ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนที่ชัดเจนซึ่งจะเกิดขึ้นหลังจากที่ลดลง
การแก้ปัญหาลดแรงตึงผิวที่มีใน ระหว่างเฟสน้ำมันน้ำ น้ำมัน
ทดสอบรางได้ดำเนินการตามวิธีการของ
โรดริกูและคณะ (2006) โดยการเพิ่ม 50 มลของน้ำกลั่นที่จะ Petri
จานที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 15 ซม. หลังจากนั้นปริมาณ 20 มลน้ำมันดีเซลถูก
ลงบนพื้นผิวของน้ำตามด้วยนอกเหนือจาก
10 มลของน้ำซุปใสวัฒนธรรม เส้นผ่าศูนย์กลางของรัศมีที่ชัดเจน
บนพื้นผิวน้ำมันวัดและเปรียบเทียบกับ 10 มลของ
น้ำกลั่นเป็นตัวควบคุมเชิงลบ.
ลดลงทดสอบการล่มสลาย
การทดสอบคุณภาพการล่มสลายลดลงได้ดำเนินการตาม
โปรโตคอลของเซฟและคณะ (2004) 2 มิลลิลิตรน้ำมันดีเซลถูกบันทึกอยู่ใน
แผ่น 96 microtitre ดี แผ่นถูก equilibrated 1 ชั่วโมงที่
37 C และ 5 มิลลิลิตรของน้ำซุปใสวัฒนธรรมถูกบันทึกอยู่ใน
พื้นผิวของน้ำมัน รูปร่างของหล่นบนพื้นผิวน้ำมันถูกพบ
หลังวันที่ 1 นาที ใสวัฒนธรรมที่ทำให้ลดลงน้ำมัน
ทรุดถูกระบุว่าเป็นผลบวกและที่ยังคงลดลง
ด้วยลูกปัดถูกยิงเป็นเชิงลบ น้ำกลั่นที่ใช้เป็น
ควบคุมเชิงลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการวัสดุและสารเคมี

น้ำมันดีเซลที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ได้จากปั๊มเบนซิน
ท้องถิ่น ( Sfax , ตูนิเซีย ) น้ำมันดีเซลที่ใช้เป็นรูปแบบการปนเปื้อน
เพราะมันเป็น polluant สิ่งแวดล้อมทั่วไป SDS ( anionic surfactant )
( non-ionic surfactant ทวีน 80 ) ซื้อมาจาก
Sigma และละลายในน้ำกลั่น พวกเขาถูกใช้เป็นสังเคราะห์
เคมี emulsifiers แสดงขณะทดสอบขนาน
กับสารลดแรงตึงผิวจาก an6 เมื่อย

จุลินทรีย์และเพาะเลี้ยงในงานก่อนหน้านี้ ในระหว่างโปรแกรมตรวจคัดกรองใน proteaseproducing
สายพันธุ์ ซึ่งมีศักยภาพอุตสาหกรรม
B , amyloliquefaciens an6 ที่แยกได้จากดินของผงซักฟอกอุตสาหกรรม
ในตูนิเซีย มันถูกระบุตามวิธีการ
วิธีที่อธิบายไว้ในคู่มือของตัวกำหนดแบคทีเรียวิทยาและ
พื้นฐานของ 16S rDNA ลำดับการวิเคราะห์ มันได้รับมอบหมาย
ภาคยานุวัติหมายเลข ( fj517583 ) สายพันธุ์นี้พบผลิต
หลายทาง และ baf1 ขาดเอนไซม์บางส่วน
บริสุทธิ์และลักษณะ ( agrebi et al . , 2010 ) .
ในการศึกษานี้ ( ผลิตโดย an6 สายพันธุ์
ดำเนินการตามแลนดี้ปานกลางซึ่งประกอบด้วย กลูโคส 20 กรัมต่อลิตร lglutamic
กรด 5 g / l , สารสกัด 1 กรัม / ลิตร ยีสต์ k2hpo4 1 กรัม / ลิตร MgSO4 ใ ( 7h2o )
0.5 กรัมต่อลิตร ปริมาณ 0.5 g / l , CuSO4 1.6 มิลลิกรัมต่อลิตร fe2 ( ปา ) 3 1.2 มิลลิกรัม ลิตรและ mnso4
0.4 mg / l ( แลนดี้ et al . , 2004 ) ผลิตออกมา 1
กรวยขวดที่มี 100 มิลลิลิตรของอาหารเหลว และหวั่นไหวที่ 160 รอบต่อนาที
72 H บนเครื่องปั่นหมุน การหมักอุณหภูมิเริ่มต้น
ค่า pH คือ 30 องศาเซลเซียสและ 7.0 ตามลำดับ การประมาณค่า (

) กิจกรรมกิจกรรมที่ตรวจพบในวัฒนธรรมอาหารของ
B amyloliquefaciens an6 โดยสามวิธีที่แตกต่างกันคือ : ทดสอบการปล่อยน้ำมันยุบ

การทดสอบและการวัดความตึงผิว น้ำมันแบบทดสอบ

แบบทดสอบน้ำมันเป็นวิธีที่จะวัด
เส้นผ่าศูนย์กลางของโซนล้างซึ่งเกิดขึ้นหลังจากปล่อย
สารลดแรงตึงผิวที่มีโซลูชั่นใน oil-water อินเตอร์เฟส . น้ำมัน
แบบทดสอบตามวิธีการของ
Rodrigues et al . ( 2006 ) โดยการเพิ่ม 50 มล. ของน้ำในจาน Petri
ที่มีเส้นผ่าศูนย์กลาง 15 ซม. หลังจากนั้น 20 ml น้ำมันดีเซลคือ
หล่นลงบนพื้นผิวของน้ำ ตามด้วย 2
10 ml ของน้ำซุปที่นำวัฒนธรรมเส้นผ่าศูนย์กลางของ
ทรงกลดชัดเจนบนพื้นผิวน้ำมันถูกวัดและเปรียบเทียบกับ 10 มล.
น้ำกลั่นเป็นตัวควบคุมลบ ทิ้งยุบทดสอบคุณภาพ

ปล่อยยุบทดสอบได้ปฏิบัติตาม
โปรโตคอลของยูเซฟ et al . ( 2004 ) 2 มล. ของน้ำมัน ดีเซล ได้เพิ่มมาด้วย microtitre
96 แผ่น แผ่นเป็น equilibrated ที่
เป็นเวลา 1 ชั่วโมง37 องศาเซลเซียสและ 5 มิลลิลิตรของน้ำซุปที่นำวัฒนธรรมเข้ามา
ผิวของน้ำมัน รูปร่างหยดน้ำบนพื้นผิวน้ำมันพบ
หลังจาก 1 นาที วัฒนธรรมนำที่ทำให้น้ำมันหยด
สลบไป พบเป็นผลบวก และที่ลดลงยังคง
ลูกปัดให้คะแนนเป็นลบ น้ำกลั่นที่ใช้เป็น

ควบคุมลบ