2. Preparation of plant crude extra

2. Preparation of plant crude extracts
The plant crude extracts were dissolved in 100% dimethyl sulfoxide; DMSO (Merck, Darmstadt,
Germany) to establish the 100 mg/mL stock solution which were diluted to the serial concentration of
0.1, 1, 10, 100 and 1,000 g/mL for screening activity test.
3. Cell Culture
The lung cancer cells (CHAGO) were grown as monolayers in RPMI 1640 medium
supplemented with 10% heat-inactivated Fetal bovine serum; FBS (Sigma, Taufkirchen, Germany),
1.5 mM L-glutamine, 25 mM HEPES buffer, 1 mL of 10,000 units/mL penicillin and 10,000 g/mL
streptomycin (Hyclone, Logan, UT, USA) for antibiotic reagent and 2 g NaHCO3 were added in each
liter of RPMI 1640 medium. The culture cells were maintained at 37ºC with 95% humidity atmosphere
in 5% CO2
incubator (Thermo Forma, Marietta, Ohio, USA).
4. Cell cytotoxicity assay
Lung cancer cell cytotoxicity assay was evaluated by the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyl-tetrazolium bromide (MTT assay) (Sigma, Saint Louis, MI, USA). Thecells (5104
cells/well)
were seeded in 96-well culture plate (Nunc, Roskilde, Denmark), cultured overnight and then treated
with the plant crude extracts at the concentrations of 0.1, 1, 10, 100 and 1000 µg/ml for 72 hr.
Genistein (10-2
- 10-11 M) is used as a positive control in comparison with the negative control DMSO.
After treatment, the medium was removed and the cells were submitted to MTT assay and analyzed
at the absorbance of 540 nm using a microplate reader (Tecan, Durham, NC, USA). The results were
shown as a plot between the percentage of cell viability (Y-axis) and the concentrations of the sample
(X-axis) and calculated the concentration of 50% cytotoxicity (IC50)based on the obtained graph.
Calculation of the percentage of cell viability
The percentage of cell viability = Absorbance of treated cells × 100
Absorbance of viable cells
The IC50 value could be calculated from the derived growth curve. It was defined as the 50%
reduction of the absorbance or 50% of the percentage of cell viability compared with cells that were
treated by DMSO as a negative control in the MTT assay.
5. Statistical analysis
The results were shown as mean ± standard error mean (S.E.M.) of five replicated
experiments (n = 5). Statistical analysis was performed using a one-way ANOVA for the analysis of
the test results and Duncan analysis of variance at the significance levels of p < 0.05 were
considered significantly. (SPSS®
version 14.0)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. การเตรียมสารสกัดจากน้ำมันพืชสารสกัดจากน้ำมันของพืชถูกละลายใน 100% dimethyl sulfoxide DMSO (เมอร์ค ดาร์มสเยอรมนี) เพื่อสร้างโซลูชันหุ้น 100 mg/mL ซึ่งถูกผสมให้เข้มข้นประจำของ0.1, 1, 10, 100 และ 1000 g/mL สำหรับทดสอบกิจกรรมการตรวจคัดกรอง3. เซลล์วัฒนธรรมเซลล์มะเร็งปอด (CHAGO) ได้เติบโตขึ้นเป็น monolayers ใน RPMI 1640เสริม ด้วย 10% ยกเลิกร้อนครรภ์วัวซีรั่ม FBS (ซิก Taufkirchen เยอรมนี),1.5 mM L-glutamine, 25 มม. HEPES บัฟเฟอร์ 1 มิลลิลิตรของยาเพนนิซิลลิน 10000 หน่วย/มลและ g 10000 mLเพิ่ม streptomycin (Hyclone โล UT สหรัฐอเมริกา) 2 กรัม NaHCO3 และรีเอเจนต์ที่ยาปฏิชีวนะในแต่ละลิตรของกลาง RPMI 1640 มีรักษาวัฒนธรรมเซลล์ที่ 37ºC 95% ความชื้นบรรยากาศใน 5% CO2บ่มเพาะวิสาหกิจ (เทอร์โม Forma นมารีเอต รัฐโอไฮโอ สหรัฐอเมริกา)4. เซลล์ cytotoxicity วิเคราะห์ปอดมะเร็งเซลล์ cytotoxicity วิเคราะห์ถูกประเมิน โดยการ 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-ฟีนิลได tetrazolium โบรไมด์ (MTT assay) (ซิก Saint Louis, MI สหรัฐอเมริกา) Thecells (5104เซลล์/ดี)มี seeded ในวัฒนธรรมดี 96 แผ่น (Nunc, Roskilde เดนมาร์ก), อ่างค้างคืน และรับการรักษาแล้วด้วยสารสกัดจากพืชน้ำมันที่ความเข้มข้น 0.1, 1, 10, 100 และ 1000 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml 72 ชมGenistein (10-2-10-11 M) ใช้เป็นตัวควบคุมบวกเมื่อเปรียบเทียบกับตัวควบคุมลบ DMSOหลังการรักษา สื่อที่ถูกเอาออก และเซลล์ถูกส่งไป MTT assay และวิเคราะห์ที่ absorbance ของ 540 nm ใช้อ่าน microplate (Tecan เดอแรม NC สหรัฐอเมริกา) ผลลัพธ์ได้แสดงเป็นพล็อตระหว่างเปอร์เซ็นต์ของชีวิตเซลล์ (แกน y) และความเข้มข้นของตัวอย่าง(แกน x) และคำนวณความเข้มข้นของ cytotoxicity 50% (IC50) ตามกราฟได้รับการคำนวณเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ชีวิตเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ชีวิต = Absorbance ของเซลล์บำบัด× 100 Absorbance ของเซลล์ทำงานได้ค่า IC50 สามารถคำนวณได้จากเส้นโค้งการเจริญเติบโตได้รับ มันถูกกำหนดเป็น 50%ลด absorbance หรือ 50 เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ชีวิตเปรียบเทียบกับเซลล์ที่มี%รักษา โดย DMSO เป็นตัวควบคุมค่าลบ MTT assay5. สถิติวิเคราะห์ผลลัพธ์ได้แสดงเป็น±หมายถึงข้อผิดพลาดมาตรฐานเฉลี่ย (S.E.M.) ห้าจำลองการทดลอง (n = 5) ทำการวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวสำหรับการวิเคราะห์ของผลการทดสอบและดันแคนผลต่างของการวิเคราะห์ระดับความสำคัญของ p < 0.05พิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ (โปรแกรม® รุ่น 14.0)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.
การเตรียมสารสกัดจากน้ำมันดิบพืชสารสกัดจากพืชน้ำมันดิบถูกกลืนหายไปใน100% dimethyl sulfoxide; DMSO (เมอร์ค, ดาร์มสตัด,
เยอรมนี) เพื่อสร้าง 100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรหุ้นวิธีการแก้ปัญหาที่ถูกปรับลดความเข้มข้นของอนุกรม
0.1, 1, 10, 100 และ 1,000 g / มิลลิลิตรสำหรับการคัดกรองการทดสอบกิจกรรม.
3 การเพาะเลี้ยงเซลล์เซลล์มะเร็งปอด (CHAGO) ถูกนำมาปลูกเป็น monolayers ใน RPMI 1640 กลางเสริมด้วยความร้อนที่ใช้งานในซีรั่มของทารกในครรภ์วัว10%; FBS (ซิก Taufkirchen เยอรมนี) 1.5 มิลลิ L-glutamine บัฟเฟอร์ 25 มิลลิ HEPES 1 มิลลิลิตร 10,000 หน่วย / มิลลิลิตรและยาปฏิชีวนะ 10,000 g / mL streptomycin (Hyclone โลแกน, ยูทาห์สหรัฐอเมริกา) สำหรับสารปฏิชีวนะและ 2 กรัม NaHCO3 ถูกเพิ่มเข้ามาในแต่ละลิตรRPMI 1640 กลาง เซลล์วัฒนธรรมได้รับการดูแลที่37ºCกับบรรยากาศที่มีความชื้น 95% ใน 5% CO2 ศูนย์บ่มเพาะ (เทอร์โม Forma รีเอตตาโอไฮโอสหรัฐอเมริกา). 4 พิษเซลล์ทดสอบปอดเซลล์มะเร็งทดสอบความเป็นพิษได้รับการประเมินโดย 3 (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5- diphenyl-tetrazolium โบรไมด์ (การทดสอบ MTT) (ซิกเซ็นหลุยส์, มิชิแกนสหรัฐอเมริกา) Thecells (5104เซลล์/ ดี) เมล็ดในแผ่นวัฒนธรรม 96 หลุม (Nunc, กิลด์, เดนมาร์ก), เพาะเลี้ยงคืนและรับการรักษาแล้วด้วยสารสกัดพืชที่ความเข้มข้นของ0.1, 1, 10, 100 และ 1,000 ไมโครกรัม / มล. เป็นเวลา 72 ชม. Genistein (02/10 - 11/10 M) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวกในการเปรียบเทียบกับการควบคุมเชิงลบ DMSO. หลังจากการรักษากลางจะถูกลบออกและเซลล์ที่ถูกส่งไปทดสอบและวิเคราะห์ MTT ที่ดูดกลืนแสง 540 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่าน microplate (ที่ Tecan, Durham, NC, USA) ผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่าพล็อตระหว่างร้อยละของการมีชีวิตเซลล์ (แกน Y) และความเข้มข้นของกลุ่มตัวอย่าง (แกน X) และคำนวณความเข้มข้นของพิษ 50% (IC50) ตามรูปแบบของกราฟที่ได้รับ. การคำนวณเปอร์เซ็นต์ ของเซลล์ที่มีชีวิตร้อยละของการมีชีวิตเซลล์= การดูดกลืนแสงของเซลล์ที่ได้รับการรักษา× 100 การดูดกลืนแสงของเซลล์ทำงานได้ค่า IC50 คำนวณได้จากอัตราการเจริญเติบโตที่ได้รับ มันถูกกำหนดให้เป็น 50% การลดลงของการดูดกลืนแสงหรือ 50% ของอัตราร้อยละของการมีชีวิตเซลล์เมื่อเทียบกับเซลล์ที่ได้รับการรักษาโดยDMSO เป็นตัวควบคุมเชิงลบในการทดสอบ MTT ได้. 5 การวิเคราะห์ทางสถิติผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่าค่าเฉลี่ย±หมายถึงข้อผิดพลาดมาตรฐาน (SEM) ในห้าของการจำลองแบบทดลอง(n = 5) การวิเคราะห์ทางสถิติที่ได้ดำเนินการโดยใช้ one-way ANOVA สำหรับการวิเคราะห์ของผลการทดสอบและการวิเคราะห์ความแปรปรวนดันแคนที่ระดับความสำคัญของp <0.05 ได้รับการพิจารณาอย่างมีนัยสำคัญ (SPSS®รุ่น 14.0)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . การเตรียมสารสกัดพืช
พืชสกัดละลายใน 100% เต๊ะ ; DMSO ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ เยอรมนี , ,
) สร้าง 100 mg / ml ซึ่งหุ้นโซลูชั่นเพื่อลดความเข้มข้นของอนุกรม
0.1 , 1 , 10 , 100 และ 1000  g / ml เพื่อคัดกรอง
กิจกรรม . 3 . การเพาะเลี้ยงเซลล์มะเร็งปอด เซลล์ (
chago ) เป็น monolayers RPMI 1640 ที่ปลูกในสื่อ
เสริมด้วย 10% fetal bovine serum inactivated ความร้อน ; FBS ( Sigma , Taufkirchen , เยอรมนี ) ,
L Glutamine 1.5 มม. 25 มม. ฮีเปส บัฟเฟอร์ 1 มิลลิลิตรของ 10 , 000 หน่วยต่อมิลลิลิตร เพนนิซิลลิน และ 10 , 000  g / ml
สเตรปโตมัยซิน ( hyclone โลแกน , ยูทาห์ , สหรัฐอเมริกา ) และใช้ยาปฏิชีวนะ NaHCO3 2 กรัม เพิ่มใน
RPMI 1640 แต่ละลิตร ) เซลล์วัฒนธรรมถูกเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ความชื้นº 95% 5% CO2 ในบรรยากาศ

เครื่องฟักไข่ ( Thermo - Marietta , โอไฮโอสหรัฐอเมริกา )
4 ความเป็นพิษต่อเซลล์มะเร็งปอด เซลล์มะเร็ง
( ประเมินโดย 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2 , 5 -
อีเธอร์ tetrazolium โบรไมด์ ( MTT assay ) ( USA Sigma , เซนต์ หลุยส์ มิ ) thecells ( 5  104
เซลล์ / )
ถูก seeded ใน 96 ดีวัฒนธรรมจาน ( ขณะนี้ , Roskilde , เดนมาร์ก ) เลี้ยงค้างคืนแล้วถือว่า
กับโรงงานสกัดที่ระดับความเข้มข้น 0.1 , 1 , 10 , 100 และ 1000 µ g / ml เป็นเวลา 72 ชม. ( 10-2
-
เจนิ 10-11 เมตร ) ใช้เป็นตัวควบคุมบวกในการเปรียบเทียบกับ DMSO ควบคุมลบ
หลังการรักษา สื่อจะถูกลบออกและเซลล์ที่ถูกส่งไปยัง MTT การทดสอบและวิเคราะห์
ที่ดูดกลืน 540 nm ใช้อ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( ทีแคน , Durham , NC , USA ) ผลลัพธ์ที่ได้
แสดงเป็นพล็อตระหว่างเปอร์เซ็นต์เซลล์ ( แกน Y ) และความเข้มข้นของตัวอย่าง
( แกน X ) และค่าความเข้มข้น 50% พิษ ( ic50 ) ตามการวิเคราะห์กราฟ การคำนวณค่า

เซลล์จำนวนเซลล์ = ค่ารักษาเซลล์× 100
การดูดกลืนแสงของ
วางเซลล์ค่า ic50 สามารถคำนวณได้จากการใช้เส้นโค้ง มันถูกกำหนดไว้ 50 %
ลดของการดูดกลืนแสง หรือ 50% ของค่าในเซลล์เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ได้รับ DMSO
เป็นตัวควบคุมเชิงลบใน MTT assay .
5 สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลได้แก่ค่าเฉลี่ย
แสดง±หมายถึงค่าความคลาดเคลื่อนมาตรฐาน ( s.e.m. ) ของน้ำมันหอมระเหย
ทดลอง ( n = 5 )วิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนสำหรับการวิเคราะห์
ผลการทดสอบและการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวที่ดันแคนระดับนัยสำคัญ 0.05 คือ
ถือว่าสำคัญ ( SPSS ®

รุ่น 14.0 )