2.3. Experimental designIn vaccinat

2.3. Experimental design
In vaccination experiments, healthy grass carp were distributed
randomly into control group and bath immunization group (150 fish
per group). For bath immunization, fishwere immersed in 20mgL1
SWCNTs-Aera and the control groupwas immersed in PBS for 6 h. At
the end of the vaccination, grass carp were transferred to different
tanks without SWCNTs-Aera for 28 d. After 28 d, 15 fish in each
replicatewere euthanized in the laboratory throughwashrag soaked
with 20.0 g/m3 MS-222. Sampled fish were dissected immediately
with sterile scissors. The intestine, kidney and spleen were aseptically
removed from their abdominal cavity, separately, where five
fish were sampled for analyzing expression of seven immunerelated
genes through quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and
the experiment was performed in triplicate replicates. Thereafter,
the intestine of three fish (15 fish per replicate) were also collected
and pooled together as described elsewhere to extract microbial
DNA for deep sequencing [29]. After 2 d, the remaining fish (15 grass
carp in each replicate) were intramuscularly injected with
6.5  104 cfu mL1 A. hydrophila, kept for 10 days and thereafter
euthanized for sampling. Subsequently, the intestine was carefully
excised and maintained as above, which was also for extracting
microbialDNAfor deep sequencing. All the samples were placed into
sterile polypropylene centrifuge tubes and stored in 80 C until
DNA extraction. All experiments were performed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การทดลองออกแบบในการทดลองวัคซีน เฉาสุขภาพถูกแจกจ่ายในกลุ่มควบคุมและกลุ่มรับวัคซีนอาบน้ำ (150 ปลาสุ่มต่อกลุ่ม) การรับวัคซีนน้ำ fishwere ไปใน 20mgL 1SWCNTs-Aera และ groupwas ควบคุมไปใน PBS ใน h. 6 ที่จุดสิ้นสุดของวัคซีน เฉาถูกโอนย้ายที่แตกต่างกันถังโดยไม่ต้อง SWCNTs Aera สำหรับ 28 d หลัง 28 d, 15 ปลาในแต่ละreplicatewere euthanized ใน throughwashrag ห้องปฏิบัติการที่เปี่ยมล้นไปด้วยมี 20.0 g/m3 MS-222 ตัวอย่างปลาถูก dissected ทันทีด้วยกรรไกรกอซ ลำไส้ โรคไต และม้ามได้ asepticallyเอาออกจากช่องท้องของพวกเขา แยก ที่ห้าปลามีตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ของ immunerelated เจ็ดยีน โดยเชิงปริมาณแบบ real-time PCR (qRT-PCR) และทดลองที่ดำเนินการในการคัดลอกตัวเอง triplicate หลังจากนั้นลำไส้ของปลาสาม 15 ปลาต่อจำลอง) ยังถูกเก็บรวบรวมและรวมกันดังที่อื่นสารสกัดจุลินทรีย์ดีเอ็นเอในลำดับลึก [29] หลังจาก 2 d ปลาที่เหลือ (หญ้า 15ปลาคาร์ฟในแต่ละซ้ำ) ถูกฉีดเข้ากล้ามเนื้อด้วย6.5 104 cfu mL 1 A. hydrophila เก็บไว้ 10 วัน และหลังจากนั้นeuthanized สำหรับการสุ่มตัวอย่าง ในเวลาต่อมา ลำไส้ได้อย่างรอบคอบexcised และรักษาด้านบน ที่ถูกยังสำหรับการดึงข้อมูลmicrobialDNAfor ลึกลำดับ ตัวอย่างทั้งหมดมีอยู่ในชนิดใส่เครื่องหมุนเหวี่ยงท่อ และเก็บไว้ใน C 80 จนถึงDNA extraction. All experiments were performed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การออกแบบการทดลองในการทดลองฉีดวัคซีนหญ้าปลาคาร์พที่ดีต่อสุขภาพมีการกระจายสุ่มเป็นกลุ่มควบคุมและกลุ่มสร้างเสริมภูมิคุ้มกันโรคอาบน้ำ(150 ปลาต่อกลุ่ม) สำหรับการฉีดวัคซีนอาบน้ำ fishwere แช่อยู่ใน 20mgL 1 SWCNTs-Aera และ groupwas ควบคุมแช่อยู่ในพีบีเอสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง ในตอนท้ายของการฉีดวัคซีนที่หญ้าปลาคาร์พถูกย้ายไปที่แตกต่างกันถังโดยไม่ต้องSWCNTs-Aera 28 d หลังจาก 28 d 15 ปลาในแต่ละreplicatewere euthanized throughwashrag ในห้องปฏิบัติการแช่กับ20.0 g / m3 MS-222 ตัวอย่างปลาถูกชำแหละทันทีด้วยกรรไกรผ่านการฆ่าเชื้อ ลำไส้ไตและม้ามได้รับการปลอดเชื้อลบออกจากช่องท้องของพวกเขาแยกกันที่ห้าปลาตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของเจ็ดimmunerelated ยีนผ่านแบบ real-time PCR เชิงปริมาณ (qRT-PCR) และการทดลองที่ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าซ้ำ หลังจากนั้นลำไส้ในสามของปลา (15 ปลาต่อซ้ำ) ยังถูกเก็บและรวบรวมเข้าด้วยกันตามที่อธิบายไว้ที่อื่นๆ ในการสกัดจุลินทรีย์ดีเอ็นเอลำดับลึก[29] หลังจากนั้น 2 d ปลาที่เหลือ (15 หญ้าปลาคาร์พในแต่ละซ้ำ) ได้รับการฉีดที่มี6.5? 104 cfu มิลลิลิตร 1 A. hydrophila เก็บไว้เป็นเวลา 10 วันและหลังจากนั้นeuthanized สำหรับการสุ่มตัวอย่าง ต่อจากนั้นลำไส้ได้อย่างรอบคอบพอและการบำรุงรักษาดังกล่าวซึ่งเป็นสำหรับการสกัดmicrobialDNAfor ลำดับลึก ตัวอย่างทั้งหมดถูกวางลงในหลอด centrifuge โพรพิลีนผ่านการฆ่าเชื้อและเก็บไว้ใน? 80? C จนถึงการสกัดดีเอ็นเอ การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3
การออกแบบการทดลองในการทดลองวัคซีน , ปลาคาร์พหญ้าเพื่อสุขภาพมีการกระจาย
สุ่มในกลุ่มควบคุมและกลุ่มภูมิคุ้มกันบาท ( 150 ปลา
/ กลุ่ม ) สำหรับการอาบ fishwere แช่ใน 20mgl  1
swcnts Aera และกลุ่มควบคุมที่แช่ในช่องที่ 6 h .
ตอนท้ายของวัคซีน , หญ้าปลาคาร์พที่ถูกโอนไปยังถังที่แตกต่างกัน
โดยไม่ swcnts Aera 28 .หลังจาก 28 D 15 ปลาในแต่ละ
replicatewere euthanized ในห้องปฏิบัติการ throughwashrag แช่กับ 20.0 g / m3
ms-222 . ตัวอย่างปลาถูกตัดทันที
ด้วยกรรไกรที่ฆ่าเชื้อแล้ว ลำไส้ ไต และม้าม มี aseptically
ออกจากโพรงช่องท้องของพวกเขาต่างหากที่ 5
ปลา สุ่ม ตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์การแสดงออกของ immunerelated
7ยีนผ่านเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ ( ข้าพเจ้า PCR PCR ) และ
ทดสอบทั้งสามใบ ได้แก่ หลังจากนั้น
ลำไส้ของปลา 3 ( 15 ปลาต่อเลียนแบบ ) และยังรวบรวม
พูกันตามที่อธิบายไว้ที่อื่นเพื่อสกัดดีเอ็นเอจาก
สำหรับลำดับ 29 [ ลึก ] หลังจาก 2 D , ปลาที่เหลือ ( 15 หญ้า
ปลาคาร์พในแต่ละซ้ำ ) ทางฉีดด้วย
6