2.4. Determination of carbohydrates

2.4. Determination of carbohydrates
Before analysis, samples were deproteinized using anhydrous
methanol (1:10, v/v) for 24 h. Supernatant was collected,
centrifuged at 10,000 rpm for 5 min and stored at 4 8C for further
analysis. All preparations were carried out in duplicate.
2.4.1. High-performance anion exchange chromatography with
pulsed amperometric detection (HPAEC-PAD) analysis
Mono-, disaccharides and GOS were analyzed by HPAEC-PAD in
an ICS2500 Dionex system (Dionex Corporation, Sunnyvale, CA) consisting of a GP50 gradient pump, and ED50 electrochemical
detector with a gold working electrode and Ag/AgCl reference
electrode. Data acquisition and processing were performed with
Chromeleon version 6.7 software (Dionex Corporation). For
preparation of eluents, MilliQ water (Milli-Q Synthesis A10
system; Millipore, Billerica, MA, USA), NaOH (50%, w/v) and
NaOAc (Fluka, Germany) were used. All eluents were degassed by
flushing with helium for 25 min.
Separations were performed following the method described in
Splechtna et al. (2006). Elution was at room temperature on a
CarboPac PA-1 column (250 mm  4 mm) connected to a CarboPac
PA-1 (50 mm  4 mm) guard column. Eluent A (100 mmol/L
NaOH) and eluent B (100 mmol/L NaOH and 50 mmol/L NaOAc)
were mixed to form the following gradient: 100% A from 0 to
20 min and 0–100% B from 20 to 70 min. After each run, the column
was washed for 10 min with 100% of eluent C (100 mmol/L NaOH
and 1 mol/L NaOAc) and re-equilibrated for 15 min with the
starting conditions of the employed gradient.
Two milliliters of methanolic extracts were evaporated,
reconstituted in 1 mL of bidistilled water and filtered through a
nylon Millipore FH membrane (0.22 mm) (Bedford, MA) before
injection (20 mL). Separations were performed at a flow rate of
1 mL/min. Quantification of GOS was performed by external
calibration using a standard solution of raffinose with the
regression coefficient of calibration curve higher than 0.99. All
analyses were carried out in duplicate and data were expressed as
mean  standard deviation (SD).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การกำหนดของคาร์โบไฮเดรตก่อนการวิเคราะห์ ตัวอย่างที่ deproteinized ใช้ไดเมทานอล (1:10, v/v) สำหรับ 24 h. Supernatant รวบรวมcentrifuged ที่ 10000 rpm สำหรับ 5 นาที และเก็บไว้ที่ 4 8C สำหรับเพิ่มเติมวิเคราะห์ เตรียมการทั้งหมดได้ดำเนินการออกสำเนา2.4.1. ประสิทธิภาพสูง anion chromatography แลกเปลี่ยนด้วยพัล amperometric วิเคราะห์ตรวจสอบ (HPAEC แผ่น)ขาวดำ disaccharides และ GOS ได้วิเคราะห์ โดย HPAEC แผ่นในมีระบบ ICS2500 Dionex (Dionex Corporation, Sunnyvale, CA) ประกอบด้วยเครื่องสูบน้ำไล่ระดับ GP50 และไฟฟ้า ED50เครื่องตรวจจับทองทำงานอิเล็กโทรดอ้างอิง Ag/AgClอิเล็กโทรด ซื้อข้อมูลและประมวลผลได้ดำเนินการด้วยChromeleon รุ่น 6.7 ซอฟต์แวร์ (Dionex Corporation) สำหรับการเตรียมการของ eluents, MilliQ น้ำ (Q สังเคราะห์ A10ระบบ มาก Billerica, MA, USA), NaOH (50%, w/v) และมีใช้ NaOAc (Fluka เยอรมนี) Eluents ทั้งหมดถูก degassed โดยลบ ด้วยฮีเลียมใน 25 นาทีประโยชน์ได้ดำเนินการตามวิธีที่อธิบายไว้ในSplechtna et al. (2006) Elution ได้ที่อุณหภูมิห้องในคอลัมน์ 1 CarboPac PA (250 มม. 4 มม.) เชื่อมต่อกับ CarboPacPA 1 (50 มม. 4 มม.) รักษาคอลัมน์ Eluent A (100 mmol/LNaOH) และ eluent B (100 mmol/L NaOH และ 50 mmol/L NaOAc)รวมแบบไล่ระดับต่อไปนี้: 100% A 020 นาทีและ 0-100% B 20 ไป 70 นาที หลังจากแต่ละรัน คอลัมน์มีเครื่องซักผ้าสำหรับ 10 นาที 100% ของ eluent C (100 mmol/L NaOHและ 1 โมล/L NaOAc) และ equilibrated ใหม่สำหรับ 15 นาทีกับการเงื่อนไขเริ่มต้นของการไล่ระดับสีเจ้าMilliliters สองสารสกัดจาก methanolic หายไปreconstituted ใน 1 mL bidistilled น้ำ และกรองผ่านการไนล่อน FH มากเมมเบรน (0.22 มิลลิเมตร) (กลาสโกว์ MA) ก่อนฉีด (20 มล.) ประโยชน์ได้ดำเนินการที่อัตราการไหลของ1 mL/นาที นับของ GOS ถูกดำเนินการ โดยภายนอกการปรับเทียบโดยใช้สารละลายมาตรฐานของ raffinose มีการสัมประสิทธิ์การถดถอยของการเทียบเส้นโค้งมากกว่า 0.99 ทั้งหมดวิเคราะห์ได้ดำเนินการซ้ำ และมีแสดงข้อมูลเป็นหมายถึง ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ความมุ่งมั่นของคาร์โบไฮเดรต
ก่อนการวิเคราะห์ตัวอย่างโดยใช้โปรตีนต่ำปราศจาก
เมทานอล (01:10, v / v) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ใสถูกเก็บรวบรวม,
หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีและเก็บไว้ที่ 4 8C ต่อการ
วิเคราะห์ การเตรียมการทั้งหมดถูกดำเนินการในที่ซ้ำกัน.
2.4.1 ประสิทธิภาพสูงโครมาแลกเปลี่ยนไอออนที่มี
การตรวจสอบวัดดังชีพจร (HPAEC-PAD) การวิเคราะห์
เดี่ยว, disaccharides และ GOS วิเคราะห์ HPAEC-PAD ใน
ระบบ Dionex ICS2500 (Dionex คอร์ปอเรชั่นซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย) ประกอบด้วยปั๊มลาด GP50 และ ED50 ไฟฟ้า
เครื่องตรวจจับที่มีทองทำงานและอิเล็กโทรด Ag / AgCl อ้างอิง
ขั้ว เก็บข้อมูลและการประมวลผลได้รับการดำเนินการกับ
Chromeleon รุ่น 6.7 ซอฟแวร์ (Dionex คอร์ปอเรชั่น) สำหรับ
การเตรียมความพร้อมของตัวชะน้ำ MilliQ (พัน-Q สังเคราะห์ A10
ระบบคบิลเลริกา, MA, USA), NaOH (50% w / v) และ
NaOAc (Fluka, เยอรมนี) ถูกนำมาใช้ ตัวชะทั้งหมดถูก degassed โดย
ล้างด้วยก๊าซฮีเลียมสำหรับ 25 นาที.
แยกได้ดำเนินการดังต่อไปนี้วิธีการอธิบายใน
Splechtna และคณะ (2006) elution เป็นที่อุณหภูมิห้องใน
CarboPac PA-1 คอลัมน์ (250 มม? 4 มม) เชื่อมต่อกับ CarboPac
PA-1 (50 มม? 4 มม) คอลัมน์ยาม ตัวชะ (100 mmol / L
NaOH) และตัวชะ B (100 mmol / L NaOH และ 50 mmol / L NaOAc)
มีผสมในรูปแบบการไล่ระดับสีดังต่อไปนี้: 100% จาก 0 ถึง
20 นาทีและ 0-100% B จาก 20 70 นาที หลังจากทำงานในแต่ละคอลัมน์
ถูกล้างเป็นเวลา 10 นาทีกับ 100% ของชะ C (100 mmol / L NaOH
และ 1 mol / L NaOAc) และอีกครั้ง equilibrated 15 นาทีกับ
เงื่อนไขเริ่มต้นของการไล่ระดับสีลูกจ้าง.
สองมิลลิลิตรของเมทานอล สารสกัดถูกระเหย
สร้างขึ้นใน 1 มิลลิลิตรของน้ำ bidistilled และกรองผ่าน
เยื่อไนลอนค FH (0.22 มม) (Bedford, MA) ก่อน
การฉีด (20 มิลลิลิตร) แยกได้ดำเนินการที่อัตราการไหลของ
1 มิลลิลิตร / นาที ปริมาณ GOS ได้ดำเนินการโดยภายนอก
การสอบเทียบโดยใช้สารละลายมาตรฐานของ raffinose กับ
ค่าสัมประสิทธิ์การถดถอยของเส้นโค้งการสอบเทียบที่สูงกว่า 0.99 ทั้งหมด
การวิเคราะห์ได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันและข้อมูลที่ได้แสดงเป็น
หมายความว่าอย่างไร ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การหาปริมาณคาร์โบไฮเดรต
ก่อนการวิเคราะห์ตัวอย่าง โดยใช้เมทานอล ( 1 : 10 deproteinized รัส
V / V ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ที่นำกำลังเก็บระดับที่ 10 , 000 รอบต่อนาที
5 นาที และเก็บไว้ที่ 4 8C สำหรับการวิเคราะห์ต่อไป

การเตรียมการและดำเนินการซ้ำ .
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโตกราฟีประสิทธิภาพสูงด้วยการตรวจหา ( hpaec-pad สำคัญ

) การวิเคราะห์โมโน - ,น้ำตาลโมเลกุลคู่ และ โก โดยใช้ hpaec-pad ใน
เป็น ics2500 DIONEX ระบบ ( DIONEX Corporation , Sunnyvale , CA ) ประกอบด้วย gp50 ลาดปั๊มและเครื่องตรวจจับ ed50 ไฟฟ้าเคมี
กับทองทำงานไฟฟ้าและ AG 0.46% อ้างอิง
อิเล็กโทรด การเก็บข้อมูลและการประมวลผลการวิจัยด้วย
chromeleon รุ่น 6.7 ซอฟแวร์ ( DIONEX Corporation ) สำหรับการเตรียมการของตัวชะ
,milliq น้ำ ( milli-q การสังเคราะห์ A10
ระบบ มิลลิ , โตเกียว , MA , USA ) , NaOH 50% ( w / v )
naoac ( fluka , เยอรมนี ) สถิติที่ใช้ ทั้งหมดตัวชะเป็น degassed โดย
ล้างด้วยฮีเลียมสำหรับ 25 นาที
แยกแสดง ต่อวิธีการที่อธิบายไว้ใน
splechtna et al . ( 2006 ) ได้มาที่อุณหภูมิห้องบน
carbopac pa-1 คอลัมน์ ( 250 มม.  4 มิลลิเมตร ) เชื่อมต่อกับ carbopac
pa-1 ( 50 มม.  4 มม. ) คอลัมน์ ยาม ตัว ( 100 มิลลิโมล / ลิตร
NaOH ) และตัว B ( 100 มิลลิโมล / ลิตร NaOH และ 50 มิลลิโมล / ลิตร naoac )
ถูกผสมรูปแบบการไล่ระดับสีต่อไปนี้ : 100 % เป็น 0
20 นาทีและ 0 – 100% B จาก 20 ถึง 70 นาที หลังจากเรียกใช้แต่ละ คอลัมน์
ถูกล้าง สำหรับ 10 นาทีกับ 100% ของตัว C ( 100 มิลลิโมล / ลิตร NaOH และ naoac 1 mol / l
) และอีก 15 นาทีด้วย
equilibratedเริ่มใช้เงื่อนไขของการไล่ระดับสี .
2 มิลลิลิตรของสารสกัดเมทานอลเป็นระเหย
สร้างใน 1 มิลลิลิตร bidistilled น้ำและกรองผ่านเมมเบรน ( 0.22 มิลลิ
ไนล่อน 4 มม. ) ( เบดฟอร์ด , MA ) ก่อน
ฉีด ( 20 ml . ) การแยกผู้ป่วยที่อัตราการ ไหลของ
1 มิลลิลิตร / นาที ปริมาณของรัฐโดยใช้ภายนอก
การปรับใช้โซลูชั่นมาตรฐานของแรฟฟิโนสกับ
regression coefficient ของรูปโค้งสูงกว่า 0.99 .
วิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมดออกมาซ้ำและข้อมูลถูกแสดงเป็น
หมายถึง  ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD )