Step 1: DNA extracted from an organ

Step 1: DNA extracted from an organism, with the gene of interest, is cut into gene-size pieces with restriction enzymes. These enzymes read the nucleotide sequence of the DNA and recognize specific sequences. The enzymes then cut the DNA sequence by breaking the bonds between nucleotides in a DNA strand.

Step 2: Bacterial plasmids are cut with the same restriction enzyme. Plasmids are small circles of DNA in bacterial cells that are naturally present in addition to the bacteria's other DNA.

Step 3: The gene-sized DNA and cut plasmids are combined into one test tube. Some of the enzyme cut DNA pieces will combine with the cut plasmids and form recombinant DNA (or DNA in a 'new combination').

Step 4: The recombinant plasmids are then transferred into bacteria using either electroporation or heat shock. Electroporation uses mild pulses of electricity to disrupt the cell walls of the bacterium and create small holes. The plasmids are small enough to pass through the holes into the cell. Heat shock works in a similar fashion. However, rather than using electricity to create holes in the bacterium, it is done by alternating the temperature between hot and cold.

Step 5: The bacteria is grown on a culture dish and allowed to grow into colonies. All the colonies on all the plates (cultures) are called a gene library.

Step 6: The gene library is then screened in order to discover which bacterial colony is making copies of the one gene they are interested in. Library screening identifies colonies, which have that particular gene. Screening can be based on detecting the DNA sequence of the cloned gene, detecting a protein that the gene encodes, or the use of linked DNA markers. Therefore before library screening can be done, the scientist must know either the DNA sequence of the gene, or a very similar gene, the protein that the gene produces, or a DNA marker that has been mapped very close to the gene. When the bacteria multiply and replicate the recombinant DNA, the number of gene copies also increases, making gene or protein detection easier.

When the bacteria colony

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนที่ 1: ดีเอ็นเอที่สกัดจากสิ่งมีชีวิต มียีนที่น่าสนใจ ที่ถูกตัดเป็นชิ้นขนาดยีนด้วยเอนไซม์จำกัด เอนไซม์เหล่านี้อ่านลำดับนิวคลีโอไทด์ของดีเอ็นเอ และรู้จักลำดับที่เฉพาะเจาะจง เอนไซม์ตัดลำดับดีเอ็นเอ โดยทำลายพันธะระหว่างนิวคลีโอไทด์ใน DNA สาระขั้นตอนที่ 2: plasmids แบคทีเรียถูกตัด ด้วยเอนไซม์จำกัดเดียวกัน Plasmids มีวงกลมเล็ก ๆ ของดีเอ็นเอในแบคทีเรียดีเอ็นเออื่น ๆ ของเซลล์ที่มีอยู่ตามธรรมชาตินอกจากแบคทีเรียขั้นตอนที่ 3: ขนาดยีนดีเอ็นเอและ plasmids ตัดรวมกันเป็นหนึ่งหลอด บางส่วนของเอนไซม์ตัดชิ้นส่วนดีเอ็นเอจะรวมกับการตัด plasmids และฟอร์ม recombinant DNA หรือดีเอ็นเอใน 'ชุดใหม่')ขั้นตอนที่ 4: recombinant plasmids จะถูกโอนเข้าสู่แบคทีเรียใช้ช็อต electroporation หรือความร้อน Electroporation ใช้พัลส์อ่อนไฟฟ้าเพื่อทำลายผนังเซลล์ของแบคทีเรีย และสร้างรูเล็ก ๆ Plasmids มีขนาดเล็กพอที่จะผ่านรูลงในเซลล์ ช็อกความร้อนทำงานในลักษณะคล้ายกัน อย่างไรก็ตาม แทนที่จะใช้ไฟฟ้าสร้างหลุมในแบคทีเรีย จะทำโดยการสลับอุณหภูมิระหว่างร้อน และเย็นขั้นตอนที่ 5: แบคทีเรียคือปลูกบนจานเพาะ และอนุญาตให้เติบโตเป็นอาณานิคม อาณานิคมทั้งหมดบนแผ่นทั้งหมด (วัฒนธรรม) จะเรียกว่าห้องสมุดยีนขั้นตอนที่ 6: ห้องสมุดยีนแล้วฉายเพื่อค้นพบโคโลนีแบคทีเรียซึ่งทำให้สำเนาของยีนหนึ่งที่พวกเขาสนใจ ตรวจสอบไลบรารีเอกสารระบุอาณานิคม ซึ่งมียีนเฉพาะที่ คัดกรองสามารถอิงตรวจหาลำดับดีเอ็นเอของยีนโคลน ตรวจจับโปรตีนที่ยีน encodes หรือการใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอที่ถูกเชื่อมโยง ดังนั้น ก่อนตรวจสอบไลบรารีสามารถทำได้ นักวิทยาศาสตร์ต้องรู้ใดลำดับดีเอ็นเอของ ยีน ยีนคล้ายกันมาก โปรตีนที่ยีนก่อให้เกิด หรือเครื่องหมายดีเอ็นเอที่ถูกแมปมากใกล้กับยีน เมื่อแบคทีเรียคูณ และจำลอง recombinant DNA จำนวนของยีนคัดลอกนอกจากนี้ยังเพิ่มขึ้น ทำการตรวจหายีนหรือโปรตีนเมื่ออาณาจักรแบคทีเรีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอนที่ 1: ดีเอ็นเอที่สกัดจากสิ่งมีชีวิตที่มียีนที่น่าสนใจที่ถูกตัดเป็นชิ้นขนาดของยีนที่มีเอนไซม์ข้อ จำกัด เอนไซม์เหล่านี้อ่านลำดับเบสของดีเอ็นเอและตระหนักถึงลำดับที่เฉพาะเจาะจง เอนไซม์แล้วตัดลำดับดีเอ็นเอโดยทำลายพันธะระหว่างนิวคลีโอในดีเอ็นเอ

ขั้นตอนที่ 2: พลาสมิดแบคทีเรียจะถูกตัดด้วยเอนไซม์ จำกัด เดียวกัน พลาสมิดเป็นวงกลมขนาดเล็กของดีเอ็นเอในเซลล์แบคทีเรียที่มีอยู่ตามธรรมชาติในนอกจากดีเอ็นเออื่น ๆ ของแบคทีเรีย

ขั้นตอนที่ 3: ดีเอ็นเอของยีนที่มีขนาดและตัดพลาสมิดจะรวมกันเป็นหนึ่งในหลอดทดลอง บางส่วนของเอนไซม์ตัดชิ้นดีเอ็นเอจะรวมกับพลาสมิดตัดและรูปแบบดีเอ็นเอ (DNA หรือใน 'รวมกันใหม่')

ขั้นตอนที่ 4: พลาสมิด recombinant จะถูกโอนเข้าไปในแบคทีเรียโดยใช้ electroporation หรือช็อตความร้อน Electroporation ใช้พัลส์อ่อนของการผลิตไฟฟ้าที่จะทำลายผนังเซลล์ของแบคทีเรียและสร้างรูเล็ก ๆ พลาสมิดที่มีขนาดเล็กพอที่จะผ่านเข้าไปในหลุมเซลล์ ช็อตความร้อนทำงานในลักษณะคล้าย แต่แทนที่จะใช้ไฟฟ้าเพื่อสร้างหลุมในแบคทีเรียก็จะกระทำโดยการสลับระหว่างอุณหภูมิร้อนและเย็น

ขั้นตอนที่ 5: แบคทีเรียที่ปลูกบนจานวัฒนธรรมและได้รับอนุญาตที่จะเติบโตเป็นอาณานิคม อาณานิคมทั้งหมดในทุกแผ่น (วัฒนธรรม) จะเรียกว่าห้องสมุดยีน

ขั้นตอนที่ 6:. ห้องสมุดยีนคัดเลือกแล้วเพื่อที่จะค้นพบที่อาณานิคมแบคทีเรียจะทำสำเนาของยีนหนึ่งที่พวกเขามีความสนใจในการตรวจคัดกรองห้องสมุดระบุอาณานิคมที่มียีนโดยเฉพาะอย่างยิ่ง การตรวจคัดกรองจะขึ้นอยู่กับการตรวจสอบลำดับดีเอ็นเอของยีนที่โคลนตรวจสอบโปรตีนที่ยีนเข้ารหัสหรือการใช้การเชื่อมโยงเครื่องหมายดีเอ็นเอ ดังนั้นก่อนที่จะคัดกรองห้องสมุดสามารถทำได้นักวิทยาศาสตร์จะต้องรู้ทั้งลำดับดีเอ็นเอของยีนหรือยีนที่คล้ายกันมากโปรตีนที่ยีนผลิตหรือเครื่องหมายดีเอ็นเอที่ได้รับการแมปอย่างใกล้ชิดกับยีน เมื่อเชื้อแบคทีเรียคูณและทำซ้ำดีเอ็นเอจำนวนสำเนายีนยังเพิ่มขึ้นทำให้ยีนหรือโปรตีนการตรวจสอบได้ง่ายขึ้น

เมื่ออาณานิคมของแบคทีเรีย โปรตีนที่ยีนผลิตหรือเครื่องหมายดีเอ็นเอที่ได้รับการแมปอย่างใกล้ชิดกับยีน เมื่อเชื้อแบคทีเรียคูณและทำซ้ำดีเอ็นเอจำนวนสำเนายีนยังเพิ่มขึ้นทำให้ยีนหรือโปรตีนการตรวจสอบได้ง่ายขึ้น เมื่ออาณานิคมของแบคทีเรีย โปรตีนที่ยีนผลิตหรือเครื่องหมายดีเอ็นเอที่ได้รับการแมปอย่างใกล้ชิดกับยีน เมื่อเชื้อแบคทีเรียคูณและทำซ้ำดีเอ็นเอจำนวนสำเนายีนยังเพิ่มขึ้นทำให้ยีนหรือโปรตีนการตรวจสอบได้ง่ายขึ้น เมื่ออาณานิคมของแบคทีเรีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขั้นตอนที่ 1 : ดีเอ็นเอที่สกัดจากสิ่งมีชีวิตที่มียีนที่น่าสนใจ , ตัดเป็นชิ้นขนาดกับยีนของเอนไซม์ . เอนไซม์เหล่านี้อ่านลำดับนิวคลีโอไทด์ของดีเอ็นเอและจำเฉพาะดังนี้ แล้วตัดดับเอนไซม์ดีเอ็นเอโดยการทำลายพันธะระหว่างเบสในดีเอ็นเอเกลียวขั้นตอนที่ 2 : แบคทีเรียเพื่อตัดด้วยเอ็นไซม์จำกัดเหมือนกัน พลาสมิดเป็นวงกลมเล็ก ๆของ DNA ในเซลล์แบคทีเรียที่เป็นธรรมชาติ ปัจจุบันนอกจากแบคทีเรียอื่นๆ ดีเอ็นเอขั้นตอนที่ 3 : ขนาดและตัดพลาสมิดดีเอ็นเอ ยีน จะรวมกันเป็นหนึ่งหลอด บางส่วนของเอนไซม์ตัดดีเอ็นเอชิ้นจะรวมกับการตัดพลาสมิดและรูปแบบดีเอ็นเอ ( DNA ในการรวมกันใหม่ หรือ ' ' )ขั้นตอนที่ 4 : พลาสมิดพาหะนั้นจะถูกโอนเข้าไปในแบคทีเรีย ใช้ electroporation หรือดูดความร้อน electroporation ใช้อ่อนกะพริบไฟทำลายผนังเซลล์ของแบคทีเรีย และสร้างรูเล็ก ๆ พลาสมิดที่มีขนาดเล็กพอที่จะผ่านรูเข้าไปในเซลล์ ช็อกความร้อนทำงานในแฟชั่นที่คล้ายกัน อย่างไรก็ตาม มากกว่าการใช้ไฟฟ้าเพื่อสร้างหลุมในแบคทีเรีย มันทำได้โดยสลับระหว่างอุณหภูมิร้อนและเย็นขั้นตอนที่ 5 : แบคทีเรียที่เติบโตในวัฒนธรรมอาหารและได้รับอนุญาตให้เติบโตมาเป็นอาณานิคม ทั้งหมดอาณานิคมบนแผ่นทั้งหมด ( วัฒนธรรม ) จะเรียกว่ายีนที่ห้องสมุดขั้นตอนที่ 6 : ยีนห้องสมุดแล้วคัดเพื่อที่จะค้นพบซึ่งโคโลนีแบคทีเรียทำให้สำเนาของยีนที่พวกเขาสนใจ การคัดเลือกห้องสมุดระบุอาณานิคมซึ่งมียีนที่เฉพาะเจาะจง การคัดกรองสามารถขึ้นอยู่กับการตรวจหาดีเอ็นเอลำดับของโคลนยีน การตรวจหาโปรตีนที่ยีน encodes หรือใช้เชื่อมเครื่องหมายดีเอ็นเอ ดังนั้นก่อนที่จะคัดกรองห้องสมุด สามารถทําได้ นักวิทยาศาสตร์ต้องรู้ด้วยดีเอ็นเอลำดับของยีน หรือยีนที่คล้ายกันมาก , ยีนที่ผลิตโปรตีน หรือดีเอ็นเอเครื่องหมายที่ได้รับการแมปที่ใกล้เคียงกับยีน เมื่อแบคทีเรียคูณและเลียนแบบดีเอ็นเอ จำนวนสำเนาของยีนยีนหรือโปรตีนเพิ่มขึ้น ทำให้การตรวจสอบง่ายขึ้นเมื่อแบคทีเรียโคโลนี