A simple and sensitive high-perform

A simple and sensitive high-performance liquid chromatography (HPLC)-based method for complete monosaccharide composition analysis of oligosaccharides and glycoproteins is described. In this method, an oligosaccharide or glycoprotein is first hydrolyzed using an optimized method to give the constituent monosaccharides, which are subsequently labeled with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) as previously described by Honda et al. (Anal, Biochem. 180, 351-357, (1989)). The labeled monosaccharides are separated by reverse-phase HPLC using a column developed especially for this purpose, monitored by uv absorbance at 245 nm, and quantitated by their integration values relative to standards. Sialic acids are acid-labile keto-sugars. They are, therefore, released with neuraminidases or by mild acid hydrolysis and then converted with neuraminic acid aldolase to their corresponding mannosamine derivatives, which are then PMP-labeled, separated, and quantitated as described above. Individual sialic acids including N-acetyl and N-glycolyl neuraminic acids are well resolved and quantitated by this method. This method has proven to be highly sensitive, requiring only 1 pmol for reliable detection. Quantitative analysis of neutral and amino sugars from both oligosaccharide and glycoprotein samples can be achieved using one acid hydrolysis and a set of equal molar monosaccharide standards. Similarly, quantitation of sialic acids works equally well with both free oligosaccharide and glycoprotein samples. Monosaccharide compositions of oligosaccharides and glycoproteins determined by this method were found to be highly accurate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำคัญ และใช้งานง่ายประสิทธิภาพสูงเหลว chromatography (HPLC) -ใช้วิธีการสำหรับวิเคราะห์องค์ประกอบสมบูรณ์ monosaccharide oligosaccharides และ glycoproteins ได้อธิบายไว้ ในวิธีนี้ oligosaccharide หรือไกลโคโปรตีน เป็นแรก hydrolyzed โดยใช้วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพให้ monosaccharides ธาตุ ซึ่งต่อมาได้ติดป้ายชื่อ ด้วย 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยฮอนด้า et al. (Anal, Biochem. 180, 351-357, (1989)) Monosaccharides ป้ายจะถูกคั่น ด้วย HPLC กลับเฟสที่ใช้คอลัมน์ในการพัฒนาโดยเฉพาะสำหรับวัตถุประสงค์นี้ ตรวจสอบรังสียูวี absorbance ที่ 245 nm และ quantitated โดยเทียบกับมาตรฐานค่ารวมของพวกเขา กรด sialic เป็นกรด labile keto-น้ำตาล มี ดังนั้น ออก กับ neuraminidases หรือไฮโตรไลซ์กรดอ่อน และแปลงแล้ว ด้วย neuraminic aldolase กรดเพื่อความสอดคล้อง mannosamine อนุพันธ์ ซึ่งเป็นแล้ว PMP ป้าย แยก และ quantitated ตามข้าง ทาง กรด sialic แต่ละที่รวมถึง N glycolyl และ N-acetyl neuraminic กรดดีแก้ไข และ quantitated โดยวิธีนี้ วิธีนี้ได้พิสูจน์ให้ความไวสูง ต้อง 1 pmol ตรวจเชื่อถือได้ การวิเคราะห์เชิงปริมาณของกลาง และอะมิโนน้ำตาลจาก oligosaccharide และไกลโคโปรตีนตัวอย่างสามารถทำได้โดยใช้ไฮโตรไลซ์กรดหนึ่งและชุดมาตรฐาน monosaccharide เท่าสบ ในทำนองเดียวกัน การวิเคราะห์หาปริมาณกรด sialic งานเท่าเทียมกันดีฟรี oligosaccharide และไกลโคโปรตีนตัวอย่าง พบองค์ monosaccharide oligosaccharides และ glycoproteins ที่กำหนด โดยวิธีนี้จะแม่นยำสูง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่เรียบง่ายและมีความสำคัญที่มีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) วิธีชั่นสำหรับการวิเคราะห์องค์ประกอบที่สมบูรณ์ของโมโนแซ็กคาไรด์ oligosaccharides และไกลโคโปรตีนที่อธิบายไว้ ในวิธีการนี​​้เป็น oligosaccharide หรือไกลโคโปรตีนไฮโดรไลซ์เป็นครั้งแรกที่ใช้วิธีการที่ดีที่สุดที่จะให้ monosaccharides ส่วนประกอบซึ่งมีความโดดเด่นต่อมา 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยฮอนด้า, et al (Anal, Biochem. 180, 351-357, (1989)) monosaccharides ติดป้ายจะถูกคั่นด้วย HPLC กลับเฟสโดยใช้คอลัมน์พัฒนาโดยเฉพาะเพื่อการนี​​้การตรวจสอบโดยการดูดกลืนแสงยูวีที่ 245 นาโนเมตรและวัดปริมาณค่าโดยรวมของพวกเขาเมื่อเทียบกับมาตรฐาน กรด sialic เป็นน้ำตาล Keto กรด labile พวกเขาได้รับจึงออกมาพร้อมกับ neuraminidases หรือโดยการย่อยสลายกรดอ่อน ๆ แล้วแปลงที่มีกรด aldolase neuraminic สัญญาซื้อขายล่วงหน้า mannosamine ที่สอดคล้องกันของพวกเขาซึ่งเป็นแล้ว PMP ติดฉลากแยกและวัดปริมาณที่อธิบายข้างต้น กรด sialic ส่วนบุคคลรวมทั้ง N-acetyl และ N-glycolyl กรด neuraminic ได้รับการแก้ไขอย่างดีและวัดปริมาณด้วยวิธีนี้ วิธีนี้ได้พิสูจน์แล้วว่ามีความไวสูงต้องใช้เพียง 1 pmol สำหรับการตรวจสอบความน่าเชื่อถือ การวิเคราะห์เชิงปริมาณของน้ำตาลที่เป็นกลางและอะมิโนจาก oligosaccharide และตัวอย่างไกลโคโปรตีนสามารถทำได้โดยใช้กรดไฮโดรไลซิหนึ่งและชุดของมาตรฐานโมโนแซ็กคาไรด์กรามเท่ากับ ในทำนองเดียวกันปริมาณของกรด sialic ทำงานอย่างเท่าเทียมกันทั้งที่มีทั้งฟรีและ oligosaccharide ตัวอย่างไกลโคโปรตีน องค์ประกอบของ oligosaccharides โมโนแซ็กคาไรด์และไกลโคโปรตีนที่กำหนดโดยวิธีการนี​​้พบว่ามีความถูกต้องสูง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่ง่ายและไว high-performance liquid chromatography ( HPLC ) ซึ่งวิธีการที่สมบูรณ์สื่อการวิเคราะห์องค์ประกอบของโปรตีน คือ โอลิโกแซคคาไรด์ และอธิบาย ในวิธีนี้ , โอลิโกแซคคาไรด์ หรือไกลโคโปรตีนเป็นครั้งแรกจากการปรับวิธีให้โมโนแซ็กคาไรด์ฯ ,ซึ่งต่อมาชื่อกับ 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า โดยฮอนด้า et al . ( ทางทวารหนัก , วิชาเคมี 180 , 351-357 ( 1989 ) การติดป้ายโมโนแซ็กคาไรด์จะแยก 2 ขั้นตอนย้อนกลับโดยใช้คอลัมน์ที่พัฒนาโดยเฉพาะสำหรับวัตถุประสงค์นี้ การติดตามโดยการดูดกลืนแสงยูวีที่ 245 nm และผ่านโดยรวมค่าเทียบกับมาตรฐานกรดเซียริกเป็นกรดที่กระตุ้นด้วยน้ำตาล พวกเขาจึงปล่อย neuraminidases หรือกรดอ่อนและแปลงแล้วพร้อม neuraminic ลโดเลสกับอนุพันธ์กรด mannosamine ที่สอดคล้องกันของพวกเขา ซึ่งล้วนแล้ว PMP ป้าย แยก และผ่านตามที่อธิบายไว้ข้างต้นกรดเซียริกและบุคคลรวมทั้ง n-acetyl n-glycolyl neuraminic กรดดี และผ่านการแก้ไขโดยวิธีนี้ วิธีนี้ได้พิสูจน์ให้เป็นความไวสูง ต้องการเพียง 1 pmol ค้นหาที่เชื่อถือได้การวิเคราะห์เชิงปริมาณของกรดอะมิโนที่เป็นกลาง และน้ำตาลโอลิโกแซคคาไรด์จากทั้งสองตัวอย่างโปรตีนและสามารถทำได้โดยการไฮโดรไลซิสด้วยกรดและชุดเท่ากับมาตรฐานโมโนแซ็กคาไรด์กราม ของกรดเซียริก ในทํานองเดียวกัน เซลล์ทำงานเท่าเทียมกันดี มีทั้งฟรีและตัวอย่างโปรตีนหยาบ .องค์ประกอบของสื่อและโอลิโกแซคคาไรด์โปรตีนกำหนดโดยวิธีนี้ พบว่ามีความถูกต้องสูง